登革热病例的标本采集和实验室检测.ppt

登革热病例的标本采集 和实验室检测,登革热病例的实验室诊断,单份血清特异性IgG抗体或IgM抗体阳性 急性期、恢复期血清的登革IgG抗体滴度4倍增长 RT-PCR或荧光PCR检测到登革病毒基因 从急性期患者血清、脑脊液、血细胞、组织中分离到登革病毒,登革热病例的标本采集,全血标本 采集流程：无菌采集发病后0-5d的患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的采血管中，标明采样日期和病人的姓名，立即送至实验室分离血清 全血不能冷冻；运送过程尽量减少颠簸，避免溶血，最好于24小时内分离到血清。,血清标本 分离流程： 尽量采集病人的急性期和恢复期血清。采集时间：第一份血应在发病3天内采集，最迟不晚于发病后7天。第二份血应在发病24周采集。 无菌采集患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的试管中，标明病人姓名、采集日期，并做好病人性别、年龄、发热日期、出疹日期的资料登记。常温送到实验室分离血清。 2000rpm离心10分钟，分离血清；如果没有离心机，血标本应静置，直到血清析出； 小心吸取血清，避免吸到红细胞；在无菌条件下，移至无菌的螺口离心管中；短期（7天内）保存置于48，长期保存于20 。,脑脊液标本 分离流程： 标本采集应由临床医生完成。由腰椎穿刺无菌采集脑脊液35ml，放于无菌螺口离心管内。标本采集后应立即4送检。,蚊标本 采集、处理流程： 采集吸过血的埃及伊蚊、白纹伊蚊或其它可疑蚊种，用10%葡萄糖液喂养至胃血消化完，-20冷冻。 按蚊种及捕获地点分组，20-50只/组，用生理盐水冲洗后加入1ml标本处理液，充分研磨，10000RPM，4 ，离心10min，取上清液。 -上清液于4 作用2h, 接种C6/36细胞分离病毒。 -上清液分离核酸，进行RT-PCR或荧光PCR检测登革病毒 核酸。,标本的包装运输 生物安全手册 (WHO 3rd edition): 运送感染性材料的基本三层包装：内层容器、第二层包装、外层包装,内层包装：防水、防漏、贴好标签、标本独立包装 第二层包装：防水、防漏（带吸收性材料） 外层包装：为第二层包装提供物理性保护、保持低温（冰袋，4）,登革热病例的实验室检测方法,胶体金快速检测登革热特异性抗体IgM/IgG 标本类型：血清,阳性结果必须经病毒分离、双份血清抗体滴度检测或病毒核酸检测，才能确诊为登革热病毒感染。,ELISA检测登革热特异性抗体IgM/IgG 标本类型：血清、脑脊液,ELISA原理：底物被酶高效催化成为有色产物，即间接放大了抗原抗体之间的免疫反应，检测样品的吸光度值可确定样品中是否存在登革热抗体IgM/IgG。,C6/36细胞培养分离登革病毒 标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液,正常C6/36,病变C6/36（+）,CPE:细胞皱缩脱落、胀大成空泡、折光度增大、内容物增多,RT-PCR检测登革病毒基因 标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液,产物电泳，根据条带大小判断目的核酸存在与否,根据基因型不同，设计通用型、I、II、III、IV型探针，标上不