实验六叶绿体色素的质及叶绿素ab含量的测定.ppt

实验六 叶绿体色素的性质 及叶绿素a、b含量的测定,一、叶绿体色素的性质,实验原理,光合膜,叶绿体色素,实验原理,叶绿体色素,叶绿素,类胡萝卜素,胡萝卜素,叶黄素,叶绿素b,叶绿素a,（含量占3/4）,（含量占1/4）,实验步骤,1. 叶绿体色素的提取：,称取新鲜叶片4g，剪碎。放入研钵中加丙酮10ml， 少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片 研磨得更充分），研磨成匀浆，再加丙酮50ml，避光保存 至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取 液，放于暗处备用。,Chlb:,C32H28O2N4Mg,COOCH3,COOC20H39,Chla:,C32H30ON4Mg,COOCH3,COOC20H39,+,H2O,Mg,头部：,4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连,尾部：,C20H39(叶醇),2. 光照对叶绿素的影响,取两只试管，分别加入提取液少许：,一支放入黑暗处,一支放在直射光中,2小时后观察颜色变化,？,3. 酸对叶绿素的影响,取少许提取液于试管中，逐滴加入浓HCl,摇匀，观察颜色变化,加醋酸铜粉末少许,水浴，微微加热,观察颜色变化,？,？,4. 金属离子对叶绿素的影响,对酸、碱、光、热不稳定,酸性条件下：叶绿素的镁离子被H取代 碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素 叶绿素酶：叶绿素脱植醇,光照：引起叶绿素光敏氧化 金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代 热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素,Mg,头部：,4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连,尾部：,C20H39(叶醇),叶绿素的降解与色变,-COOCH3,-COOCH3,5. 叶绿素的荧光现象：,取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光 一侧提取液的颜色,？,6. 黄色素与绿色素的分离,取分液漏斗,加20ml乙醚,加提取液10ml,摇动,沿漏斗边缘加30ml蒸馏水,轻摇，静置,分层，弃去下层,蒸馏水冲洗12次,加5ml 30KOH甲醇溶液，,静置10min,加水10ml,振动，静置,分层,用力摇动,？,？,？,？,作 业,描述各实验结果并作出解释,二、叶绿素a、b含量测定,实验原理,（含量占3/4）,（含量占1/4）,叶绿体色素,叶绿素,类胡萝卜素,胡萝卜素,叶黄素,叶绿素b,叶绿素a,分光光度法,根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力， 用Lambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。,Lambert- Beer定律 A KLC,吸光度,吸收系数,浓度,叶绿素a的最大吸收峰：663nm,叶绿素b的最大吸收峰：645nm,Lambert- Beer定律 A K LC A吸光度 K吸收系数 C浓度,Ka663：82.04 Kb663：9.27 Ka645：16.75 Kb645：45.60,A663=82.04Ca+9.27Cb,A645=16.75Ca+45.60Cb,Ca=12.7A663-2.69A645,Cb=22.9A645-4.68A663,CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg / L),？,2. 计算,1. 提取液1ml，用丙酮稀释至10ml,分光光度计下分别读取A663、A645,Ca=12.7A663-2.69A645,Cb=22.9A645-4.68A663,CT=Ca+Cb=20.2A645+8.0