DB13T1112-2009食品中四种甜味剂的测定方法高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 100 D B 1 3 省地方标准 卜 J 月 八匕川州州 ，土 X 、户于 DB13/T 1112-2009 食 品 中 四 种 甜 味 剂 的 测 定 方 法 高效液相色谱法 Deternnination of four sweetener additives in food壬TPLC method 2009-05-27发布2009-06-11实施 河北省质量技术监督局 发布 食品伙伴网/ DB13/T 1112-2009 月 I j 舀 本 标 准 中 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录 。 本 标 准 河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 提 出 并 归 口 。 本 标 准 起 草 单 位 ： 国 家 环 保 产 品 质 量 监 督 检 验 中 心 、 河 北 省 食 品 安 全 重 点 实 验 室 、 河 北 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 、 河 北 医 科 大 学 基 础 医 学 院 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 李 挥 、 张 岩 、 庞 坤 、 周 正 、 康 素 芬 、 王 丽 霞 、 吕 品 、 刘 敬 泽 、 杨 小 龙 、 张 敬 轩 、 范 斌 、 刘 东 。 食品伙伴网/ DB13/T 1112-2009 食 品 中 四 种 甜 味 剂 的 测 定 方 法 高 效 液 相 色 谱 法 范围 本 标 准 规 定 了 食 品 中 乙 酞 磺 胺 酸 钾 ， 糖 精 钠 ， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 ， 阿 斯 巴 甜 的 测 定 方 法 。 本 标 准 适 用 于 饮 料 中 乙 酞 磺 胺 酸 钾 ， 糖 精 钠 ， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 ， 阿 斯 巴 甜 的 测 定 。 本 方 法 乙 酞 磺 胺 酸 钾 的 检 出 限 为 0. 05 gg/m L； 糖 精 钠 的 检 出 限 为 0. 05 g/m L； 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 的 检 出 限 为 2.0 jig/m L ； 阿 斯 巴 甜 的 检 出 限 为 0.05 g/m L ; 2规范性引用文件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 。 GB/T 6682分析实验用水规格和试验方法 3 原 理 样 品 中 甜 味 剂 在 酸 性 溶 液 中 以 阴 离 子 形 式 ， 选 用 含 有 类 离 子 对 试 剂 （ tris)的 甲 醇 水 溶 液 作 流 动 相 ， 采 用 反 相 离 子 对 高 效 液 相 色 谱 法 分 离 ， 根 据 色 谱 峰 的 保 留 时 间 定 性 ， 根 据 峰 高 或 峰 面 积 定 量 。 4试剂 除 另 有 规 定 ， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 ， 为 G B/T 6682规 定 的 一 级 水 。 4. 1甲 醇 ： 色 谱 纯 。 4.2稀 氨 水 （ (1+1):氨 水 加 水 等 体 积 混 合 。 4. 3 Tris储 备 液 （ (0. 5 mol几 ） ： 称 取 6. 057 g三 （ 羟 甲 基 ） 氨 基 甲 烷 溶 于 超 纯 水 中 定 容 到 100 mL,混 合 均 匀 。 4.4乙 酞 磺 胺 酸 钾 ， 糖 精 钠 ， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 ， 阿 斯 巴 甜 标 准 品 ： 纯 度 ） 99% 0 4. 5乙 酞 磺 胺 酸 钾 ， 糖 精 钠 ， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 ， 阿 斯 巴 甜 标 准 储 备 溶 液 ： 精 密 秤 取 乙 酞 磺 胺 酸 钾 、 糖 精 钠 各 0 . 1 0 0 0 g ， 用 超 纯 水 溶 解 稀 释 至 1 0 m L ； 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 1 . 0 0 0 0 g ， 用 超 纯 水 溶 解 稀 释 至 1 0 m L ； 阿 斯 巴 甜 0. 10 0 0 g用 1 : 1 甲 醇 水 溶 液 溶 解 稀 释 至 1 0 m L ； 阿 斯 巴 甜 、 乙 酞 磺 胺 酸 钾 、 糖 精 钠 浓 度 分 别 为 ： 10.0 m g/mL； 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 浓 度 为 ： 100.0 m g/mL： 于 冰 箱 保 存 。 4.6混 合 标 准 使 用 溶 液 ： 取 一 定 量 上 述 标 准 储 备 液 混 合 ， 用 超 纯 水 逐 级 稀 释 ， 配 成 乙 酞 磺 胺 酸 钾 ， 糖 精 钠 ， 阿 斯 巴 甜 为 1.0 mg/mL的 混 合 标 准 使 用 液 ， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 浓 度 为 10. Omg/mL的 标 准 使 用 液 。 4. 7混合 标 准 使用 系 列 溶 液 ： 准 确 吸 取混 合标 准 使 用 液 0. 00 m L, 0. 05 m L, 0. 10 m L, 0. 20 m L, 0. 40 m L, 0. 60 m L，环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 标 准使 用液 0. 00 m L, 0. 10 m L, 0. 50 m L, 1. 0 m L, 2. 0 m L, 4. 0 m L 加 超 纯 水 定 容 至 1 0 m L ， 配 成 标 准 系 列 。 其 中 ， 乙 酞 磺 胺 酸 钾 、 阿 斯 巴 甜 、 糖 精 钠 其 浓 度 为 0 . 0 g g /m L , 5. 0 g/mL, 10. 0 g/mL, 20. 0卩 g/mL, 40.0卩 g/mL, 60. 0 gg/mL， 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 浓 度 0. 0 mg八 nL, 0. 1 mg/mL, 0. 5 mg/mL, 1. 0 mg加 L, 2.0 mg/mL, 4. 0 mg/mL， 置 于 冰 箱 冷 藏 保 存 。 5 仪器 5. 1高 效 液 相 色 谱 仪 ， 带 紫 外 检 测 器 。 5.2超 声 波 清 洗 器 。 5. 3离 心 机 。 食品伙伴网/ DB13/T 1112-2009 5.4抽 滤 瓶 。 5. 5微 孔 滤 膜 ： 0. 45 nm o 5.6电子天平：感量0.0001 g和0. 01 go 分 析 步 骤 6. 1样 品 处 理 ： 称取5. 0 g-10. 0 g（精确到0.01 g)试样，用氨水（1+1)调pH至7，加水定容至适当体积，离 心 沉 淀 ， 上 清 液 经 4 5 m 滤 膜 过 滤 ， 滤 液 作 H P L C 分 析 用 。 6. 2测定 6.2.1 HPLC参考条件 分 析 柱 ： C,8 , 4. 6 m m x250 m m 粒 度 5m 流 动 相 ： 甲 醇 ： 5 mmol/L Tris缓 冲 溶 液 （ pH 4.5） 二 5: 95 波长：205 nm o 流速：1. 2 mL/mina 柱温：25 C0 6 . 2 . 2 标 准 曲 线 ： 分 别 进 样 阿 斯 巴 甜 、 乙 酞 磺 胺 酸 钾 、 糖 精 钠 和 环 己 基 氨 基 磺 酸 钠 标 准 系 列 溶 液 各 10阝 L， 进 行 HPLC分 析 ， 然 后 以 峰 面 积 为 纵 坐 标 ， 以 四 种 甜 味 剂 的 含 量 为 横 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 。 6. 2. 3试 样 测 定 ： 吸 取 6. 1处 理 后 的 试 样 溶 液 10L 进 行 H PL C 分 析 ， 测 定 其 峰 面 积 ， 从 标 准 曲 线 查 得 测 定 液 中 四 种 甜 味 剂 的 含 量 结 果 计 算 试 样 中 甜 味 剂 成 分 的 含 量 按 下 式 计 算 ： X二 三 xVxl000 ( 1) m x 1000 式 中 ： X 一 试 样 中 甜 味 剂 成 分 的 含 量 ， 单 位 为 毫 克 每 千 克 （ m g/kg); 卜 由 标 准 曲 线 上 查 得 进 样 液 中 甜 味 剂 成 分 的 量 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 (g g /m L ); V 一 试 样 稀 释 液 总 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ m L ) ; m 一 试 样 质 量 ， 单 位 为 克 （ g) 计 算 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字 。 精 密 度 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 1 0 % . 食品伙伴网/ DB13/T 1112-2009 附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 四 种 甜 味 剂 标 准 物 质 色 谱 图 一 一 八儿 娜润肠角鹅锡劝器切 一笼 娜翻撒 公绍他 1 乙 酞 磺 胺