家兔实验弥散血管内凝血.ppt

家兔实验性弥散性血管内凝血,Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit,目的,应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性DIC。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断DIC的常用方法，联系理论知识加深理深DIC的病因及发病机理。,实验内容,称重、固定（清醒状态）、局部浸润麻醉 手术：颈动脉插管，采集正常血标本 造模：i.v.2兔脑浸液，60mg/kg（慢,2ml/min，注意兔子挣扎) 采集DIC血标本，离心分离血浆备用 测定样本：KPTT,PT,Fg,3P 结果汇总,测定指标和方法,白陶土部分凝血活酶时间（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT）玻片法（挑丝法） 凝血酶原时间(prothrombin time, PT)玻片法（挑丝法） 纤维蛋白原（fibrinogen, Fg）含量，饱和盐水法 血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P）,清洁平皿和试剂37预热,滴加20ul血浆和20ul KPTT试剂,用清洁针头混匀预热3min,滴加20ul 0.025mol/L氯化钙溶液,立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨,一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值3545s）,KPTT测定方法,清洁平皿和试剂37预热,滴加20ul血浆预热1min,滴加40ul PT试剂，立即启动秒表， 同时用清洁针头不断混匀和挑拨,一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值1113s）,PT测定方法,纤维蛋白含量测定方法,37孵浴3min，520nm波长比色，读取OD值,纤维蛋白含量测定方法,各加生理盐水4.5ml 各加饱和盐水4.5ml （调零管） （测定管）,正常血浆各0.5ml DIC血浆各0.5ml,3P试验,轻轻摇匀，37水浴孵浴15min，黑色背景观察沉淀物,结果,注意事项,1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时夹闭动脉造成放血过量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝剂之比例(1:9)并充分混匀（颠倒混匀）。 3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，并向导管内注入生理盐水（因原来插管内可能已有血栓阻塞）。 4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤，要缓慢推注(2ml/min)，密切注意家兔反应，如有明显的呼吸急促和躁动不安，应立即放血。,注意事项,5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出血浆吸入清洁试管备用。 6.测KPTT、PT的平皿必须清洁、干燥、无油脂。KPTT试剂使用前须摇匀。 7.测Fg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要立即进行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊前亦要再次混匀。 8.测3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。,讨论,兔脑浸液引起DIC的原因和机制？ KPTT、PT、Fg和3P各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化? KPTT、PT、Fg和3P的测定原理及发生变化的原因和机制?,DIC动物模型的复制方法,凝血酶 蛇毒 兔脑浸液 内毒素 羊水,实验室诊断DIC的方法,筛选指标： 血小板计数（platelet，PLT） 凝血酶原时间(prothrombin time，PT) 纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg） 纤溶指标：FDP测定、3P试验、优球蛋白溶解时间、D-二聚体，等,实验室诊断标准(以下三项以上异常),PT延长或缩短3s以上，KPTT延长或缩短10s以上； 血浆血小板活化产物含量增加：-TG、PF4、TXB2、P-选择素；