江苏省启东市高中生物专题5血红蛋白的提取和分离第2课时电泳基础知识练习.doc

基础知识：电泳1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是（）A蛋白质分子所带的电荷B蛋白质分子的形状C蛋白质分子的相对分子质量D缓冲溶液的pH2 材料：饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排出后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一。(1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生_，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间内_表示。(2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程(如下图)。发酵液含酶的发酵液纯酶 菌体去除透析液()去除中的主要成分为_；中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。(3)为制备基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：_。反应过程中打开模板DNA双链的方法是_。(4)除植酸酶外，微生物还应用在_的生产中。3 下列关于电泳技术分离蛋白质原理的叙述，正确的是（）A蛋白质中含有游离的氨基，是碱性电解质B蛋白质中含有游离的羧基，是酸性电解质C蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动D蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动4 有关电泳的叙述，不正确的是（）A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B带电分子会向着与其电荷相同的电极移动C在一定的pH下，可解离的基团会带上正电或负电D电泳能够实现样品中各种分子的分离5 电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷_方向的电极移动（）A相同 B相反 C相对 D相向6 下列各项中，除哪项外均为电泳使样品中各分子分离的原因（）A分子带电性质的差异 B分子的大小C分子的形状 D分子的变性温度7 科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。（1）分离该抗菌蛋白可用电泳法其原理是根据蛋日质分子的 、大小及形状不同，在电场中的 不同而实现分离。（2）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。（3）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量的菌液培养基中菌落的 ，确定该蛋白的抗菌效果。（4）细菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是()A蛋白质分子所带的电荷 B.蛋白质分子的形状C蛋白质分子的相对分子质量 D.缓冲溶液的pH9 下列关于电泳的说法不正确的是（ ）A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小10 电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷_方向的电极移动()A相同 B相反 C相对 D相向参考答案：1 答案： C解析： 在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成单条肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异，从而达到仅根据蛋白质相对分子质量的不同来分离蛋白质的目的。2 答案： (1)透明圈植酸钠的消耗量(醇和磷酸的生成量)(2)小分子杂质凝胶色谱法：根据不同蛋白质之间分子大小、吸附性质等差别进行纯化。(或电泳法：根据蛋白质之间电荷、分子大小等差异进行纯化。)(3)变性、复性和延伸加热(4)蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶解析： (1)选择目的菌株，可采用选择培养基来操作。通过在培养基中添加特定成分，使其他微生物死亡或不能呈现特定现象来筛选。含有植酸酶基因的菌株可产生植酸酶分解培养基中的植酸钙，产生透明圈。(2)题干中的生产流程为酶纯化的过程。含酶的发酵液通过透析，即以半透膜过滤发酵液，使一些小分子物质被过滤掉，再通过电泳法或凝胶色谱法分离纯化混合的酶液，获取纯的植酸酶。3 答案： D解析： 蛋白质中既含有游离的氨基，又含有游离的羧基，属于两性电解质；蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。4 答案： B解析： 在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。5 答案： B解析： 在一定pH作用下，生物大分子中有某些可解离的基团，这些基团会带上正电荷或负电荷，在电场作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。6 答案： D解析： 电泳是指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程，样品分子的带电性质不同、分子的大小和形状不同都会影响带电粒子在电场中的迁移速度，与分子的变性温度无关，故选D项。7 答案： （1）电荷（带电情况）迁移速度 （2）碳源氮源 （3）数量（4）平板划线法稀释涂布平板法（稀释混合平板法）灭菌解析： 考查蛋白质的分离技术、微生物的培养技术（1）电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，许多重要的生物大分子，如多肽、核酸、蛋白质等都具有可解离的基团。在一定的PH条件下，这些基团会带上正电或负电，在电场的作用下根据待分离的样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同。其迁移速度不同，从而把它们分离。（2）培养基中凡是含有C、H、O、N等元素有机物都能为细菌生长提供碳源和氮源。故牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供碳源、氮源（3）抗菌蛋白具有抗菌能力，培养基中加入抗菌蛋白后接种等量菌液。培养一定时间后，培养基中菌落数多的，该抗菌蛋白的抗菌能力强。（4）抗菌培养时，常用的接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。实验结束后，对使用过的培养基必必须进行灭菌处理，防止菌种进入自然环境。8 答案： C解析： 在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,蛋白质分子被解聚成单条肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质-SDS复合物,SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量