复方二氟沙星注射剂对实验性猪链球菌病的疗效观察.doc

复方二氟沙星注射剂对实验性猪链球菌病的疗效观察【摘要】 目的 应用自行研制的复方二氟沙星注射剂对试验性猪链球菌病的病例进行了治疗性研究。方法 测定了复方二氟沙星对C群链球菌最小抑菌浓度，并且对人工诱发的猪链球菌病进行三个剂量组的实验性治疗。结果 复方二氟沙星和二氟沙星对C群链球菌的MIC是0.4 mg/L及1.6 mg/L。在治疗实验中，复方二氟沙星的低、中、高剂量组的治疗效果均高于对照组，且复方二氟沙星的中、高剂量组15 d内的增重高于对照组。 结论 复方二氟沙星对猪链球菌病有显著的疗效，且明显优于二氟沙星，肌肉注射给药剂量为510 mg/kgw。 【关键词】 二氟沙星；猪链球菌；药敏实验；疗效 Abstract：Objective The objective was to apply injectable preparation of complex difloxacin to treat the cases of experimental swine streptococcosis. Methods The MIC of complex difloxacin for streptococcosis of group C was determined and experimental treatment in three different dosages was done for artificially evoked swine streptococcosis. Results The MIC of complex difloxacin and difloxacin for swine streptococcosis of group C were 0.4 mg/L and 1.6 mg/L respectively. In the experiment of treatment, the curative effects of complex difloxacin of LD, MD and HD groups were higher than those of control group. Moreover, the weight gain of MD and HD groups was more than that of control group. Conclusions Complex difloxacin has obvious curative effect on swine streptococcosis, which was better than that of difloxacin. The dosage for intramuscular injection was 510 mg/kgw. Key words:difloxacin; streptococcosis; drug sensitivity test; curative effect 二氟沙星为动物专用的氟喹诺酮类药物。其抗菌谱广，对大多数革兰氏阳性菌和阴性菌、支原体及某些耐药菌株有很好的抗菌活性1。但由于二氟沙星在兽医临床上的广泛应用，现在已产生耐药性，为了延长二氟沙星在兽医临床的使用时间，增强二氟沙星的药效，我院药学实验室研制了复方二氟沙星注射剂。本试验的目的是测定复方二氟沙星对C群链球菌最小抑菌浓度，以及对人工诱发的猪链球菌病进行实验性治疗，并与二氟沙星的疗效进行比较，为兽医临床合理应用复方二氟沙星提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 复方二氟沙星注射液由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提供。二氟沙星对照品由中国兽药监察所提供，所用试剂均为分析纯。 1.2 菌种及菌液制备 C55120(C74-41) C群链球菌株冻干强毒，由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提供。取链球菌保存菌接种于液体培养基中作第二次传代，并测定第二代菌落形成单位(CFU/mL)，20冰箱保存。使用前，把菌液稀释成10亿个菌/mL。 1.3 试验动物 健康杜洛克、长白、约克夏三元杂交猪，公母兼有，4050 d，体重为10.213.9 kg。出生后未接种过链球菌病菌苗。试验前猪按常规饲养，喂不含抗菌药物的全价饲料，自由饮水。链球菌病的疗效试验用60头猪，人工发病前，经细菌学检查阴性，临诊观察健康，随机各分成6组。 1.4 复方二氟沙星对链球菌最小抑菌浓度（MIC）的测定 采用试管二倍稀释法。取无菌带塞试管15只，于第一管加入液体培养基0.9 mL，其余各管加入0.5 mL，再于第一管加入药液0.1 mL并混合均匀后，取0.5 mL加入第二管，依次类推，至13管，吸出0.5 mL滴入营养琼脂平皿上，供无菌检查。然后于113管加入稀释好的菌液0.5 mL。14管为培养物对照，15管为培养基对照。37培养1618 h。对照药物为二氟沙星。 判定标准：当对照物浑浊、对照培养基不混浊，以不发生浑浊变化的最小浓度判为该药的MIC。每种药物重复5次。 1.5 人工发病 1.5.1 人工诱发猪链球菌病 每头猪均按每1 kg体重静脉注射链球菌菌液0.1 mL（含1亿个菌），诱发猪链球菌病。接种链球菌前及接种后，测直肠体温，观察精神状态、食欲、粪便及关节、步态等。死亡猪只均进行尸体剖检，无菌操作技术取肝、脾及肠系膜淋巴结进行细菌分离培养 。 1.5.2 动物回归试验 选取同样条件下饲养的40 d健康杜洛克、长白、约克夏三元杂交仔猪5头，肌肉接种4 mL，6 h后的部分猪出现链球病临床症状，而健康对照组没有病例出现。3 d后死亡，剖检可见，鼻粘膜紫红色，充血；气管充血见大量泡沫；心包积液，淡黄色；腹腔有少量淡黄色积液；肾肿大，发黑；胃底部及肠粘膜出血严重，膀胱无出血点，淋巴结肿大。取心血、肝、脾脏接种于血液琼脂斜面、肉汤、置37培养20 h2。经细菌分离、形态鉴定、生化实验及动物回归实验对分离菌株进行鉴定，结果确定该致病菌为猪链球菌。 1.6 实验性治疗 当接种链球菌后约6 h，猪只出现体温显著升高、精神沉郁、食欲下降或废绝等症时，按表2分别对治疗组猪进行肌注给药，每次间隔12 h，连用5 d。每次用药前测量直肠体温及临诊症状。观察期为第1次给药后15 d，并对每头猪进行试验前后的称重及体况观察 。 1.7 疗效评价指标 1.7.1 死亡率 在试验期间，猪只出现链球菌病的典型病状并死亡，尸体剖检有典型特征性病变，并从肝、脾及肠系膜淋巴结中分离出链球菌。根据每组动物中的死亡数计算死亡率。 死亡率=试验期间死亡动物总数/试验动物数100 1.7.2 治愈率 在试验期间，猪只用药后体温、精神、食欲均恢复正常，不再出现跛行等临诊症状为治愈。根据每组动物中的治愈数计算治愈率。 治愈率=治愈动物数/发病动物数100 1.7.3 有效率 治愈的猪和肌注给药后体温降低或恢复正常，食欲增加，但出现跛行等症状的猪，均判定为有效。据此计算有效率。 有效率=治疗有效动物数/发病动物数100 1.7.4 增重 根据试验开始时及试验结束时每头猪的体重，计算每头猪的增重量，然后据此计算每组试验猪的平均增重和标准差。相对增重率是按各用药治疗组与健康对照组的平均增重之比计算，其中健康对照组设定为100。 平均增重=每组总增重/每组动物数 相对增重率=用药组平均增重/健康组平均增重100 1.8 数据分析和处理生物统计方法 死亡率、有效率及治愈率均用卡方检验，增重采用F检验。 表1 复方二氟沙星治疗实验性感染猪链球菌病的实验猪分组及给药情况组别数量（头）用药名称 用法及剂量120健康对照组220感染对照组320复方二氟沙星低剂量组肌注，2.5 mg/kg,每隔12 h 1次，连用5 d420复方二氟沙星中剂量组肌注，5 mg/kg，每隔12 h 1次，连用5 d520复方二氟沙星高剂量组肌注，10 mg/kg,每隔12 h 1次，连用5 d620二氟沙星剂量组肌注，2.5 mg/kg,每隔12 h 1次，连用5 d 2 结 果 2.1 复方二氟沙星的MIC值 复方二氟沙星和二氟沙星对C群链球菌的MIC是0.4 mg/L及1.6 mg/L。 2.2 人工发病试验 2.2.1 感染对照组 感染对照猪均出现体温显著升高（1.21.9），食欲不振或废食，有浆性鼻漏，眼结膜潮红、流泪；接种后24 d，病猪出现多发性关节炎，跛行、爬行或不能站立。死亡动物剖检主要可见败血型猪链球菌病的病变，从肝、脾及肠系膜淋巴结均能分离到大量链球菌。未死亡的猪在试验结束时仍有前肢或后肢跛行症状，15 d的增重为负值。 2.2.2 实验性疗效 复方二氟沙星肌注给药对实验性感染猪链球菌病的疗效及增重结果见表2。 表2 复方二氟沙星肌注给药对实验性感染猪链球菌病的疗效组别死亡率 由表2结果中可看出，实验各组发病后经过4 d治疗后，复方二氟沙星注射液低、中、高剂量组的治愈率、有效率明显的高于感染组和二氟沙星注射液实验组，而死亡率明显低于感染组和二氟沙星注射液实验组；猪只15 d的增重和相对增重率也明显的高于感染对照组和二氟沙星注射液实验组，但都低于健康对照组。 3 讨 论 3.1 关于复方二氟沙星注射液的体外抗菌活性 文献报道盐酸二氟沙星对猪链球菌的MIC值为0.51.6 mg/L3。本试验二氟沙星的MIC值与文献报导基本相符，而复方二氟沙星对猪链球菌的MIC值未见报道。本试验测定复方二氟沙星的MIC值为0.4 mg/L，可见，复方二氟沙星的MIC值较二氟沙星的MIC（1.6 mg/L）值明显降低，这是因为复方二氟沙星的有效成份在二氟沙星的基础上，填加了TMP和其它增效因子所致。 3.2 关于复方二氟沙星对实验性猪链球菌病的疗效 统计学分析药物对猪链球菌病的疗效，结果表明复方二氟沙星低、中、高剂量组及二氟沙星组的死亡率极显著低于感染对照组的死亡率（P0.01）；它们的治愈率及有效率亦极显著高于感染对照组的治愈率（P0.01）。表明低、中、高剂量的复方二氟沙星及二氟沙星均对猪链球菌病有疗效。但是，复方二氟沙星的低、中、高剂量组的治愈率及有效率与二氟沙星组的相比，统计学上差异极显著（P0.01），同时，三个剂量组及二氟沙星组的增重效果均极显著高于感染对照组（P0.01），但稍低于健康对照组。说明复方二氟沙星治疗猪链球菌病有显著的临床疗效，且明显优于二氟沙星。国内曾振灵等应用二氟沙星治疗实验性猪链球菌病,有效率为80,本试验借鉴其试验方法，结果表明复方二氟沙星三个剂量组的有效率均在85以上,可见,复方二氟沙星对猪链球菌病的疗效好于二氟沙星。复方二氟沙星的体外抑菌活性已显示出其在猪链球菌病防治方面会有广阔的前景。【参考文献】 1 Zeng ZL，Fang BH，Chen ZL，et al.Pharmacodynamics of difloxacin against experimentally induced Streptococosis and Mycoplasmal pneumonia in pigsJ.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2001，32(2)：175-180.2 Zeng ZL,Ding HZ, Huang XH,et al. Pharmacokinetics