荧光探针及其生物学研究中的应用.ppt

LOGO,有机荧光探针及其生物学研究中的应用,由Nordri（ ） 设计提供,LOGO,由Nordri（ ） 设计提供,LOGO,1.金属离子检测、PH值测定,由Nordri（ ） 设计提供,金属离子检测:以Cd2+荧光探针为例。Xiaojun Peng研究组合成了一个能专识别Cd2+离子的荧光探针，该探针具有较好的细胞穿透性，并且首次被应用于活体细胞内Cd2+的检测，其机理为分内电荷转移机理(IcT)。探针的最大发射波长为656nm与Cd2+络合后蓝移至597nln，而Zn2+及其它金属离子没有干扰,PH值测定：Xiaojun Peng 研究组设计合成了一个BODIPY类pH荧光探针，该探针具有很好的化学稳定性，检测范围为pH7.6一9.4, 荧光强度随pH变化15倍之多，而且有很好的水溶性，,LOGO,免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，将已知的抗原或者抗体标记上荧光探针，再用这种带有荧光探针的抗原或者抗体作为分子探针去检测组织内的抗体或者抗原，然后用相应的荧光采集器检测荧光，从而确定抗原或者抗体的位置，性质，甚至可以辅以定量检测技术，定量检测抗原或者抗体。 。目前最为常用的有机荧光探针为异硫氰酸荧光素（FITC），橙黄色，性质稳定，可保存两年以上，最大吸收光谱为490-495nm，最大发射光谱为520-530nm，,2.免疫学应用,由Nordri（ ） 设计提供,LOGO,近年来，随着分子生物学的飞速发展，有机荧光探针在核酸的检测中发挥着重要的作用。,3.核酸检测,由Nordri（ ） 设计提供,一：荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 常用的探针：TaqMan荧光探针 ，SYBR荧光染料 二：荧光原位杂交 ：荧光原位杂交技术原理是将DNA探针用生物素和毛地黄毒苷等荧光染料标记，然后将标记的探针直接原位杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异结合，通过荧光杂交信号来检测DNA序列在染色体或DNA纤维上的定位、定性、相对定量分析。,LOGO,荧光探针是一种极好的生物分子传感器,具备灵敏度高反应时间迅速等特点，特别是在检测小分子等方面，近年来在细胞学检测中应用十分广泛。,4.细胞学应用,由Nordri（ ） 设计提供,细胞凋亡的检测 : 活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定 caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度,细胞表面特征的检测: 细胞表面通常表达大量的分子，如：CD分子，细胞因子受体等分子，这些分子在不同的细胞表达的种类和数量是不同的，从而不同的细胞有着不同的表面分子表达谱，因此可以用相应的有机荧光探针对细胞表面的分子进行标记，或者用细胞表面的分子的单克隆抗体的荧光探针进行标记，从而实现对细胞表面特征的检测。如NK细胞表面的CD56分子，T细胞表面的CD3分子，CD40L分子等,LOGO,以上概述了部分类型的有机荧光探针及在生物学研究中的应用情况，其实它的应用远不止于此。随着荧光探针技术的不断发展和完善,必然会给目前较为热门的基因组学、蛋白质组学、生物芯片以及等药物作用机制等领域带来新的发展契机,提供非常有价值的方法和信息。,由Nordri（ ） 设计提供,LO