组织培养课件器官培养.ppt

第五章 器官和组织培养,植物某一器官的全部或部分或器官原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、果实、种子等。 特点：能保持器官所具有的特征性结构。,指形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官组织以及愈伤组织的培养。,器官培养（Organ culture ）,组织培养（Tissue culture）,一、茎的培养,1、类型,茎尖培养： 茎段培养：,嫩茎段常作为快速繁殖的外植体：即当年萌发或新抽出的尚未完全木质化的枝条，其细胞的可塑性大，容易离体培养。,10-100m的茎尖分生组织（脱毒）,带有腋(侧)芽或叶柄、长几厘米的茎节段进行离体培养（快繁）,将经过表面消毒的茎段在无菌条件下，切成几厘米长带节的节段，接种在固体培养基上。经过培养后，在茎段可直接发生不定芽，或先诱导形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根培养基上培养，便可得到完整的小植株。,2、作用,无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究。,3、建立无菌材料（茎段）及培养,图示茎段培养过程,去叶片用自来水冲洗,4、茎的培养发育方向,腋芽萌发 脱分化后产生胚状体（原球茎） 脱分化后直接产生不定器官,脱分化后形成愈伤组织,蝴蝶兰腋芽萌发,5、影响发育方向的因素,外植体大小 培养条件 培养基生长调节剂种类和浓度,微形外植体或分生组织易产生愈伤组织,细胞分裂素和生长素的配比是关键。,21-25，12小时光照/天,举例：影响月季茎段增殖培养的因素 1腋芽在茎段上的位置。每段的一个腋芽培养在无激素的基本培养基上，23天后，接近枝条最顶端的和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育最快。 2去茎顶端的作用。继代培养接种时切去嫩茎的顶芽后，再转接于新鲜培养基上培养，促进嫩茎的增殖。 3嫩茎长度对形成多芽苗的影响。茎段为1-10 mm长短时，对形成多芽苗最有效，而且每个茎段的侧枝数也较多，若切割过短(小于1mm)或过长(11-15mm)都对茎的增殖不利。,4植物生长调节剂的影响。 采用适当浓度的植物生长抑制剂三碘苯甲酸可以促进嫩茎增殖。 6-BA是促进茎增殖最有效的细胞分裂素，浓度在1-3mg/L，浓度高会减少茎的伸长，也对下一步生根起抑制作用。 用1 mg/L 6-BA配合1mg/L NAA，虽然使茎的增殖略有降低，但可使茎得到伸长。赤霉素抑制月季茎的增殖。,二、根的培养 离体根由于具有生长迅速、代谢活跃及在已知条件下培养，可根据需要增减培养基中的成分等优点，对离体根的培养多用于探索植物根系的生理及其代谢活动。 在离体根培养中，自然条件下生长在土壤中的根要解决消毒问题，是非常困难的，常用无菌苗的根作为培养材料。,番茄根的培养过程 番茄种子常规表面消毒，在无菌条件下，在培养基上萌发。 胚根长至30-40 mm后，从根尖一端切取10 mm长接种于固体培养基中。 暗条件下培养4天有侧根发生，7天后又可以切下侧根的根尖作为新的培养材料再进行扩大培养。 由单个直根衍生，并经继代培养而保持遗传性一致的根的培养物，称为离体根的无性系。,硫胺素(维生素B1)和吡哆醇(维生素B6)对离体根培养的作用明显。 碘有利于番茄根的生长。 硼对离体根的生长也具有重要的影响，缺硼会降低根尖细胞的分裂速度，阻碍细胞伸长等。,生长素对不同植物的根离体培养三种反应： 生长素促进离体根的生长(如玉米、小麦等)； 离体根的生长依赖于生长素的作用(如黑麦)； 生长素抑制离体根的生长（樱桃，番茄）。,三、叶的培养,很多植物（非洲紫罗兰、香叶、天竺葵、秋海棠等）的叶片具有很强的再生能力，由于取材方便，数量多且均一性较强，可以作为适宜的外植体。,基本培养过程,取叶片 表面消毒 平放在固体培养基上培养 大多植物的叶组织在离体培养条件下先形成愈伤组织，再分化出胚状体、茎、叶和根。 1.将叶表面洗干净，70乙醇浸泡30秒表面消毒，用0.1升汞浸泡数分钟。 2.叶片在培养基上的生长状况大多依赖于离体时的成熟程度，幼叶比近成熟的叶生长潜力大。,叶片诱导丛生芽生根培养移栽。 非洲紫罗兰嫩叶，70酒精略蘸一下，再0.1升汞溶液消毒5-8 min，无菌水冲洗数次，切成0.5-1 cm的小块接种于 MS + 1 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA 光照条件下培养，35天后叶片直接分化出丛生芽。 小丛生芽转接于1/2 MS + 0.2