口服鱼油对急性胰腺炎大鼠炎性反应及免疫功能的影响.doc

口服鱼油对急性胰腺炎大鼠炎性反应及免疫功能的影响【摘要】 目的：评价添加鱼油的肠内营养对急性胰腺炎（AP）大鼠炎症反应及免疫功能的影响。方法：大鼠70只随机分为4组，分别为无胰腺炎组、AP-普通营养组，AP-玉米油营养组，AP-鱼油营养组。建立AP模型，术后第7天检测外周血中CD4+及 CD8+细胞占总淋巴细胞的比例及CD4+/CD8+比值，TNF-、IL-10浓度和IL-10/TNF-变化。结果：AP-鱼油营养组大鼠较其它组TNF-、IL-10浓度明显降低，且下调IL-10/TNF-比值，CD4+/CD8+比值明显升高。结论：口服添加鱼油的肠内营养在减轻AP大鼠的炎性反应，调节其免疫功能方面优于其它组营养成分。 【关键词】 急性胰腺炎；鱼油；酶联免疫吸附试验；肿瘤坏死因子；白细胞介素-10；大鼠 Abstract Objective: To estimate the effect of fish oil on inflammatory reaction and immune function of acute pancreatitis in rats. Method: 70 rats randomly divided into four groups: no-AP group, AP-common enteral nutrition group, AP-corn oil group, AP-fish oil group. The model of AP was buit. At the 7th day postroperation, the ratio of CD4+ and CD8+ cells and the value of CD4+ / CD8+ were and the expression of TNF- and IL-10 were detected. Result: Dietary fish oil decreased the expression of TNF- and IL-10, degraded the value of IL-10/TNF-, and increased the value of CD4+ / CD8+. Conclusion: Dietary fish oil can decrease the inflammatory reaction, and modulate the immune function of acute pancreatitis rats. Key words Acute pancreatitis；Fish oil；Enzyme-linked immunosorbent assay；Tumor necrosis factor；Interleukin-10；Rat 急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)发病凶险， 其重症急性胰腺炎的死亡率高达20左右1。近10多年来随着对重症急性胰腺炎研究的进展，已经认识到重症急性胰腺炎是一种由局部组织坏死引起的全身炎症反应综合征。其中细胞因子、免疫细胞和补体系统介导的炎症级联反应可能是导致全身炎症反应综合征的根本原因。在营养配方中添加特异的营养素不但能够预防和纠正营养不良，同时还能够调节免疫细胞功能，使机体维持正常、适度的免疫反应。n-3多不饱和脂肪酸主要以鱼油的形式存在，是营养免疫因子的重要组成部分，近期的研究发现，它对多种免疫细胞具有抑制作用，使其在免疫治疗中具有较好的应用前景2，3。本试验利用大鼠胰腺炎模型，探讨口服n-3多不饱和脂肪酸对大鼠血液中免疫因子表达水平的影响。 1 材料与方法 1.1 动物与分组 所用试验动物均为雄性SD大鼠（北京维通利华公司），体重250280 g。所用肠内营养为瑞素（江苏无锡华瑞制药公司），所用鱼油及玉米油购自Sigma公司。第1组为随机抽10只大鼠不进行胰腺炎诱导（无胰腺炎组）；将胰腺炎大鼠随机分为3组，每组20只，第2组为普通肠内营养组（AP-普通营养组）；第3组在营养中添加玉米油（AP-玉米油营养组）；第4组在营养中添加鱼油（AP-鱼油营养组），鱼油中脂肪来源主要是n-3多不饱和脂肪酸，而玉米油中无此成分。各组抽血检测相关指标。 1.2 试验方法 术前24 h禁食，氯胺酮腹腔内麻醉。经十二指肠乳头逆行插入细聚乙烯管，恒速注入25牛磺胆酸钠06 ml/10 min。当胰腺发生水肿出血、局部呈暗红色时，证实建立模型成功。所有大鼠经右颈内静脉插管建立静脉输液通道，以及经胃造口置内径1.0 mm硅胶管于空肠上段2.0 cm处。术后第1天给与林格氏液400 mlkg-1d-1，第2天开始分别行肠内营养，每天按240 mlkg-1给予瑞素，鱼油及玉米油毫升数按体重的0.6给予。术后第7天终止试验，取材检验。细胞因子的检测：取外周静脉抗凝血1ml，于4下1500 rmin-1离心10 min，取上清，分装冻存于-80 冰箱，集中采用ELISA法检测TNF-和IL-10水平。另取外周抗凝血1 ml加入CD4、CD8 单抗，室温静置1525 min，加红细胞裂解液500 l，静置10 min，1000 rmin-1离心5 min弃上清，磷酸盐缓冲液洗涤后加入1FPA 50l混匀，流式细胞仪(Becton Dickinson公司)检测T细胞亚群分类。 1.3 统计学方法 计量资料用xs表示，用SPSS 110统计软件做方差分析两两比较用q检验，P0.05示差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 死亡率 各组均有少量动物由于重症胰腺炎、多器官脏器衰竭等原因死亡，分别为AP-普通营养组4只、AP-玉米油营养组5只、AP-鱼油营养组4只。各组间无统计学意义。 2.2 外周血T细胞亚群 流式细胞仪检测CD4+ 及 CD8+细胞占总淋巴细胞的比例及CD4+/CD8+比值见表1。 2.3 外周血细胞因子的变化 TNF-、IL-10浓度和IL-10/TNF-变化见表2。 由表1 中数据可以看出，AP-玉米油营养组与AP-普通营养组比较，CD4+及 CD8+细胞占总淋巴细胞的比例均无明显差异（P>0.05），CD4+/CD8+比值也无明显差异（P>0.05）；而AP-鱼油营养组与AP-普通营养组比较，CD4+/CD8+比值明显升高（P<0.05）；AP-鱼油营养组与AP-玉米油营养组比较，CD4+/ CD8+比值也明显升高（P<0.05）。由表2数据中可以看出，所有AP组与无胰腺炎组比较血液中TNF-和IL-10的浓度有明显升高（P<0.05）；而AP-鱼油营养组与AP-普通营养组及AP-鱼油营养组与AP-玉米油营养组比较，血液中TNF-和IL-10的浓度明显降低（P<0.05），IL-10/TNF-的比值也明显降低（P<0.05）。 3 讨 论 AP早期严重的炎症反应是造成多器官功能衰竭的主要原因。过度促炎反应之后出现的过度抗炎反应可造成免疫抑制状态。调控促抗炎因子在一定范围内的平衡状态，增强机体免疫功能是降低死亡率的重要方面4。 TNF-是引起组织损伤的重要促炎因子。IL-10是重要的抗炎因子之一，且具有明显的免疫抑制作用。IL-10/TNF-比值反映促炎抗炎平衡状态，越接近平衡状态越有利于炎症性疾病的恢复56。本试验显示建立AP大鼠模型7天后，TNF-和IL-10浓度较无胰腺炎组大鼠明显升高，说明促炎抗炎反应均较剧烈，而AP-鱼油营养组TNF-和IL-10浓度均降低，IL-10/TNF-的比值最接近无胰腺炎组大鼠，结果显示这组大鼠促炎、抗炎反应较轻，最接近促炎抗炎平衡状态。 AP时外周血T淋巴细胞总数及CD4+/CD8+比值下降，且与疾病的严重程度相关。CD4+/CD8+比值下降，表明机体处于免疫抑制状态，上调比值可增强细胞免疫，同时促进B细胞活化和分化增强体液免疫。结果显示建立AP大鼠模型后各组CD4+/CD8+比值均下降，而AP-鱼油营养组比值下降的幅度较小，说明这组大鼠免疫功能下降较少。 多不饱和脂肪酸是人类的必需脂肪酸，对人体有重要的生理功能。n-3多不饱和脂肪酸或鱼油的补充能改善一些免疫性疾病，抑制炎症反应。其机制包括：n-3多不饱和脂肪酸(EPA、DHA)能置换细胞膜磷脂中的花生四烯酸，竞争环氧合酶和脂氧合酶从而减少来源于花生四烯酸的炎性介质，减轻炎症反应。n-3多不饱和脂肪酸也可通过改变细胞膜磷脂脂肪酸构成来影响细胞膜流动性，膜上相关信号分子、酶、受体的功能，从而改变信号传导过程。此外通过影响酶或细胞因子的基因表达、抑制促炎症因子产生、调节黏附分子表达来调节免疫功能7。鱼油中富含的EPA和DHA抑制炎症和免疫的作用最为显著。试验证明口服添加鱼油的肠内营养在减轻AP大鼠的炎性反应，调节其免疫功能方面优于其它组营养成分，至于这种营养成分是否能够降低患AP后的死亡率，尚待进一步深入研究。【参考文献】 1 区金锐，候宝华.重症急性胰腺炎早期液体复苏J.中国实用外科杂志，2007，27（8）：613-615.2 Arrington JL，McMurray DN，Switzer KC, et a1 Docosahexaenoic acid suppresses function of the CD28 costimulatory membrane receptor in primary murine and jurkat T cellsJ J Nutr，2001， 131(4)：1147-1153.3 Mayer K，Meyer S，Reinholz-Muhly M, et a1Short-time infusion of fish oil-based lipid emulsions，approved for parenteral nutrition， reduces monocyte proinflam matory cytokine generation and adhesive interaction with endotheliam in humansJJ Immunol，2003，171(9)：4837-4843.4 熊炯忻,王春友,李晓煇,等.不同类型早期肠道营养对重症急性胰腺炎大鼠细胞因子的影响J.临床消化病