TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌中的表达及义.docVIP

TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌中的表达及义 作者：陈艳宇，曾子华，郑佩娥，李红，方力，郭莉，康小玲，蒋光愉【摘要】 目的 探讨TSG101在人消化道恶性上皮性肿瘤中的表达及其意义。方法 采用免疫组化的方法检测TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌石蜡包埋组织中的表达。结果 TSG101蛋白在25例食管癌，32例胃癌及40例大肠癌中表达的阳性率分别为52.0% (13/25) ，28.1%（9/32），62.5%（25/40），三组之间差异无显著性；各组TSG101蛋白表达率随着肿瘤级别的增高而降低。结论 TSG101的表达与人消化道恶性上皮性肿瘤的分化程度有关，其表达率与肿瘤级别呈负相关。 【关键词】 食管肿瘤；胃肿瘤；大肠肿瘤；免疫组织化学 Expression and Significance of The Tumor Susceptibility Gene TSG101 in Carcinoma of Esophagus and Gastrointestinal Tract Key words：TSG101；Esophageal carcinoma；Gastric carcinoma；Colorectal carcinoma； Immunohistochemistry 肿瘤易感基因101(Tumor susceptibility gene 101,TSG101)由Li等1应用随机纯合子敲除技术(random homozygous knockout ，RHKO)于1996 年发现，TSG101功能失活可引起小鼠NIH 3T3成纤维细胞的恶性转化,给裸鼠皮下注射该转化细胞可形成肿瘤并发生转移；恢复TSG101功能可逆转部分细胞的恶性表型,因此它被认为是一个肿瘤抑制基因。随后, Li等2克隆到了人的TSG101 基因( hTSG101), 定位于染色体11p15.1-p15.2区。已有研究认为TSG101基因的表达异常可能与乳腺癌的发生有关，TSG101在人消化道恶性上皮性肿瘤发生、发展过程中的可能作用国内仅见个别报道，我们应用免疫组化的方法检测TSG101 蛋白在食管癌、胃癌及大肠癌共97例石蜡包埋标本中的表达。 1材料与方法 1.1标本来源 收集暨南大学第一附属医院（广州市华侨医院）病理科2002年2004年，及暨南大学第四附属医院（广州市红十字会医院） 病理科2004年9月12月经手术切除的食管癌、胃癌及大肠癌石蜡包埋标本。所有标本经病理确诊，资料完整，手术前均未行放、化疗或生物治疗。 根据中国肿瘤病理学分类3对所有标本进行组织学分型、分级。食管癌标本共25例：均为鳞状细胞癌，其中级3例，级12例，级10例。胃癌标本共32例：管状腺癌10例（其中高分化1例，中分化9例），黏液腺癌（高分化型）4例，低分化腺癌15例，未分化癌3例。大肠癌标本共40例：乳头状腺癌5例，管状腺癌30例（级7例，级15例，级8例），黏液腺癌5例。 1.2主要试剂与方法 免疫组化所用的TSG101一抗为Dako公司的鼠抗人单克隆抗体，即用型非生物素免疫组化试剂盒，以及DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。 所有标本均经10 %中性甲醛固定，石蜡包埋，4m连续切片，行HE常规及免疫组化染色。免疫组化染色采用二步法，TSG101抗原经高压修复，一抗工作浓度是1:100，实验步骤按照试剂盒说明书操作，以TBS代替一抗作为阴性对照。 1.3免疫组化结果判断 TSG101蛋白定位于癌细胞胞浆内，呈细或稍粗的棕黄色颗粒状。以着色强度高于背景非特异性染色者为阳性表达。每张切片随机选取5个高倍视野，首先按阳性细胞所占百分比评分：阴性为0分，阳性细胞数10%为1分，11%50%为2分，51%75%为3分，>75%为4分；再按染色强度评分：无色为0，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；最后按二者乘积分数分为4个等级：“-”（0，1，2），“+”（3，4），“+”（6，8），“+”（9，12）。我们将分数3定为阳性，<3为阴性4（图1，2）。 1.4统计学方法 采用SPSS10.0 统计软件处理,四格表资料的2 检验以及多个样本比较的秩和检验（KruskalWallis法），检验水准0.05。 2结果 2.1TSG101蛋白在食管癌中的表达与其组织分化程度的关系(见表1) 25例食管鳞状细胞癌的高、中、低分化组中，TSG101表达的阳性率分别为100%（3/3例），66.7%（8/12例），20%（2/10例）。经统计学分析，高分化组和中分化组的TSG101阳性率差异无显著性，P0.516；高、中分化组与低分化组之间P0.015（P <0.05），差异有统计学意义。 2.2TSG101蛋白在胃癌中的表达与其组织分型及分化程度的关系(见表1) TSG101在32例胃癌组织中表达的阳性率分别为：管状腺癌50%（5/10例），黏液腺癌（高分化型）75%（3/4例），低分化腺癌6.7%（1/15例），未分化癌为0。经统计学分析后分为高、中分化组与低、未分化组,进行Fishers Exact Test，P0.004（P<0.05），差异有显著性。 2.3TSG101蛋白在大肠癌中的表达与其组织分型及分化程度的关系(见表1)表1 TSG101在食管癌，胃癌，大肠癌中的表达与其组织学分级的关系TSG101在40例大肠癌组织中表达的阳性率分别为：乳头状腺癌100%（5/5例），高分化管状腺癌85.7%（6/7），中分化管状腺癌73.3%（11/15例），低分化管状腺癌25%（2/8例），黏液腺癌20.0%（1/5例）。经统计学分析后分为高、中分化组与低分化组进行比较，P0.001（P<0.05），提示差异有显著性。 2.4TSG101蛋白在食管癌、胃癌及大肠癌组织中表达的比较（见表2） 表2 TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌中表达的比较TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌中表达的阳性率分别为52.0%（13/25），28.1%（9/32），62.5%（25/40），经统计学分析，21.861，P0.172（P>0.05），认为各组之间差异无显著性。 3讨论 既往的研究表明，在多种人类恶性肿瘤如乳腺癌、Wilm氏瘤、肺癌、膀胱癌、睾丸癌、肾上腺皮质瘤、肝胚细胞瘤和卵巢癌中,染色体11p15 区或其邻近区域常发生杂合性丢失(loss of heterozygosity，LOH) 。Seizinger 等5在171 例散发性乳腺癌中发现约有30%的病例存在11p15.411pcen的杂合性丢失,而且研究也发现将正常的11号染色体或其片断导入乳腺癌细胞,可以逆转癌细胞的转移倾向以及其他的一些恶性特征。这些均强烈提示11 号染色体短臂可能存在一个或多个肿瘤抑制基因。已克隆到的人TSG101 基因( hTSG101) 定位于染色体11p15.1-p15.2区2，正好位于上述区域内，故Li 等认为TSG101 基因很可能就是该区域所存在的抑癌基因，提示其功能缺失可能引起肿瘤的发生。 TSG101 蛋白包括N-端泛素结合酶E2样结构域、脯氨酸富含区域和C-端卷曲螺旋结构域及一个稳定盒控制其稳定水平6 。目前研究表明, TSG101 在多种生物学过程中起作用,但其与肿瘤发生的关系尚未完全阐明。Bennett 等7进行的相关研究发现TSG101 蛋白表达下降与一些卵巢癌、子宫内膜腺癌发生有关。Liu等 8，9在甲状腺乳头状癌等多种肿瘤中也发现有TSG101 基因的表达异常或异常转录本, 这些都与经典的在理论上确定抑癌基因的基本条件相符。有研究报道，在乳腺癌组织及细胞株中未发现TSG101 发生点突变、基因重排和基因内缺失,可检测到完整的TSG101 蛋白1012 ，表明TSG101基因缺失不是常发事件。 我们的研究结果显示，在食管鳞状细胞癌、胃癌、以及大肠癌组织中TSG101的表达均呈现随着肿瘤级别的增高而降低的趋势，经统计学分析，三种肿瘤之间TSG101的表达无显著性差异。此外，本课题组另文发表的研究表明，与其在消化道恶性上皮性肿瘤中的表达相比，TSG101蛋白在肉瘤中表达率明显较低（17.5%）。因此，我们认为TSG101表达与人消化道上皮性恶性肿瘤的分级有关，与其在软组织肉瘤的发生发展中扮演的角色可能不同。 TSG101 基因在多种人类肿瘤发生中的作用仍尚存争论。该基因作为新的抑癌基因候选者,其在肿瘤发生、发展过程中的变化规律及其作用的阐释必将为人类肿瘤的发生机制及早期筛查提供重要线索,为肿瘤的防治工作带来新的契机。【参考文献】 1 Li L,Cohen SN. TSG101: a novel tumor susceptibility gene isolated by controlled homozygous functional knockout of allelic loci in mammalian cells J. Cell, 1996, 85(3):319329.2 Li L,Li X, Francke U, et al.The TSG101 tumor susceptibility gene is located in chromosome 11 band p15 and is mutated in human breast cancer J. Cell, 1997, 88 (1):143154.3刘复生.中国肿瘤病理学分类M.上卷，第1版，北京：科学技术文献出版社，2001：59163.4姚广裕，杨名添，戎铁华，等. MT1-MMP在乳腺癌组织中的表达及临床意义J.癌症，2004，23（11）：14821486.5Seizinger BR, Klinger HP, Junien C, et al. Report of the committee on chromosome and gene loss in human neoplasia J. Cytogenet. Cell Genet, 1991, 58:10801096. 6 Feng GH, Lih CJ, Cohen SN. TSG101 protein steady-state level is regulated posttranslationally by an evolutionarily conserved COOHterminal sequence J. Cancer Res, 2000, 60:17361741.7 Bennett NA, Pattillo RA, Lin RS, et al. TSG101 expression in gynecological tumors: relationship to cyclin D1, cyclin E, p53 and p16 protein J. Cell Mol Biol, 2001, 47 (7):11871193.8 Liu RT, Huang CC, You HL, et al. Over expression of tumor susceptibility gene TSG101 in human papillary thyroid carcinomas J. Oncogene, 2002, 21: 48304837.9 Lin SF, Lin PM, Liu TC,et al. Clinical implications of aberrant TSG101 transcripts in acute myeloblastic leukemia J. Leuk Lymphoma, 2000, 36: 4634666.10Steiner P, Barnes DM, Harris WH, et al. Absence of rearrangements in the tumour susceptibility gene TSG101 in human breast cancer J. Nat Genet, 1997, 16(4):332333.11P