微生物实验三学校公共环境微生物的分离与纯化.ppt

实验三 学校公共环境微生物的分离与纯化,林标声,实验三 学校公共环境微生物的分离与纯化,一、实验目的 通过本实验的学习，使学生掌握微生物的分离与纯化的原理与方法，熟练掌握微生物的染色方法以及微生物的计数等基本技能，为今后微生物的遗传、生理以及分子生物学等学习打下基础。,二、实验原理-空气中微生物的发布,空气中微生物的主要来源于土壤、水体表面、动植物、人体及生产活动、污水污物处理等，其组成浓度不稳定，种类多样，有细菌、真菌、病毒、噬菌体等。空气微生物是大气污染物之一。空气微生物往往吸附在悬浮颗粒物上，随风飘荡，可导致人类和动植物某些疾病的发生与传播，且常与环境的其他污染物协同作用，致使环境恶化，空气质量降低。空气微生物的浓度是评价空气质量的重要指标之一。,实验原理-空气中微生物的发布,校园是学生集中生活学习的区域，采用微生物学方法，检测校园空气微生物的时空分布，可进一步了解校园空气污染现状，对于防止呼吸道疾病的传播，保护学生身体健康具有重要的现实意义。 土壤、水样、食品等,三、实验器材,（一）主要仪器 高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、电子分析天平、干燥箱、显微镜、超净工作台 （二）主要试剂 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、可溶性淀粉、KNO3、KH2P04、K2HP04.3H20、MgS04.7H20、FeS04. 7H20、K2HP04、蔗糖、葡萄糖、链霉素、孟加拉红溶液、碱性美兰染液、革兰氏染色液、香柏油、二甲苯等,四、实验方法和步骤,1. 培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基） 2. 选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体育馆、操场等） 3. 不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各1次），每次采样时间分5分钟、10分钟、30分钟（平皿暴露时间）采样。 4. 采样的平皿进行培养 5. 菌落计数 6. 菌落鉴别 7. 作出校园空气微生物分布图（数量、种类）,实验设计方案,（1）空气 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂表面暴露在空气中，5min后盖上皿盖 （2）超净工作台 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板放在超净工作台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在超净工作台内的空气中，15min后盖上皿盖,采样空气中细菌总数计算公式,空气的细菌数= W* 1000/ (Q * T) 式中：W-平皿细菌数，Q-流量:L/min，T-采样时间：min,实验设计方案,（3）手指（洗手前与洗手后） A 分别在两个琼脂平板上标明洗手前、后，并用记号笔在皿底划分三个区域 B 移去皿盖，同组的三个人将未洗过的手指分别在三个区域的琼脂平板表面轻轻的来回画线。 C 用肥皂和刷子用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖 （4）头发 在揭开皿盖的琼脂平板上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落倒琼脂平板表面，然后盖上皿盖。,实验设计方案,（3）土壤样品 采集不同的土壤样品，称1g溶解于100mL的无菌生理盐水中（0.85%NaCl），梯度稀释，取0.2mL稀释液涂布于含牛肉膏蛋白胨培养基平板中，37培养24h，计数。 （4）其他样品 如鱼丸、方便面调味料等，各取1g，捣碎后，溶于100mL的无菌生理盐水，剩余操作同上 （5）水样品微生物检测：取100mL水检测，其余步骤同上,0.9,0.1,0.9ml,分离纯化基本流程,每克含菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU （同一稀释度平板上菌落平均数 5稀释倍数）/含菌样品克数,倾注平板,倒置培养,培养的时候培养基会有水分蒸发上去的嘛，当水蒸气累积到一定的程度会聚成水滴，倒流到培养中的细菌中，冲散菌体，不利于培养观察。 倒置培养可以防止水蒸气蒸发,分离纯化,纯化（平板划线法） 倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养）,移接斜面 常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种,平板划线分离的方法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法,四、实验结果,1. 空气中微生物数量、性质（革兰氏染 色）、分离保存 2. 头发、手指等一些物品表面的微生物数量、性质（革兰氏染 色） ，分离保存 3. 每g样品中（土壤、水样、食品）中的微生物数量、性质（革兰氏染 色） 、分离保存。,思考题,1. 影响校园环境空气中微生物分布的因素 有哪些？ 2、如何进一步改进本实验？,实