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文档简介

动物遗传学实验,实验六 琼脂糖凝胶电泳,一、实验原理,琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带,二、实验目的,掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA 的原理和方法,猪基因组DNA及PCR产物 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头， 微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），6X载样缓冲液 ： 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，40%蔗糖水溶液; 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，30%甘油水溶液,三、实验材料、器具及药品,四、实验步骤(1), 1g 琼脂糖加入100ml 1TAE电泳缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。（冷却到60，加入100l的0.5mg/ml EB，并摇匀。） 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖（约50）倒入，室温冷却凝固 充分凝固后撕掉两端的胶布，将凝胶置入电泳槽中，加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm，小心垂直向上拔出梳子。,(4) 用移液器吸取总DNA或质粒样品4l于封口膜上，再加入2l 的6X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 打开电源开关，调节电压至3-5V/cm，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，电泳约30min-60min。 将凝胶放入EB染液中染色5-10min,用清水稍微漂洗。 将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的DNA条带。,四、实验步骤(2),结果与分析,图1 猪基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图,结果与分析,图2 PCR产
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