科研部目前能提供技术指导一览表.doc

科研部目前能提供技术指导一览表根据科技处领导要求，现列出科研部能开展的各项实验室技术详细清单，以增进相关人员对科研部的了解，提高科研部实验室的使用效率。需要特别说明的是，实验室技术与研究项目的内容密切相关，但实验室技术名称不等于研究项目或研究内容名称。我们只能列出各项实验室技术名称，而无法列出研究内容或项目的名称，用实际例子说明如下。例如，“某基因单核苷酸多态性与某种疾病易感性的关系”，这属于研究项目的名称，其中的基因单核苷酸多态性检测需要在实验室完成，其方法至少有10种以上，而任何一种方法，都包括多种实验室技术，其中最基本的标本留取和处理，就需要考虑以下至少5个方面：1）留取什么组织标本：通常为外周血；2）留取外周血：是否需要抗凝，最好抗凝（不抗凝的血标本也可以用，但对后续实验带来很大麻烦）；3）用什么抗凝剂：最好用EDTA或枸橼酸钠（用肝素也可以，但价格高，且有可能影响后续实验）；4）采血量：根据多态性位点数目、多态性位点检测方法等而定；5）血样处理（这涉及试剂配置、移液器使用、离心、标本保存等各种技术）：a何时处理：最好当天，甚至需立即处理，也可以在12周甚至更长时间后处理；这需要综合考虑，如血细胞和血浆是否需要用于检测其他指标，这些指标是否受标本处理时间的影响，；b如果不能及时处理，如何保存：4C保存，室温保存12天也可以，但未处理的抗凝血切忌冻存，因为冻融后红细胞溶血，部分白细胞也会裂解，影响后续实验，； c如何处理：需要综合考虑，是否需要保存血浆，是的话，先离心，吸取血浆，保存；再裂解红细胞，留取白细胞，分装，保存。因此，此清单仅作为参考，不能机械地根据此清单判断科研部能否对您的课题提供技术支持。请在课题开始前，电话或来科研部咨询相关事项。根据需要，我们也可以派人到贵科室提供咨询服务。另外，因为实验室技术的通用性，此清单中未列出的项目，只要没有仪器或试剂的特殊要求，本部门多数也能开展。鼓楼医院科研部 2016.1.18 一、实验室基本技术：1) 试剂瓶和实验器材的清洗2) 试剂选择3) 试剂称量与配制4) 血液、组织等样本的收集与保存5) 仪器或设备的使用：具体仪器和设备见清单，使用时请参见本实验室各仪器的SOP。二、分子生物学相关技术：1) 人及各种动物基因组DNA抽提、浓度测定2) 人及各种动物组织或细胞RNA提取、浓度测定3) 琼脂糖凝胶电泳（DNA；RNA）4) 琼脂糖凝胶DNA回收5) RNA电泳6) Southern blotting (DNA转印技术) 7) Northern blotting (RNA转印技术)8) 普通PCR9) 巢式PCR10) 逆转录PCR11) 荧光定量PCR12) 梯度PCR13) PCR产物（DNA片段）纯化14) 基因突变（点突变或缺失突变）技术15) 感受态细胞制备16) DNA连接17) DNA克隆 （T-A克隆、质粒构建等）18) 质粒DNA制备19) 质粒抽提20) MicroRNA、mRNA检测21) 基因过表达22) 基因沉默23) 引物设计24) DNA测序25) DNA片段分析26) SNP检测27) 分子克隆技术：蛋白原核和酵母表达质粒构建、蛋白原核表达、纯化三、蛋白质相关技术：1) 各种组织裂解及蛋白抽提（总蛋白、胞浆蛋白、膜蛋白及核蛋白提取）2) 蛋白质定量3) SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色4) 蛋白表达质粒构建、蛋白原核表达、纯化（盐析、亲和层析等）5) 蛋白真核细胞（包括哺乳动物细胞、酵母细胞）的表达和纯化6) 蛋白质超速离心分析：密度滴度离心、浮力密度分析、微量蛋白浓缩、纯化等四、免疫学分析技术（检测各种抗原、抗体、各种蛋白质分子）：1) ELISA2) 免疫组化3) HE染色4) 免疫沉淀5) 免疫荧光6) 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）7) Western blotting (蛋白质转印技术)8) 液相芯片分析检测各种细胞因子9) 固相酶联免疫斑点技术10) 免疫动物的抗原制备五、细胞学分析技术（用于各种以细胞为基础的研究）：1) 传代细胞培养、复苏和冻存2) 原代细胞分离与培养3) 细胞转染技术4) 细胞增殖检测5) 细胞毒性检测6) 细胞凋亡检测7) 细胞周期检测8) 细胞迁移/划痕实验9) 细胞转染和筛选10) 流式细胞仪检测11) 流式细胞仪分选细胞12) 免疫磁珠分选细胞13) 细胞氧化应激检测14) 人和各种动物外周血淋巴细胞分离15) 细胞核提取16) 线粒体提取17) 干细胞原代培养和鉴定（免疫标记鉴定、成骨、成软骨、成脂鉴定及尼氏体检测等）六组织病理切片和显微镜分析技术：用于各种形态学成像分析1）包括石蜡切片及冰冻切片2）普通光学显微镜术：常规切片、免疫组化等3）普通光学