林蛙油对冷应激小鼠肾上腺超微结构的影响.doc

林蛙油对冷应激小鼠肾上腺超微结构的影响【摘要】 目的 观察林蛙油在冷应激下对小鼠肾上腺超微结构的影响。方法 48只小鼠随机分为对照组、冷应激组、林蛙油组，连续灌胃14 d。将冷应激组和林蛙油组各取12只小鼠进行耐寒实验；冷应激组和林蛙油组剩余小鼠每天灌胃30 min后，置-10冰箱中30 min，共14 d，观察肾上腺超微结构。结果 林蛙油组小鼠存活率高，与冷应激组差异显著（P0.05）。超微结构显示，冷应激组小鼠肾上腺超微结构出现损伤，而林蛙油组小鼠细胞结构变化不明显。结论 林蛙油对肾上腺组织细胞结构具有保护作用，能增强小鼠的耐寒能力。 【关键词】 林蛙油；冷应激；肾上腺；超微结构林蛙油含有多种营养成分和生理活性物质。传统中医证实其具有健脾胃、滋阴补肾、润肺生津之功效。对体虚气弱、气血亏损、精力耗损、记忆力不佳、神经性头痛、神经衰弱均有疗效。现代医学研究表明，林蛙油具有明显抗疲劳、抗衰老、抗氧化、调节血脂、调节人体内分泌等多种保健作用14，但尚未见林蛙油在冷应激情况下对机体保护作用的研究报道。本实验观察了林蛙油对冷应激情况下小鼠肾上腺超微结构和耐寒能力的影响。 1 材料与方法 1.1 样品来源 林蛙油为吉林桦甸产市售，按成人日摄入量5 g/60 kg体重的5倍设计。将林蛙油泡发12 h后，蒸15 min，用组织匀浆机打成匀浆液。 1.2 实验动物 昆明种成年雄性小鼠48只，4月龄体重2830 g，长春生物制品研究所动物室提供，适应1 w，随机分为3组：对照组、冷应激组和林蛙油组，每组16只，自由摄食和水。 1.3 实验方法 1.3.1 耐寒实验 对照组和冷应激组灌胃0.2 ml生理盐水，林蛙油组灌林蛙油匀浆液0.2 ml，连续14 d，末次灌胃1 h后，将冷应激组和林蛙油组各取12只小鼠放在-10冰柜中，每隔30 min观察1次，小鼠总数中死亡一半为界，记录各组小鼠死亡数，计算存活率。存活率每组小鼠存活数/每组实验小鼠数100%。各组每天上午9点进行灌胃。 1.3.2 肾上腺超微结构观察 剩余的小鼠继续灌胃，每天灌胃30 min后，冷应激组和林蛙油组置-10冰箱中30 min，共进行14 d，于末次实验1 h后,各组取小鼠3只，1%戊巴比妥钠水溶液腹腔注射麻醉，固定在解剖台上，开胸暴露心脏，左心室插管，固定，剪开右心耳，灌注37的生理盐水至肝脏流出液不见血色为止，再注入42%多聚甲醛2.5%戊二醛固定液，先快后慢，灌注20 ml左右。开腹取右侧肾上腺，去除周围的脂肪组织,1%锇酸后固定，梯度丙酮脱水，Epon812包埋，LKM超薄切片机切片，透射电子显微镜JEM1200EX进行观察照相。 1.4 统计学方法 用SPSS11.0统计软件进行统计分析。 2 结 果 2.1 林蛙油对小鼠耐寒能力的影响 冷应激组和林蛙油组小鼠存活数分别是3只和9只，存活率为25%和75%，二组比较差异显著(P0.05)。 2.2 林蛙油对冷应激小鼠肾上腺超微结构的影响 对照组肾上腺皮质束状带和网状带细胞索粗，细胞间隙小；细胞体积较大，核呈圆形，核仁明显，核内常染色质多，胞质内可见较多线粒体、脂滴；血窦内皮细胞核较大，呈扁平形，窦腔窄。肾上腺髓质细胞体积较大，核仁明显，核内常染色质多，胞质内有较多的线粒体和分泌颗粒。冷应激组肾上腺皮质束状带和网状带细胞索变细，细胞间隙增大；细胞体积小，细胞核小，呈固缩状，胞质致密，细胞器不易辨，线粒体少，嵴呈致密状。血窦内皮细胞体积小，内皮细胞核固缩，胞质致密，血窦腔较大；肾上腺髓质细胞之间出现间隙，核膜不规整，局部胞质致密，胞质内细胞器少，分泌颗粒减少，出现一些小空泡。林蛙油组细胞结构变化不明显。见图1、图2。 图1 各组肾上腺皮质束状带细胞（4 000）图2 各组肾上腺髓质嗜铬细胞（4 000） 3 讨 论 冷应激常引起神经内分泌功能及免疫功能紊乱，同时冷应激可引起脂质过氧化增强，产生大量自由基。寒冷应激发生的机制几乎涉及到所有的器官和组织，其中主要以神经内分泌为主，通过交感肾上腺髓质系统、下丘脑垂体肾上腺皮质系统及下丘脑垂体甲状腺轴等实现，引起肾上腺糖皮质激素和盐皮质激素分泌增加5。肾上腺作为机体的重要内分泌腺，其所分泌的激素调节机体的生理活动。本研究结果显示，服用林蛙油后，肾上腺皮质束状带和网状带细胞索较冷应激组明显增粗，细胞较大，核内常染色质多，异染色质少，胞质内有丰富的线粒体、滑面内质网和脂滴。血窦内皮细胞呈扁平形，窦腔较窄。肾上腺髓质细胞之间连接紧密，核仁明显，胞膜规整，胞质内有丰富的线粒体和分泌颗粒。提示在冷环境下林蛙油对肾上腺细胞具有保护作用。 随着年龄的增加，机体自身机能的减退，内环境稳定能力与应激能力下降。冷应激对机体是一种应激因素，并继发和加重多种疾病。寒冷可诱发脑卒中6，天气寒冷可增加50岁以上妇女因卒中或心脏病发作入院人数7。冷应激可使机体抗氧化功能发生改变，导致机体内自由基增加，对机体造成损伤。现已研究表明，林蛙油含有多种营养素，在所含维生素和生理活性物质中尤以维生素E、雌二醇、甲状腺素和促绒毛膜性腺激素含量较多，表明具有极强的抗氧化和调节新陈代谢、提高生命活力的作用8。尤其维生素E是机体内重要的抗氧化剂，能抑制体内脂质过氧化反应，缓解机体对寒冷刺激产生的应激效应，促进机体对寒冷的适应，提高机体耐寒能力。在寒冷环境中使用林蛙油，使机体能够保持正常生理机能，消除、缓解不利反应，对保护机体健康、预防和治疗疾病有积极意义。【参考文献】 1 崔敬爱，胡耀军.林蛙油软胶囊小鼠负重游泳试验的研究J.食品科学， 2005；26(8)：3735.2 李月红，黄 权，周景祥，等.林蛙油对衰老小鼠部分生理指标的影响J.吉林农业大学学报，2004；26(6):6468.3 于 勇,刘 阳，范文今，等.林蛙油耐缺氧与调节血脂作用J.环境与职业医学，2002；19(3):2045.4 李妍妍，郑卫星，苏秀榕，等.林蛙油及其酶解液抗氧化活性的研究J.食品科学，2008；29（11）：61921.5 杨 明，李庆芬.哺乳动物冷应激的主要神经内分泌反应J.动物学研究，2002；23（4）：335.6 解龙昌，黄如训，李常新，等.人工寒潮促发脑卒中