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2019/5/19,1,实训三 细菌染色法,2019/5/19,2,1.细菌染色法,革兰染色法,复染色法,单染色法,负染色:,正染色,死菌,活菌:,抗酸染色法,芽孢染色法,姬姆萨染色法,荚膜染色法,用美蓝或TTC等作活菌染色,2019/5/19,3,常用染料,碱性染料:带正电荷,如美蓝、结 晶紫、碱性复红等 酸性染料:带负电荷,如伊红、酸 性复红或刚果红等酸性染料染色 中性染料:又称复合染料,如伊红 美兰、伊红天青等,2.染色原理:小、色差 染色法:简单、革兰染色,2019/5/19,4,3.染色方法 (1)单染色法: 菌种枯草芽孢杆菌(观察芽孢) (2)革兰染色法: 菌种金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌(观察革兰染色性),2019/5/19,5,涂片,干燥,固定,(1)单染色步骤:枯草芽孢杆菌,无菌操作 两环菌液 直径约1cm,晾干 烘干 等全干,过外焰3次 目的,不烫 染液不干,全干再看 用油镜,2019/5/19,6,(2)经典染色法 革兰染色法,由丹麦医生革兰于 1884年创立。,2019/5/19,7,结晶紫 1min,革兰染色步骤:金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌,2019/5/19,8,革兰染色原理: 壁结构、成分差异。(主) G菌壁厚、密,脂类少,乙醇不易渗入脱色 G菌壁薄、疏,脂类多,乙醇易渗入脱色 等电点不同。 G菌的低,结合阳性染料多 G菌的高,结合阳性染料少 细胞内核糖核酸镁盐含量不同。 G菌的多,染料结合牢固,难脱色 G菌的少,易脱色,2019/5/19,9,革兰染色意义:鉴别;致病性;药物选择,2019/5/19,10,革兰染色影响因素:,菌 龄培养18-24小时的幼龄菌 涂片厚度宜薄不宜厚 各试剂作用时间 脱色时间关键步骤,一般30秒 过长 假阴性 过短 假阳性,2019/5/19,11,4.实训结果:2片/人,单染色30分;革兰染色50分,评分标准: 染色结果是否正确 找到目标 是否最佳目标 目标是否清晰 光线是否适宜,2019/5/19,12,5.思考题:
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