大肠杆菌的培养和分离.ppt

大肠杆菌的培养和分离,微生物简单介绍,放线菌,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体（种群） 菌落是鉴定菌种的重要依据,结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 应用,大肠杆菌,问题1：用什么培养大肠杆菌？,培养基。,按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,液体培养基,固体培养基,凝固剂 琼脂,扩大培养，工业生产,分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏,选择培养基 鉴定培养基,天然培养基 合成培养基,细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸。,如鉴定分解尿素的细菌，在培养基中添加酚红， 产生红色反应。,LB液体培养基与LB固体培养基。,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物,问题2：在培养过程中如何进行维持无菌状态？,消毒VS灭菌,芽孢为细菌的休眠体， 对不良环境有很强耐受性,较为温和的方法，如酒精,强烈，完全无菌,灭菌消毒技术是微生物有关工作中 最普通也是最重要的技术。,灭菌消毒技术大汇总,1、高压蒸汽灭菌法,1kg/cm2、121 下维持15min.,0.5kg/cm2、90 下维持30min.,防止温度过高，葡萄糖分解碳化 。,2、灼烧灭菌法,接种环、接种针,玻璃刮刀,3、干热灭菌法,160-170 下加热1-2h。,4、G6玻璃纱漏斗过滤法,5、其他,三角瓶用封口膜、超净台操作（含紫外灯、过滤风）,在接种时要速度快,3、如何分离大肠杆菌,划线分离法,（平板划线分离法）,培养皿倒置,划线的末端 出现不连续的 单菌落,涂布分离法,（稀释）,1、玻璃刮刀放在酒精溶液中待用,2、取出时要经过灼烧,3、一般要稀释菌液进行培养,稀释10-510-7倍， 取0.1ml不同浓度的稀释液,4、大肠杆菌的培养和分离的过程,溶解,计算称量,调pH,分装,加塞，包扎,灭菌,二,倒平板、制斜面,三 大肠杆菌的培养,四 大肠杆菌的分离,划线分离法（或涂布分离法）,使所需细菌大量繁殖,获得单菌落，纯化菌株,五 斜面接种培养,目的菌株的纯培养和菌种保存,一 配制LB培养基,并灭菌,菌种管,实验2：分离以尿素为氮源的微生物,1.如何设计对照？,2.如何把液体培养基配置成固体培养基？,3.如何完成菌液稀释？ 用什么液体来稀释菌液？,4.用什么方法来分离这种微生物？,5.该实验简单的设计思路是什么？,例1、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而 进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、 菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。 （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养 提供了 和 。除此之外， 培养基还必须含有的基本成分是 和 。 （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。,（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了 湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定 在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另 一平板上接种 作为对照进行实验。,（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 （5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为 。,（1）此培养基能否用于植物组织培养？ （2）培养基中加入尿素的目的是 筛选 ，这种培养基属于 培养基。,（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中 的 和 ，实验需要振荡培养，原因是 。,（4）转为固体培养基时，常采用 的 方法接种，获得单菌落后继续筛选。,（5）下列材料或用具：培养细菌用的培养基与培