MMP2和PTEN蛋白在食管鳞癌中表达及临床意义.docVIP

MMP-2和PTEN蛋白在食管鳞癌中表达及临床意义 作者：叶晓锋，高平，韩恩善，秦憬【摘要】 目的检测MMP-2、PTEN在食管鳞癌组织中的表达，探讨其与患者临床病理特征及其相关关系。方法采用免疫组化S-P法检测MMP-2、PTEN在40例食管鳞癌和20例正常食管上皮组织中的表达。结果(1)食管鳞癌组织MMP-2、PTEN表达阳性率分别为80.00%、50.00%，与正常食管上皮组织比较差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)MMP-2、PTEN阳性率在食管癌不同浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期中均有统计学意义(P<0.05)。(3)PTEN与MMP-2、阳性率呈负相关(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中MMP-2高表达，PTEN低表达，两者联合检测可能对食管鳞癌浸润转移的预后判断有一定指导意义。 【关键词】 食管鳞癌;基质金属蛋白酶-2;磷酸脂酶基因AbstractObjectiveTo detect the expression of MMP-2，PTEN and discuss their relationship in esophageal squamous cell carcinoma.MethodsS-P immunohistochemical method was performed to detect expressions of MMP-2 and PTEN in 40 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 20 normal subjects.ResultsThe positive rate of MMP-2 and PTEN in esophageal squamous cell carcinoma patients was 80.00% and 50.00%，comparing with normal subjects，there were all significant differences (P<0.01); The positive rates of MMP-2 and PTEN were significantly correlated with invasion，clinical stage，lymph node metastasis(P<0.05); There were significantly negative correlations between PTEN and MMP-2 (P<0.05).ConclusionExpression of MMP-2 is increased and PTEN is decreased in esophageal squamous cell carcinoma，they are correlated with clinical stage. They can be used as molecular biological markers for evaluating invasion and metastasis.Key wordsEsophageal squamous cell carcinoma; MMP-2; PTEN食管癌的浸润和转移是一个多步骤、多阶段和多因素参与的复杂过程，是影响患者预后的主要因素。本研究通过检测食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸脂酶 (PTEN)的表达，探讨MMP-2、PTEN的表达及其与食管鳞癌浸润转移的关系，并依此寻找新的辅助诊断或判断预后的检测指标。1材料与方法1. 1标本来源：选取2007年间我院手术切除并经病理学确诊的原发性食管鳞癌组织40例，患者年龄28-77岁(平均年龄56岁)，所有病例术前均未接受化疗、放疗和其它抗肿瘤治疗。40例标本中病理分级为高分化7例、中分化15例、低分化18例。按照2002年食管癌AJCC分期进行TNM分期：期7 例、期17 例、期12 例、期 4例。有淋巴结转移15例，无淋巴结转移25例。20例HE染色确定为正常食管鳞状上皮组织作为对照。1.2主要试剂：MMP-2、PTEN鼠抗人单克隆抗体。 S-P试剂盒。 二氨基联苯胺(DAB)显色剂盒。 0.1M的柠檬酸钠(PH 6.0)抗原修复液，10X多聚赖氨酸防脱片剂及PBS粉。试剂来源于北京中杉金桥生物制剂有限公司。1.3免疫组化方法：所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色和病理组织学确诊。石蜡包埋组织块切片厚4m，对石蜡切片进行免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法测定。依常规免疫组化方法，按试剂盒说明书操作，用已知鼠抗人MMP-2单克隆抗体阳性的乳腺癌标本及鼠抗人PTEN单克隆抗体阳性的结肠腺癌标本作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。1.4结果判定：MMP-2、PTEN阳性反应均为黄色或棕黄色颗粒，MMP-2主要定位于细胞质， PTEN主要定位于细胞浆。综合染色强度和阳性细胞率判定结果。阳性着色-无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分;阳性细胞率-每张切片取5个高倍视野(400)，计数肿瘤细胞中的阳性细胞百分率，无阳性细胞为0分、阳性细胞数10%为1分、11%-25%为2分、26%-50%为3分、>50%为4分。染色强度阳性细胞百分比>3分为阳性，3分为阴性。1.5统计学方法：应用SPSS 13.0统计软件进行分析，参数的关系应用2检验或Fisher精确概率法分析，相关性应用Spearman等级相关分析。2结果2.1食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达：食管鳞癌组织MMP-2、PTEN表达阳性率分别为80.0%、50.0%，见图1、2(封二)，与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)，见表1。表1食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达2.2食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达与患者临床病理特征的关系:MMP-2阳性率在不同浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期中有统计学意义(P<0.05)，在肿瘤分化程度中的表达无差异。PTEN阳性率在肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期均有统计学意义(P<0.05)。表2食管鳞癌组织MMP-2、PTEN表达与患者临床病理特征的关系2.3食管鳞癌组织中MMP-2、PTEN表达间的关系：经相关分析食管鳞癌组织中PTEN与MMP-2表达的阳性率呈负相关(r=-0.500，P=0.001)。3讨论肿瘤的浸润和转移具有极其复杂的分子生物学变化过程，细胞外基质是防止恶性肿瘤局部侵袭、远处转移的重要生理屏障。目前研究证实基质金属蛋白酶(MMPs)是降解细胞外基质，破坏基底膜完整性过程中最重要的酶系统，其中MMP-2可特异性降解基底膜主要成分4型胶原独特的螺旋结构，使基底膜丧失完整性，这对瘤细胞穿越基底膜结构和血管内皮细胞侵袭血管周围基质、肿瘤新生血管都非常重要。近年研究发现MMP-2 在促进血管生成，以及肿瘤的生长、浸润和转移等恶性生物学行为中起重要作用1。本研究显示食管鳞癌组织中MMP-2在肿瘤的不同浸润深度、有无淋巴结转移、不同临床分期中的表达有统计学意义(P<0.05)，提示MMP-2与食管癌的浸润和转移密切相关。PTEN是1997年发现的一种新型抑癌基因，目前研究已表明其表达产物负性调控细胞周期及多种信号途径，抑制细胞黏附迁移，诱导细胞分化及凋亡等多种生理活动2。大量研究表明PTEN基因突变或表达下调在肿瘤发生中起重要作用。食管癌组织中也存在PTEN基因的突变缺失3和启动子的异常甲基化4，沿正常食管组织、肠化生、不典型增生和食管癌的癌变过程，PTEN表达逐渐降低5。李劲松等6检测60例食管癌组织及癌旁正常食管上皮组织PTEN的表达，结果食管癌组织中PTEN阳性率为65.0%，低于癌旁正常食管上皮组织94.4%的阳性率(P<0.05)。同时发现PTEN在食管癌高、中、低分化组的阳性率逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。张伟峰等7研究表明PTEN mRNA及蛋白表达与食管癌的分化程度高低、浸润深度、淋巴结转移和临床分期显著相关。本实验显示食管鳞癌组织中PTEN阳性率为50.00%，显著低于正常食管鳞状上皮组织85%的阳性率，并随着分化程度降低、浸润深度增加、淋巴结出现转移、临床分期增加，PTEN阳性率下降。与上述文献报道一致。【参考文献】 1Zheng H,Takahashi H,Murai Y,et al.Expressions of MMP-2,MMP-9 and are closely linked to growth,invasion,metastasis and angiogenesis of gastric carcinomaJ. Anticancer Res,2006,26(5A):3579-3583.2Zhang L，Yu Q，He J，et a1.Study of the PTEN gene expression and FAK phosphorylation in human hepatocarcinoma tissues and cell lines.Mol Cell BiochemJ.2004,262:25-33.3Byun DS，ChoK，Ryu BK,et al. Frequentmonoallelic deletion of PTEN and its reciprocal associatioin with PIKCA amplification in gastric carcinomaJ. Int J Cancer,2003,104(3):318-327.4Kang YH,Lee HS,Kim WH.Promotermethylation and silencing of PTEN in gastric carcinomaJ.Lab Invest,2002,82(3):285-291.5Yang L，Kuang LG，Zheng HC，et al.PTEN encoding product: a marker for tumorigenesis and progression of gastric carcinomaJ.World J Gastroentero,2003,9(1):35-39.6李劲松，杨琨,王建军.PTEN蛋白在食管癌中的表达及临床意义J.华中科技大学学报(医学版),2006,35(5):623-629.7张伟峰,杨维良,王夫景,等.PTEN基因在胃癌中的表达及其意义J.中华实验外科杂志,2003,20(5):468-469.8Park MJ，Kim MS，Park IC，et al. PTEN suppresses hyalu-ron