糖和苷01b修改.ppt

1,要求：能设计提取分离流程 作业,提取分离 上述 天然药材中的 苷类成分, 试写出流程图。 简要说明各步主要目的和原理,2,8.5 糖和苷的分离方法 (II) - 按 分离 目的 分类 ,8.4 糖和苷的分离方法 (I) - 按 分离 原理 分类 ,3,分离目的: 1. 2.,分离 混合糖类 或 苷类 细分 总糖、总苷,去 非糖杂质 制备 总糖、总苷,常用方法 ?,试写出 分离纯化 糖类物质 的,参考总论 的 思路 框架,检查,4,5,第八章 糖和苷 8.1 结构与分类（复习） 掌握 8.2 理化性质 熟悉、了解 8.3 提取方法 掌握 8.4 分离方法 (I) 掌握 8.5 分离方法 (II) 掌握 8.6 检识方法 熟悉、了解,各 论,- 按 分离 原理 分类,- 按 分离 目的 分类,试写出糖类常用分离方法， 下同,7, 8.4 糖和苷的分离方法 (I) - 按 分离 原理 分类,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离 8.4.2 利用 酸碱性 差异 分离 或解离度 8.4.3 利用 吸附性 差异 分离 8.4.4 利用 分子量 差异 分离,（试简述）,8,8.4.1.1 溶剂 处理 法 8.4.1.2 试剂 沉淀 法,一. 二. 三.,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离,一. 铅 盐 沉淀 法 二. 铜 盐 - - - - - - 三. 加蛋白 - - - -剂,抽提 法,沉淀 法,萃取 法,（试简述）,9,一. 溶 剂 抽提 法,- 梯度 - - 分步 -,1. 用途: ( 1 ) 去杂质：多为油脂类（脱脂） ( 2 ) 分 离： 苷元；单糖 苷 或 少糖苷；“多糖”苷。,2. 原料： 醇提物（混合物） 3. 流程实例： 见下页,可抑制酶解,天然药材 ,乙醇提取,乙醇提取液,减压浓缩,浓缩物,(醇提物),见讲义,( 1 ) 去杂质： 强 亲脂性 （脱脂） ( 2 ) 分 离： 苷元 / “多”糖苷 / “少” 糖苷或单糖 苷,（ ）,石油醚提取,残留物,11,石油醚部分 （多为 强 杂质）,目的,（脱脂 ）,可抑制酶解,亲脂性,残留物,天然药材 ,乙醇提取（ ）,乙醇提取液,减压回收乙醇,浓缩物,石油醚提取,t2O或HCl3提取,提取物（含 ）,苷元,(醇提物),见讲义,12,EtOAc提取,n-BuOH提取,残留物,EtOAc提取物 （含 或 ）,残留物,提取物（ ）,（ ）,残留物,小分子成分,含糖较多的苷,单糖苷,少糖苷,含,13,上一页,注： (1) 各部分都有获得苷的可能。,(2) 也可用 水提分级法 可初步分离 各种不同性质的多糖, 依次用 冷水、 冷稀碱液、 热水、 热稀碱液 进行抽提分离, 得到不同性质的多糖后, 再合用它法纯化。,14,要求：能设计提取分离流程 作业,提取分离 上述 天然药材中的 苷类成分, 试写出流程图。 简要说明各步主要目的和原理,15,8.4.1.1 溶剂 处理 法 8.4.1.2 试剂 沉淀 法,一. 二. 三.,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离,一. 铅 盐 沉淀 法 二. 铜 盐 - - - - - - 三. 加蛋白 - - - -剂,抽提 法,沉淀 法,萃取 法,（试简述）,16,二. 溶剂 沉淀法 分级 沉淀 法 （分级 溶解 法） (一) 水提 醇沉 法 (二) 醇溶 醚沉 法 应用（用途）： 分离 多糖 ( 分子量不同的各类多糖 ) 溶解性不同,17,(一) 水提醇沉法 - 乙醇分级沉淀 （或分级溶解法）,实验装置图:,18,药 材,水提,浓缩,浓缩液,(含混合多糖),逐次加乙醇 （等量或数倍量） 分别达到不同浓度,分段醇沉 分段收集,一般分子量不同,19,注意事项： 1.pH： 通常是 pH （稳定，免酸解） 酸性多糖： pH （pH时，以离子 形式存在，成盐，并非多糖原型） 2. 操作迅速，以免 酸水解。,20,(二) 醇溶醚沉 了解,?,21,多糖,转化,多糖衍生 物醇溶液,（如甲醚化合物、或 乙酸酯等乙酰化合物）,分段醚沉 分段收集,不同多糖 粗品沉淀,反复醇溶醚沉,（直至物理常数恒定， 如旋光 度测定， 电泳检查等 ）,终产品,（HPLC测定纯度）,22,二. 溶剂 沉淀法 分级 沉淀 法 （分级 溶解 法） (一) 水提 醇沉 法 (二) 醇溶 醚沉 法 应用（用途）： 分离 多糖 ( 分子量不同的各类多糖 ) 溶解性不同,23,24,溶剂 处理 法,一. 抽提 法 二. 沉淀 法 比较 三. 萃取 法,利用 溶解度 差异 分离,25,. 萃取法 原料：多糖水提液（浓缩液） 应用：似抽提法 溶剂：似抽提法，尤其是n-BuOH多用 注意：应防止水解,26,8.4.1.1 溶剂 处理 法 8.4.1.2 试剂 沉淀 法,一. 溶剂 抽提 法 二. 溶剂 沉淀 法 三. 溶剂 萃取 法,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离,一. 铅 盐 沉淀 法 二. 铜 盐 沉淀 法 三. 加蛋白 沉淀 剂,27,8.4.1.2 试剂沉淀法,一. 铅盐沉淀法 沉淀杂质，沉淀多糖 中性醋酸铅: 沉淀 酸性成分 (包括酸性多糖) 碱式醋酸铅: 沉淀 酸性成分 (包括酸性多糖) 及部分中性成分 (包括中性多糖),28,沉淀,母液（H2S脱铅）,含单糖、低聚糖、 水溶性较大的中性苷类,29,二铜盐沉淀法 沉淀多糖（与水溶性成分分离） 硫化氢分解去铜 *,30,分级沉淀法 多糖 通常 有何 杂质 ? 答案: Pr 怎样去除 ? 答案:,31,三.加蛋白沉淀剂 原料： 多糖 （分级沉淀法得到） 要求： 只 沉淀 Pr， 不 沉淀 多糖 (较难) 种类：,32,（1）酸法,（2）温和法 （3）酶法,蛋白沉淀剂,#,33,（1）酸法 酸性试剂 酚 或 三氯乙酸、鞣酸等。,（2）温和法 “三氯”类试剂 三氟三氯乙烷法或者 Sevag法（氯仿 ：戊醇 4：1） 丁醇 （3）酶法 蛋白水解酶 + Sevag法 注意事项：酸法应低温、短时、 避免 多糖 降解。,蛋白沉淀剂,34,35,8.4.1.1 溶剂 处理 法 8.4.1.2 试剂 沉淀 法,一. 溶剂 抽提 法 二. 溶剂 沉淀 法 三. 溶剂 萃取 法,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离 小结,一. 铅 盐 沉淀 法 二. 铜 盐 沉淀 法 三. 加蛋白 沉淀 剂,36,37, 8.4 糖和苷的分离方法 (I) - 按分离原理(或分离方法)分类,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离 8.4.2 利用 酸碱性 差异 分离 或解离度 8.4.3 利用 吸附性 差异 分离 8.4.4 利用 分子量 差异 分离,38,8.4.2 利用 酸碱性或解离度差异 分离 利用 酸碱性 差异 8.4.2. 1 铅盐沉淀法（同前述） 盐 沉淀 法 8.4.2. 2 季铵氢氧化物沉淀法 碱 沉淀 法 利用 解离度 差异 8.4.2. 3 离子交换法 (1) 离子交换 法 (2) 离子交换纤维素 法 (3) 使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法,8.4.1.2 试剂沉淀法,39,8.4.2.2 季铵氢氧化物沉淀法 碱试剂沉淀法 是一类乳化剂 结构式 见 教材 应用： 分离 酸性、中性多糖，,并可再进一步细分为,不同 类别的 多糖。,40,原理： 1. 季铵氢氧化物 通常只与 酸性多糖 生成沉淀, 使之分离。 2. 升高 PH， 某些中性糖 也能被 沉淀。 （- OH 的解离度 增大）， 方法： 在 不同 pH 下 分步 沉淀 （酸性、中性、微碱性、碱性等） 得到 不同多糖。,- - - - pH 梯度 沉淀 法 ,( ),利用解离度差异：,8.4.2.3 离子交换法,应用：,1. 去杂质,2.分离糖类,酸、碱、盐,注意事项：树脂选型,是否解离？,需改进应用,可解离杂质,(2) 离子交换纤维素法,(3) 硼酸处理的 强碱性阴离子交换树脂,组合法,增 大 解离度,络合,(1) 离子交换法,42,(2) 离子交换 纤维素 法 阳 - - - - - - - 阴 - - - - - - - 常用型号：教材 (3) 硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂 洗脱： 不同浓度的 硼酸盐 溶液 应用： 单糖 、低聚糖 效果好 缺点： 洗脱液 多 后处理烦,利用 酸碱性 差异 8.4.2. 1 铅盐沉淀法（同前述） 盐 沉淀 法 8.4.2. 2 季铵氢氧化物沉淀法 碱 沉淀 法 利用 解离度 差异 8.4.2. 3 离子交换法 (1) 离子交换 法 (2) 离子交换纤维素 法 (3) 使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法,方法 用途,8.4.2 利用 酸碱性或解离度差异 分离,44,45,8.4.3 利用吸附性差异 活性炭 吸附法 纤维素 柱层析 见教材,静态 - - 动态 - -,46,8.4.3.1 活性碳 静态吸附 应用：去非糖杂质，对水溶性低聚糖 几乎无不良影响 注意事项：须用 动物性骨碳 否则 对蔗糖吸附较多 （回收率低，仅4387%）,47,8.4.3.2 活性碳 动态吸附（活性碳柱层析） 应用：分离 ？ 分子量 不同的成分 去杂质： 去 无机盐， 水洗最 洗下 分离糖：分离 单糖 和 低聚糖 （含单糖数目多者， 下）,先,后,原理： 选择性吸附,48,洗脱操作： 水洗，除 无机盐， 得 单 糖 渐增洗脱液中的乙醇浓度,逐步洗出 二糖、 三糖、 及更大低聚糖,49,注意事项： 活性炭 预处理，除金属离子： 盐酸 液 煮沸， 水洗 2 3 mol/ L 需 增加 洗脱速度： （）装柱，拌 等量 硅藻土， 弊，吸附容量 降 （）用稍粗的炭， -目,*,50,8.4.4 利用 差异,（ 分子量 ）,凝胶层析法（Gelfiltration）,应用： 1.去杂质， 无机盐及小分子化合物 （进入凝胶内部） 2.分离糖、苷,51,2. 分离糖、苷 (1) 分子量 不同 例，低聚糖、苷、或多糖。 大分子 （ ）洗下， 比较 活性炭 法： 大分子 （ ）下,先,后,?,吸附力强,（2）分子形状 不同： 如 直链 和 支链 多糖 支链糖 （ ） 下 ,先,52,注意事项：凝胶 选型,分离 低聚糖和苷：用孔隙（ ）的 - - 多糖 - - - （ ）- 多糖 纯化去杂质 - - - （ ）-,小,大,小,53,54,55,8.4 糖和苷的分离方法 (I) - 按分离原理(或分离方法)分类,8.4.1 利用 溶解度 差异 分离 8.4.2 利用 酸碱性 差异 分离 或解离度 8.4.3 利用 吸附性 差异 分离 8.4.4 利用 分子量 差异 分离,8.5 糖和苷的分离方法 (II) - 按 分离 目的 分类 ,56,8.5 糖和苷的分离方法 (II) - 按分离目的分类 8.5.1 8.5.2,分离 混合糖类 或 苷类 细分 总糖、总苷,去 非糖杂质 制备 总糖、总苷,57,8.5.1 除去 非糖杂质的 方法 - 制备总糖、总苷 思路? 寻找 差异 二者 性质 差异,成分 亲水/亲脂 酸碱性 解离度 分子量,分离方法,成分 亲水/亲脂 酸碱性 解离度 分子量,亲水,中性,酸性 碱性 中性,极 性 大,极 性 较 大,不 解 离,小分子 或 大分子,分离方法,成分 亲水/亲脂 酸碱性 解离度 分子量,亲水,中性,酸性 碱性 中性,极 性 大,极 性 较 大,不解离,小分子 或 大分子,成分 亲水/亲脂 酸碱性 解离度 分子量,亲水,中性,酸性 碱性 中性,极 性 大,极 性 较 大,不 解 离,小分子 或 大分子,分离方法,(利用 差异）,注意正确判断差异类型,分离目的 方 法 举 例,除 亲脂性 杂 质,溶剂法 吸附法,亲脂性溶剂抽提、萃取 (例如石油醚脱脂) 活性炭吸附 静态或动态,极性,糖和苷的精制,( 利用 差异）,除 亲水性 杂 质,溶剂法 吸附法,正丁醇 萃取 提苷 活性炭层析,极性,63,分离目的 分离方法 洗脱顺序 及 原理,除 无机盐,离子交换 法 活性碳 层析 凝 胶 层析,后下 先下 后下,三种方法 两类层析,被 交换 吸附,分子量小 吸附弱,进入凝胶 内部,( 可解离 小分子 ）,64,练习题 简述 脱盐 常用 方法 及其 洗脱 顺序,65,不沉淀,酸 碱 性 成分 被交换 吸附, 中性 糖 苷 成分 流出 除酸性成分 ( ) 离子树脂 除碱性成分 ( ) 离子树脂,除去 酸碱 性 成分 及 部分中性成分,铅盐沉淀,酸性、酚性成分 含酸性多糖,酸 根- 阴,阳离子+ 阳,法,离子 交换 法,碱 式 醋酸铅,中 性 醋酸铅,另沉淀 中性 、 成分 含中性多糖,目的 方 法 分 离 效 果 等,沉淀,单糖、低聚糖、极性大的苷,66,分子量大的杂质 下 分子量小的杂质 下,粗分： 醇 沉 蛋白 沉淀剂 透析法,细分 凝胶法 活性炭,沉淀多糖、蛋白质 精制 单糖 低聚糖和苷 用于精制 多糖 （只沉蛋白，不沉多糖）,67,1. 酚或者三氯乙酸 鞣酸等 酸性试剂 2. 三氟三氯乙烷法或 Sevag法（ 氯仿：戊醇 4：1） 丁醇 “三氯”类试剂 3.酶法 酶 + Sevag法,蛋白沉淀剂： #,成分 亲水/亲脂 酸碱性 解离度 分子量,亲水,中性,酸性 碱性 中性,极 性 大,极 性 较 大,不 解 离,小分子 或 大分子,分离方法,8.5.2 分离 混合 糖类或苷类 - 总糖、总苷,8.5.2.1 分离为 单糖、低聚糖、多糖 1 醇沉法 （ ）糖 可溶 （ ）糖 沉淀 粗分,多,单糖、低聚,小,多,再分离,考 点 勿背 理解,2 活性炭层析 3 凝胶法 选用（ ）孔隙 （ ）糖先下 细分,70,8.5.3 单糖、低聚糖 再细分 活 性 炭层析 吸附性 差异 凝 胶 层析 离子交换层析 改进 离子交换 纤维素 硼酸处理 - - - - 树脂,71,8.5.4 多糖再分离 （ 两类沉淀 两类层析 ） 粗分： 醇沉：乙醇分级沉淀法 （或乙醚分段