梅毒检测方法-杨晓亮.ppt

梅毒检测方法的对比,杨晓亮,梅毒螺旋体,苍白梅毒螺旋体，抵抗力极弱 人是唯一的传染源 先天性：母婴传播 后天性：主要是以性传播，也可经输血 传播,一期梅毒,感染3周后左右，出现无痛性硬下疳，感染性极强,二期梅毒,发生于出现硬下疳2-8周，全身梅毒疹，淋巴结肿大，传染性极强,三期梅毒,发生于感染2年后，也可长达10-15年，慢性肉芽肿。,快速、准确、尽早地检测出梅毒螺旋体成为头等大事！,梅毒检测现状,梅毒螺旋体检查 血清学检查法,梅毒螺旋体检查,暗视野显微镜检查、直接免疫荧光实验（）及梅毒螺旋体镀银染色检查，其中的特异性较高。 适用于一、二期梅毒有病损者的患者，受取材及特殊显微镜限制，耗时长，难以为临床所接受。,镀银染色,暗视野,血清学检查法,感染梅毒后，人体内会产生两类抗体： 直接针对TP的特异性抗体 是针对类脂质的抗体，无特异性,血清学检查法,非螺旋体抗原试验(非特异性试验) 螺旋体抗原试验(特异性试验),非特异性试验,类脂质为抗原检查病人反应素的试验方法,世界卫生组织确认诊断梅毒的标准试验有： 1、性病研究实验室(VDRL)试验（国外常用） 2、不加热血清反应素(USR)实验 3、快速血浆反应素(RPR)试验（国内常用） 4 、甲苯胺红（TRUST）试验（国内常用）,性病研究实验室(VDRL)试验,用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原与待测56加热灭活血清反应，由于摇动、碰撞，形成抗原抗体复合物，而形成肉眼可见的凝集颗粒，即为阳性反应。 本法可作定量及定性试验，试剂及对照血清已标准化，费用低。此法常用，操作简单，需用显微镜读取结果，缺点是一期梅毒敏感性不高。,不加热血清反应素(USR)实验,USR是VDRL抗原的改良，使用血清无需加热，敏感性及特异性与VDRL相似，试验结果可用肉眼观察,快速血浆反应素试验（RPR）,RPR则是USR的改良，将抗原包裹在活性炭颗粒上，敏感性及特异性与VDRL相似，优点是肉眼即可读出结果。,甲苯胺红试验（TRUST）,TRUST是RPR抗原的改良，将RPR试剂中活性炭颗粒换成甲苯胺红颗粒。,TRUST法与RPR法的对比,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本： TRUST试剂稳定性强 TRUST检出率和重复性高 TRUST试剂中表面包裹抗原的甲苯胺红颗粒比RPR试剂中的活性炭颗粒小更易耐受振荡导致,非特异性试验的优点,标准化抗原，敏感性相似 一般用于初筛和疗效随访 操作简易，费用低廉,非特异性试验的缺点,敏感性和特异性差 生物学假阳性高 假阳性可出现在急、慢性感染,妊娠,高丙种球蛋白血症,结缔组织病,溶血性贫血和其他自身免疫性疾病,也可出现在老年人和一些健康人,但多数情况下查不出原因。,特异性试验,原理：以梅毒密螺旋体本身或非致病的密螺旋体为抗原,以检查病人血清中抗密螺旋体的特异性抗体。,目前应用的方法,密螺旋体荧光抗体吸收（FTA-ABS） 梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA) 梅毒密螺旋体凝集试验 （TPPA） 蛋白印迹试验 (WB) 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 聚合酶链反应(PCR) 胶体金免疫层析法（GICA）,密螺旋体荧光抗体吸收（FTA-ABS）,被认为是当前敏感性和特异性最高的试验方法 窗口期短：在1期梅毒头几天就可以测出特异性抗体F3G 但提取物为活菌，存在潜在危险性，故其应用受到很大限制。 操作难度大，不做首选,梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA),特异性高 易操作和定量 试剂昂贵、不易保存和标准化 生物学假阳性率低。,梅毒密螺旋体凝集试验 （TPPA）,将TP Nichols株的精制纯化抗原包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的TP抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体TP抗体,并且可用来测定抗体效价。,TPPA和TPHA对比,TPPA包含了梅毒螺旋体的所有片段，敏感性更高 ，结果更易观察 TPPA试剂稳定性、特异性、敏感性批间差优于TPHA TPHA（试剂保存时间短，批间差大）,蛋白印迹试验（WB）,免疫印迹法检测梅毒特异性抗体敏感度等于或高于其它同类方法 特异性与ELISA和TPPA两种方法相同 免疫印迹法敏感度高,特异性好,操作简单,不需特殊仪器设备,阴阳性结果界线分明,易于判断,适应于临床广泛开展。,酶联免疫吸附试验 (ELISA),原理为双抗原夹心法,采用梅毒抗原包被在酶标板上, 以辣根过氧化酶标记物的梅毒抗原,测定梅毒感染的特异性抗体。,优点,特异性和敏感性均为96%（与FTA-ABS法比较） 操作简便，可大批量完成标本的检测 易于自动化，成本低 试剂稳定，保存时间久,缺点：,假阳性较之TPPA高 分析原因： 1、试剂敏感性高（宁可错杀三千 不可放过一个） 2、人为操作,聚合酶链反应(PCR),优点： 直接检测TP的DNA物质,在早期梅毒、先天性及神经性梅毒诊断中敏感性和特异性高 缺点： 普通实验室操作中容易造成PCR污染 仅用于检测病原,故并不能取代梅毒血清学检测方法。,胶体金免疫层析法（GICA）,使用胶体金作为标记物的一种固相膜免疫测定方法,检测梅毒特异性抗体,采用了双抗夹心法 二期梅毒、三期梅毒、晚期潜伏梅毒的阳性试验符合率为100%,在一期梅毒中的敏感度为80%85%,对早期梅毒的敏感性均较差。,如何选择血清学试验？,WHO推荐用VDRL、RPR、TRUST对血清进行过筛试验 出现阳性者再用ELISA、TPPA等特异性方法做确认试验,TRUST（+），ELISA（+）、TPPA（+） TRUST（+），ELISA（-）、TPPA（-） TRUST（-），ELISA（+）、TPPA（+）,漏检,综上所述，RPR法和TRUST法虽操作简便、敏感性和特异性不够理想、早期和晚期梅毒检出率较低，且易受主观判断、溶血等因素干扰 TPPA法和TPHA法敏感性好、特异性强，是梅毒的确证方法，但条件要求较高、操作繁杂 ELISA敏感性和特异性较好、性能稳定且能仪器自动化等优点，其应用范