小球藻在的生长情况毕业论文.doc

河北民族师范学院毕业论文论文题目：浅探不同培养液中固定化小球藻在的生长情况作 者：指导教师：所在系部：专 业：年级班级：完成时间：郑重声明本人的毕业论文是在指导老师李洁的指导下独立撰写完成的。如有剽窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权的行为，本人愿意承担由此产生的各种后果，直至法律责任，并愿意通过网络接受公众的监督。特此郑重声明。毕业论文作者：年 月 日目 录题目4中文摘要41药品的配制42固定化小球藻53固定化小球藻的培养54固定化小球藻在不同营养环境中的生长情况55实验数据与分析5 (1)固定化小球藻在培养过程中PH的变化5(2)不同培养液对固定化小球藻生长的影响6(3)固定化小球藻在各培养液中叶绿素a和叶绿素b含量的变化76固定化小球藻培养液中藻密度的测定8结论8注释参考文献8致谢9浅探固定化小球藻在不同培养液中的生长情况摘 要： 用海藻酸钠固定化小球藻，将经固定化的小球藻分别放在不同培养液中，在阳光充足的地方进行培养，观察培养液的颜色，浑浊度，定期测定培养液的PH值，藻密度，叶绿素含量等。通过对测定数据进行对比分析，确定在实验中的五种培养液中海藻肥培养液最适合固定化小球藻的生长。关键词： 固定化小球藻 不同培养 生长 藻密度前 言小球藻（俗称为绿藻）是五亿四千年前就已经在地球上繁衍的一种单细胞的绿色微藻类，不管是生态环境的巨变还是自然灾害的侵袭，都没能毁灭它，其稳定的基因始终没有改变。生息在淡水中的小球藻被称为“罐装的太阳”，含有丰富的叶绿体，它借助阳光，水和二氧化碳以每隔20小时分裂出四个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能转换成蕴含多种营养物质成分的藻体，并在增值中释放大量的氧，其光合能力高于其它植物十倍以上。小球藻的藻体细胞内含有丰富的蛋白质，维生素，矿物质，食物纤维，核酸及叶绿体等，其产品能全面提供给人类健康及疾病康复期间所需的营养物质及微量元素，具有增强人体免疫力，防止病毒增殖，抑制癌细胞增殖抑制血糖上升，降低血清胆固醇含量，排除毒素，迅速修复机体的损伤等功能，因此，小球藻是一种很好的天然营养健康品，广泛应用于食品，医疗保健，美容等各个领域。小球藻的培养方式主要是自养培养和异养培养。自养培养主要是指利用光能将无机碳转化为有机碳水化合物的过程，光照可以采用太阳光或人工光源，无机碳源主要包括碳酸盐或CO2，其最适培养温度为2535，最适PH 6.57.5，最适光照强度200050001ux,除此之外还需要在培养基中提供氮源，磷源，镁源和铁及微量元素等。其异养培养即小球藻利用糖，有机酸和醇类等60多种有机碳源，由于更多的能量用于呼吸代谢，限制了细胞物质的合成，但可以使小球藻的脂肪的含量明显地增加，有利于其中脂类转化生物柴油。小球藻的固定化培养即将小球藻溶液与海藻酸钠混合在纯净CaCl2溶液的作用下形成固体小球。此包埋制得的小球体有较好的机械性能和防破坏能力,而周围营养源可与其内的藻体进行正常接触，保证藻体正常生长的需要。为了探讨固定化小球藻的生长条件，我们首先培养小球藻，进行固定化，然后将其培养在不同的液体营养环境中，并定期对培养液的PH值，浑浊度，藻密度，吸光度等进行检测，便可将得到固定化小球藻在不同的环境条件下生长情况及一系列生长规律而为固定化小球藻的培养提供基础数据。1 药品的配制(1) 4%的海藻酸钠溶液200ml (2) 5%的CaCl2溶液2000ml(分别装在5个烧杯中，每个烧杯约250ml)(3) 培养液的配制 1号 SE 溶液 （药品加蒸馏水） 2号 土壤浸出液 用水浴加热土壤浸出液大约70三十分钟，二十四小时后重复加热一次，过滤浸出液。 号 硝酸钠60mg/L,尿素1.8mg/L,磷酸二氢钾2mg/L。 号 复合肥溶液 号 海藻肥 将配置好的溶液和实验用具放入高压蒸汽灭菌过内进行灭菌处理。2 固定化小球藻(1)在超净工作台打开的情况下打开紫外灯对工作台灭菌处理约20分钟，并用沾有医用酒精的棉球擦拭双手和工作台面（起灭菌效果）。(2)将经过灭菌处理过的海藻酸钠溶液和CaCl2溶液取出，从锥形瓶中取出15ml海藻酸钠溶液与绿藻溶液置于小烧杯中，用干净的注射器抽取混合溶液再放出，重复几次此动作使液体尽量充分地混合均匀，再将带有针头的注射器吸取大约5毫升的混合液，慢慢的一滴滴的滴向CaCl2溶液中，可看到有固体透明球体生成，重复此过程直到将混合液用尽。(3)分别在五个烧杯中重复步骤（2）得到五组固定化小球藻 静置大约2小时后分别向烧杯中加入无菌蒸馏水使其分别稀释一倍，最后将大烧杯放入冰箱内静止过夜。3 固定化小球藻的培养将经过冰箱静置的五组小球藻分别取出放入各个装有灭菌过的培养液的锥形瓶内，盖上牛皮纸放在阳光充足的阳台上使其自然生长 并定期对其生长情况进行观察，对球体成分和培养液检测。4 固定化小球藻在不同营养环境中的生长情况(1)培养液的PH值检测 定期用玻璃棒蘸取培养液，滴在PH试纸上检测其PH值。(2)固定化小球藻的叶绿素含量 分别从五组实验中取固体小球0.2克，吸干水分放置试管内用平头玻璃棒将其捣碎，再分别向试管中加入95%的乙醇约5ml并用封口膜将试管封严，浸泡大约两小时，取其上清液在分光光度计下测定其吸光度值（分别测定其在波长为649nm和665nm处的吸光度值A649,A665）,以此来计算叶绿素a，叶绿素b和总的叶绿素含量（mg/L）其中C叶绿素a =13.95A665-6.88A649 C叶绿素b=24.96A649-7.32A665 总叶绿素浓度（mg/L）=C叶绿素a+ C叶绿素b。(3)培养液中的藻密度的测定 取一定量的培养液，测其在650nm处的光吸收值，即为其藻密度，表示培养液中的藻体数量的多少。5 实验数据与分析 （根据下列四副图中数据得出试验结果） (1)固定化小球藻在培养过程中PH的变化 根据试验测定结果（图1）可以得出：2，4号培养组中的培养液在不同培养时期其PH值的变化幅度较小（约0.10.2），1，3号培养组中的培养液在培养过程中其PH变化幅度较大约（0.5-0.6），5组中培养液的PH值保持不变而1，2，3，4组总体来看，在培养的中后期其PH值呈减小趋势。由此分析可以得出5组的培养其化学稳定性比前四种较好。图1各培养组在不同培养时长培养液的PH值 (2)不同培养液对固定化小球藻生长的影响观察实验组中在培养过程中不同培养时期的总叶绿素含量的变化可得：在培养的初期第1，2，3，组中的单位质量的小球藻中的总叶绿素含量呈下降趋势，而第1，5组中的叶绿素的含量呈现缓慢增加的趋势。由此特点可以分析得到在固定化培养的初期，由于小球藻刚转入新的培养环境中，需要对新环境有一定时间的适应，因此体内的叶绿素的合成较缓慢。再比较中后期的测定结果可得1，2，3，5组中的叶绿体含量呈增高趋势而4组中的数值则呈减小趋势，即在4组中其营养液开始影响小球藻的叶绿素的合成而不适合其生长。最后纵观全图分析，在整个的培养过程中5组的总叶绿体含量自始至终呈不断地增加的趋势，且总含量增加迅速，明显，因此可分析的5组的培养其内的藻体能较快的适应周围的新营养环境，且能较快的合成叶绿素，较适合藻体的生长。图2 各培养组不同时长单位质量小球体中总叶绿素的含量（mg/L）(3)固定化小球藻在各培养液中叶绿素a和叶绿素b含量的变化测定固定化小球藻在各培养液中叶绿素a和叶绿素b含量，结果见图3，发现：在培养到中期的时候1，2，3组试验中的单位质量的固定化小球其叶绿素a的含量小于叶绿素b的含量 ，4，5两组试验中叶绿素b的含量小于叶绿素a的含量，则在此时小球藻体内的叶绿素a的合成较叶绿素b的合成少，4，5组中叶绿素b的含量小于叶绿素a的含量，在5组中其相差量较大，即此时期内的叶绿素b的合成速率远大于叶绿素a 的合成速率：纵观全图可发现1，4，5中叶绿素a和叶绿素b 含量较大，其各个含量差别较明显，2，3组中的含量小，差别较小。图3 当培养时间在30天时各个培养组中的单位质量的小球藻内含的叶绿素a和叶绿素b的含量时间（天）组172930431号0.12650.035160.035730.183442号0.070320.042420.021210.042233号0.091530.070130.056370.155164号0.154590.25950.224340.161665号0.413710.897551.192211.61622表1各培养组不同时长单位质量小球体中叶绿素a的含量（mg/L）时间（天）组172930431号0.147120.04560.17340.373442号0.09120.105840.052920.063243号0.144120.04860.098520.302884号0.175080.184080.138480.192725号0.273960.596520.82621.842表2 各培养组不同时长单位质量小球体中叶绿素b的含量（mg/L）6、 固定化小球藻培养液中藻密度的测定取培养43天的固定化小球藻培养液，在650nm测定光吸收，结果见表5，培养液中的藻密度，第1，3，4号培养液的藻密度较大，第5号培养液中的藻密度较小，2号则最小。即在第1，3，4组中有大量的藻体从固体小球中逸出，稳定性较差，而5号培养液最为稳定。 图4 各培养组在培养43天后培养液中的藻密度结 论通过对以上实验数据的统计与分析可以发现在2组培养中培养的固定化小球藻的生长速度较慢，不适合其生长；1组培养的固定化小球藻其PH变化幅度较大，化学稳定性较低，而1，4组中会出现藻体的外逸而影响其稳定培养 ；3组中虽其球内藻体能稳定包裹，但随着培养时间的增加其叶绿素的合成速率大大减慢。5组中的小球藻能较快适应此营养环境，大量，迅速合成叶绿素，且球体内的藻体稳定性较好，被稳定包裹，PH值较稳定。因此综合以上几组图像分析结果可以确定在此5种培养液中海藻肥溶液（即5号）是最适合于固定化小球藻的生长培养的。参考文献刘建文.养生保健的全营养素：小球藻.中国社会科学出版社.2008.1 【1】小球藻.彩羽漫天/view/480332.htm 2010 .11 .12 【2】 致谢在此论文撰写过程中，要特别感谢我的导师李洁老师的指导与督促，同时感谢她的谅解与包容。没有李洁老师的帮助也就