多聚甲醛配制

4多聚甲醛配制4多聚甲醛配制方法1) 900 ml dd H20 + 500 ul 1N NaOH2) Heat to 65-703) While stirring, add 40 g paraformaldehyde4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved5) Let cool to room temperature6) Add 100 ml of 10X PBS7) pH to 7.3 with HCl8) Sterile with filter9) Store at 4, protected from light称量2g，放置与50ml pbs中，37度孵箱2天后，4%的多聚甲醛就配好了。配制0.1M的PBS，PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛，放入65水浴，一般半天左右就可以溶好因为需要现用现配所以我一般就配10毫升。用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛，加8毫升PBS，加1毫升2N的NAOH，放到60度的水浴里，10分钟，拿出来用手颠倒几次，基本上就都溶了，再用HCL调ph到7.2，最后定容就行了，我最快10分钟搞定。取4g 多聚甲醛溶到100 PBS缓冲液，加2滴1N的NaOH（pH7.4）,60度水浴磁力搅拌，大约1-2小时可以溶解。4%多聚甲醛的配制:在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制.常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂类物质使细胞脱水,把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离子去污剂(triton-x 100)透化标本.4多聚甲醛（PFA）配制称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至6065,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L 的NaOH调PH至7.0使呈清亮状（滴加），再加入约500ml 2PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中）。可再检测一下PH，过滤后定容至1000ml，室温或4（保存备用）。注意：1.配制时应在通风条件下操作，并避免接触皮肤及吸入（戴口罩及手套），因PFA有较强的毒性，对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时，温度不可过高，常为6065。否则PFA降解失效，配制好的PFA虽可有效一点时间，但过久的液体，固定效果下降，应用前新鲜配制。4%多聚甲醛固定液配制多聚甲醛(PFA) 40g ,双蒸水500ml在60-65度加热成乳白色悬液（用1.0mol/LNaOH调制7.0或7.2-7.4 ）用0.1molPBS定容至1000ml。除了用DEPC水配制PFA外，也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC处理的0.010.1/L的PBS配制，方法及主要事项同上。制备的单细胞悬液用70%乙醇固定，4过夜。次日生理盐水洗脱液洗涤去除固定液。加PI染液混匀，至4避光30min，上机测试。正常对照细胞呈红色荧光，凋亡细胞呈蓝色荧光，在流式细胞仪DNA直方图上，由于凋亡细胞的出现，二倍