EBER及HPV原位杂交试剂盒及相关产品知识.ppt

原位杂交产品知识介绍,原位杂交 vs 免疫组化,原位杂交：核酸水平，碱基互补配对 免疫组化：蛋白水平，抗原抗体反应 杂交更具特异性,原位杂交的应用,没有好的抗体 核酸量远多于蛋白 蛋白为分泌型 抗体背景高度着色,探 针 主 要 类 型,双链DNA探针：如HPV 单链DNA探针：如EBER 寡核苷酸探针 RNA探针,EBER原位杂交原理,EBER：EBV编码的小RNA，胞核内 EBER表达量很高，各期均可表达，最适用于临床诊断EBV感染 原理：单链DNA探针与小RNA杂交 定位：细胞核,EBER的临床应用价值（一）,诊断EBV感染性疾病，如：传染性单核细胞增多症、慢性活动性EBV感染 协助诊断特殊部位肿瘤，如：鼻型NK/T细胞淋巴瘤 ，鼻咽癌 协助诊断免疫缺陷状态下的淋巴组织增生，如：器官移植后淋巴增生性疾患 协助识别EBV阳性细胞，如：RS细胞,协助临床诊断：,EBER的临床应用价值（二）,EBV感染性疾病：抗病毒治疗，预后好 器官移植后淋巴增生性疾患：早期预后较好 EBV(+)的非霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后差 EBV(+)的霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后好或无显著差异 鼻型NK/T细胞淋巴瘤：预后很差,协助了解预后和指导治疗：,EBER原位杂交的主要过程,酶消化 变性：55C 杂交：37C 杂交：单链DNA探针与RNA病毒互补配对 显色：细胞核着色,图1 传染性单核细胞增多症,图2 经典霍奇金淋巴瘤, RS细胞,（摘自周小鸽教授资料）,目录,背景知识 临床应用价值 原位杂交原理 市场定位和优势,HPV产品的：,一般介绍,HPV（Human Papilloma Virus，人乳头瘤病毒）：双链DNA病毒，110种以上 HPV可感染多种器官和组织 HPV主要分为皮肤型和生殖道粘膜型 男女生殖系统均可感染HPV 宫颈HPV感染最为常见，举例介绍,HPV与宫颈癌的关系（一）,HPV主要分为高危、低危型 高危型： 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, W123B，与宫颈癌关系密切 低危型：6,11等 HPV平均感染期为8个月，大多数感染可以自然消退。 HPV16,18最易感染，且感染期最长。,HPV与宫颈癌的关系（二）,宫颈癌的发生率在女性恶性肿瘤中排第二位，仅次于乳腺癌。 99.7%的宫颈癌患者体内存在HPV。 好发部位：宫颈鳞状上皮和柱状上皮的交界处。,宫颈癌演变过程,尖锐湿疣，CIN I CIN II CIN III （重度非典型增生+CIS） 早期浸润癌 浸润癌 概念： CIN：宫颈上皮内瘤，包括非典型增生和原位癌；病变 局限于上皮细胞层内，未突破全层 CIN I： 轻度非典型增生（病变不到上皮1/3） CIN II： 中度非典型增生（病变达到1/3，不到2/3） CIN III：重度非典型增生（病变达到2/3，但未及全层 ） 及原位癌 CIS：原位癌，病变累及全层，但未突破基底膜,宫颈病变的治疗,宫颈癌术后存活率,宫颈浸润癌5年存活率：67% 宫颈早期浸润癌：90% 宫颈原位癌：100%,结 论, HPV是宫颈癌的主要致病因素 宫颈癌早期诊断、早期治疗意义重大 对宫颈病变不同阶段的诊断，决定了临床治疗方式、随诊方案,目录,背景知识 临床应用价值 原位杂交原理 市场定位和优势,HPV产品的：,宫 颈 癌 筛 查,巴氏涂片（PAP涂片） CCT（电脑辅助宫颈细胞学检测系统） TCT（膜氏液基超薄细胞学检测系统） CCT、TCT都是PAP方法的改进 HPV-DNA病毒学检测 TCT+HPV检测（HC） 阴道镜下活检 即病理切片检查，严格说，已不属筛查范围,杂交捕获 vs 原位杂交,杂交捕获(HC)：定性，分型，临床，筛查 原位杂交(ISH)：定性，定位，分型，病理， 诊断 HC与ISH在应用上互补,HPV原位杂交产品的临床应用价值,病因学诊断 协助病变分期 作为预测因素 指导疫苗应用,目录,背景知识 临床应用价值 原位杂交原理 市场定位和优势,HPV产品的：,HPV原位杂交的主要过程,微波修复：暴露核酸 变性：打开双链DNA探针、双链DNA病毒 杂交：单链DNA探针与单链DNA病毒互补配对 显色：细胞核着色,操 作 要 点,微波高火，30分钟 变性95C，8分钟 杂交：37C 杂交液与盖玻片大小匹配 条件匹配，充分洗涤,尖锐湿疣 ，H P V通用型（泰普试剂盒）,尖锐湿疣，HPV 6/11型（泰普试剂盒）,尖锐湿疣，HPV 16/18 （泰普试剂盒）,宫颈癌，HPV 16/18 （泰普试剂盒）,宫颈癌，HPV 16/18 （泰普试剂盒）,目录,背景知识 临床应用价值 原位杂交原理 市场定位和优势,HPV产品的：,市 场 定 位,目标科室：病理科 目标客户：病理医生 产品目的：协助病因诊断及病理分期,产 品 类 型,高危型：16/18型 通用型（28种亚型） 低危型：6/11型,使 用 指 导（一）,生殖道炎症与尖锐湿疣的鉴别诊断及预后 选用：通用型（28种亚型）、16/18型、6/11型原位杂交 通用型（+）： 尖锐湿疣 16/18型（+）： 提示癌变趋向 6/11型（+）： 病因诊断、提示预后,使 用 指 导（二）,尖锐湿疣、CIN I、CIN II、CIN III 首选：16/18型原位杂交 参考：通用型原位杂交（避免漏诊） 目的：16/18型阳性，可提高病变诊断级别,使 用 指 导（三）,CIS、宫颈癌 首选：16/18型原位杂交或PCR分型 参考：通用型原位杂交（HPV阳性，辅助诊断） 原因：采用PCR分型，防止因原位杂交灵敏度不够而 可能导致的漏诊,泰普HPV原位杂交 vs PCR,宫颈癌组织： 原位杂交：20例（） PCR：20例（）（临床禁） 免疫组化：15例（） 5例（）,（北 医 病 理 系 提 供）,产品比较（HPV通用型）,我 们 的 优 势,通用型产品覆盖面广(28种亚型)，包含HPV52/58型； 高危型灵敏度高； 微波修复，容易掌握； 除了普通规格外，还提供20人份的小规格产品， 适合于科研及业务量不大的科室； 在保证质量的前提下，价格最具竞争力；