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PCR测定临床应用及结果临床意义,北京大学人民医院 张正 100044,概述 临床PCR检测三条件 SDA批准使用的试剂盒 国家批准符合要求的实验室 经行政部门同意并培训后持证上岗,关于结核杆菌等5项检测的 具体应用, 结核分枝杆菌(TB),靶序列来源: a. 单抗检出的TB抗原旦白编码基因 b. TB特异性核酸片段克隆 c. 插入序列,实验设计特点,举例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp; 16sDNA,584bp.,注意事项 标本处理 ：痰液化，抑制物去除 试剂质控及灵敏度,临床评价 结核的PCR临床主要应用 a.结核与其他分枝杆菌区分 b.结核耐药基因 c.对含菌量低的标本的分离 d.为临床可疑者捕捉信息, PCR方法与痰涂片及TB培养的比较 应做比对研究,临床评价,沙眼衣原体(Ct),实验设计特点 靶及引物选择 外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) 7.5kb质粒 隐蔽性基因质粒拷贝 16srRNA基因,注意事项 标本取材是关键,临床评价 细胞培养 McCoy. Hela-229金标准 ELA法 PCR法.专家希望此法为新金标,HBV-DNA,. 实验设计特点 S及C混合引物 定量用治疗监测 104 , 106,临床评价 一 般临床靠免疫标志 但无法明确时可测 拉米呋定及干扰素治疗监测 新问题研究,HCV-RNA,实验室设计特点 需扩增二次 低温启动UDG系统-RNA不稳定性,注意事项 防止RNase污染 杜绝溶血,临床评估 定性用于诊断(只有抗HCV无法 决定病毒存在状况） 定量用于治疗监测,HLA,方法:免疫学 分子生物学 ： PCR SSCP RFLP 基因芯片 I 类(A,B,C) 与疾病发生频率有关 II 类(DR,DQ,DP) 等 移植配型,DR为例 设计10条特异性引物:DR1-DR10 设计2条组特异性引物:3568,DRB1 选择其中某些组合成上,下游引物 据bp数推算等位基因,局限性: DR6用排它法 有6种表型(DR3/DR3, DR8/DR6等)不能区分,临床评价中共同问题,假阳:残余模板的污染 其它 假阴:标本处理不当 其它,假阳性与假阴性,不能单向强调PCR的优势和检出率应 与传统方法比对,合理判断,阳性率与“金标准”,临床实践是检验
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