可溶性转铁蛋白受体在慢性肾衰伴缺铁性贫血诊断及治疗中的应用.doc

可溶性转铁蛋白受体在慢性肾衰伴缺铁性贫血诊断及治疗中的应用【关键词】 神经标记物【摘要】 目的 探讨免疫组织化学方法在诊断先天性巨结肠中的作用。方法 对26例疑有先天性巨结肠活检标本的的肠管远、近端粘膜下层，通过HE染色筛选，分别采用PGP9.5、Cathepsin D和S-100蛋白，进行免疫组化染色分析。结果 三者均有特征性价值。结论 交叉组合，更能起到优势互补的作用，使其更加完善准确。先天性巨结肠（Hirschsprung disease.HD）是儿外科常见的消化道疾病。病理诊断依据为病变肠壁的粘膜下及肌间神经丛内神经节细胞缺如，神经纤维增生。典型的病变HE染色光镜诊断并不困难。但在神经节细胞发育未成熟、结构不典型的情况下，就要求更准确、更科学的评价。为此，笔者应用蛋白基因产物9.5（Protein gene product9.5，PGP9.5）、S-100蛋白和CathepsinD免疫组织化学染色，对26例疑有HD活检标本进行交叉组合检测分析。1 资料与方法 1.1 一般资料 收集我院2003年9月2004年7月就诊的26例疑有HD病例。男22例，女4例，年龄最小26天，最大5岁，平均13.65个月。 1.2 免疫组织化学染色与方法 取材于送检的26例疑有先天性巨结肠活检标本，分别取肠管远端粘膜下层和肠管近端肠壁，常规石蜡包埋，连续切片，HE染色筛选免疫组化对象。采用试剂PGP9.5（140）、Cathepsin D（1500）的鼠抗 人单克隆抗体和S100蛋白（1200）的兔抗人多克隆抗体。按着试剂说明“二步法”，分别进行免疫组化染色，观察分析。 1.3 结果判定 PGP9.5、Cathepsin D阳性染色为深褐色颗粒。S100在神经节细胞中不表达，判断价值为特征性的细胞状阴性“空白区”;PGP9.5阳性染色定位于神经节细胞胞浆、胞核和神经纤维;Cathepsin D阳性染色定位于神经节细胞的胞浆中。2 结果 2.1 标志物阳性表达比较 通过标志物对26例疑有先天性巨结肠活检标本的远、近端粘膜下层阳性表达情况比较（见表1）和分析，结合HE染色，结果显示近端结肠粘膜下神经节细胞皆存在;远端结肠粘膜下神经节细胞有24例缺乏，有2例见到神经节细胞，结合临床及HE染色，26例疑有先天性巨结肠活检标本中，有24例诊断为先天性巨结肠，有2例排除先天性巨结肠。表1 标志物在26例疑有先天性巨结肠活检标本的远、近端粘膜下层阳性表达情况比较 (略)2.2 标志物的定位染色比较 在近端肠管粘膜下层的定位染色比较（见表2），PGP9.5在神经节细胞胞浆、神经节细胞核和神经纤维均表达（见图1），在神经胶质中细胞不表达，特异性好;Cathepsin D在神经节细胞特异性染色，胞浆表达（见图2），胞核阴性，不对任何神经成分染色，除神经元、粘膜及淋巴结的吞噬细胞以外，对任何其他组织均阴性，但在神经节细胞表达阳性率不是100%;S100蛋白在神经节细胞不表达，表现为特征性的细胞状阴影“空白区”（见图3）。 表2 近端肠管粘膜下层的定位染色作用比较(略)3 讨论先天性巨结肠是儿外科常见的消化道疾病，病理诊断的最基本方法是HE染色的组织学检查，简便，诊断率也较高。但是随着对先天性巨结肠及其类源病认识的不断深入，治疗手段和诊断方式的不断改进，先天性巨结肠的确诊就要求更准确的评价。在改良经肛脱出术式中，送检肠管病变段大多为缺乏浆肌层的远端粘膜下层;在粘膜活检时，送检标本均为粘膜下层小组织。通常粘膜下神经丛比肌间神经丛稀疏，体积也较小，所含的节细胞较少，粘膜下神经节细胞比肌间神经节细胞体积小。镜检时，神经丛和节细胞常需要与小血管、炎细胞、巨噬细胞、团状平滑肌以及神经丛内的雪旺氏细胞核的横切面相鉴别 2 。由于小儿神经节细胞发育有一个逐渐成熟的过程，粘膜下层的神经节细胞在4岁时才完全成熟，尤其在新生儿时期，发育更是不成熟。HE染色对于识别发育未成熟、结构不典型的神经节细胞有一定难度。乙酰胆碱酯酶组织化学方法是一种很有价值的检测措施，但阳性率过高，有误诊的可能，并受限于冰冻切片 1 。随着免疫组织化学的普遍应用，许多方法被应用于先天性巨结肠的诊断。单纯的NSE和Cathepsin D染色都是比较准确的辅助诊断方法，但也有相对不足之处，NSE多克隆抗体表达的特异性相对欠缺，Cathepsin D表达阳性率不够全面。 本文介绍的免疫组化方法，蛋白基因产物9.5（Protein gene product9.5PGP9.5）是一种对粘膜肌层和固有层中异常胆碱能神经染色的神经元标志物，存在于中枢和外周神经系统的各个水平及神经内分泌细胞中，在胞浆和细胞核中表达;Cathepsin D是一种溶酶体天冬氨酸蛋白酶，染色特异性高，仅限于肠神经节细胞，不显示任何神经纤维，不在内皮细胞、淋巴细胞及支持细胞等与未成熟的神经细胞相似的细胞中反应。S100抗体的染色模式很有用，为它突出了阴性染色的神经节细胞，在神经节细胞不表达则表现为特征的细胞状阴影“空白区”。三种标记物单一使用，在某些情况下，仍有不完善之处。Cathepsin D是粘膜下神经节细胞较好的标记物，但表达阳性率不全，配合神经节细胞表达全面的PGP9.5可形成互补;在神经丛内节细胞不成熟情况下，应用PGP9.5也难以辨认时，配合S100抗体，利用其特征的细胞状阴影“空白区”来判定。以上三种标记物交叉组合使用，可起到优势互补的