GB 4789.14-1994 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 .pdfVIP

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验G B 4 7 8 9 . 1 4 一9 4 蜡 样 芽 胞 杆 菌 检 验 代替 G B 4 7 8 9 . 1 4 - - 8 4 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f f o o d h y g i e n e Ex a mi n a t i o n o f B a c i l l u s c e r e u s 1 主题内容与适用范围 本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。 本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。 2 引用标准 G B 4 7 8 9 . 2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 G B 4 7 8 9 . 2 8 食品卫生微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 温箱: 3 6 士1 0C, 3 . 2 普通冰箱。 3 . 3 显微镜。 3 . 4 恒温水浴4 6 士1 0C 。 3 . 5 天平。 3 . 6 电炉。 3 . 7 吸管: 1 m L , 1 0 m L a 3 . 8 载玻片。 3 . 9 均质器或乳钵。 3 . 1 0 L型涂布棒。 3 . 1 1 灭菌刀， 剪， 镊子。 3 . 1 2 三角瓶: 容量5 0 0 m L , 4 . 1 培养墓和试荆 肉 浸液肉汤培养基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 1 . : .; 酪蛋白 琼脂培 养基; G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 5 . 动力 一 硝酸盐 培养 基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 7 2 , 缓冲 葡萄糖蛋白 陈水: G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 4 . 血琼脂培养基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 . 3 %过氧化氢溶液。 甲蔡胺一 乙酸溶液。 月叹dl卜U7夕 . 月乌Jq月叼.q 中华人民共和国卫生郎1 9 9 4 一 0 3 一 1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施 G B 4 7 8 9 . 1 4 一 9 4 4 . 8 对氨基笨磺酸一 乙酸溶液。 4 . 9 革兰氏染色液: G B 4 7 8 9 . 2 8 中2 . 2 0 4 . 1 0 甘露醇卵黄多粘菌素( MY P ) 琼脂培养基: G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 4 . 4 . 1 1 o . 5 3 0 碱性复红染色液: G B 4 7 8 9 . 2 8 中2 . 8 , 4 . 1 2 木糖一 明胶培养基; G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 6 . 5 检验程序 蜡样芽胞杆菌检验程序如下: 6 操作步骏 6 . 1 菌数测定 以无菌操作将检样2 5 g ( m L ) ( 按G B 4 7 8 9 . 2 测定) ， 用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成1 0 - 1 - 1 0 - 5 的稀释液。 取各稀释液0 . 1 m L ， 接种在两个选择性培养基 甘露醇卵黄多粘菌素( MY P ) 琼脂培 养基上， 用I形棒涂布于整个表面， 置3 6 士1 0C 温箱培养1 2 2 0 h 后选取适当菌落数的平板进行计数， 蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色( 表示不发酵甘露醇) ， 周围有粉红色的晕( 表示产生卵磷脂 酶) 。计算后， 从中挑取5 个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上 的菌落数， 然后乘其稀释倍数， 即得每克( 或毫升) 样品中所含蜡样芽胞杆菌数， 例如M Y P平板的可疑 菌落为2 5 个， 取 5 个鉴定， 证实为4 个， 乘上稀释倍数( 如1 0 “ ) ， 再乘上1 g ( 或m L ) 检样数( 取的是 。 . 1 mL 样) 则为: 2 5 X4 / 5 X1 0 4 X1 0 三2X 1 0 6 6 . 2 分离培养 取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基( M Y P ) 上， 置3 7 培养1 2 2 0 h ， 挑取可疑的蜡样 芽 胞杆菌菌落( 见6 . 1 ) 接种于肉 汤和营养琼脂做成纯培养， 然后做证实试验。 6 . 3 证实试验 G B 4 7 8 9 . 1 4 一 P 6 . 3 . 1 形态观察 本菌为革兰氏阳性大杆菌， 宽度在1 1 e m或1 ( a m以上， 芽胞呈卵圆形， 不突出菌体， 多位于菌体中 央或稍偏于一端。 6 . 3 . 2 培养特性 本菌在肉 汤中生长混浊， 常微有菌膜或壁环， 振播易乳化; 在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、 表 面粗糙、 似毛玻璃状或融蜡状， 边缘不齐。 6 . 3 . 3 生化性状及生化分型 6 . 3 . 3 . 1 生化性状 本菌有动力; 能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶， 过氧化氢酶试验阳性， 溶血; 不发酵甘露醇和木糖; 常能 液化明胶和使硝酸盐还原; 在厌氧条件下能发酵葡萄糖。 6 . 3 - 3 . 2 生化分型 蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、 硝酸盐还原、 淀粉水解、 V - P反应、 明胶液化性状的试验， 将 该菌分成不同的型别， 见表 1 , 表 1 蜡样芽胞杆菌生化分型 型别 生化试验 柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解V- P反应明胶液化 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 6 . 3 . 4 与类似菌鉴别 本菌与其他类似菌的鉴别见表2 , 表 2 蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别 项目巨 大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌 _ _一 草状芽胞杆苗炭疽芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌 过氧化氢醉 动力 硝酸盐还原 + 士 + 士 + + 士 十 + + + 斗 G B 4 7 8 9 . 1 4 一 9 4 续表 艺 项目 巨大芽胞杆菌蜡样芽胞 杆菌 苏云 金芽 胞杆菌革状芽胞杆菌 炭疽芽胞杆菌 干十 士+ 士十+ +十 酪蛋白分解 卵黄反应 葡萄精利用( 厌氧) 甘露醉 木糖 溶血 + 十 已知致病菌恃性产生肠毒素 对昆虫致病 的内毒素结晶 假根样生长f 对动物和人致病 注 +s 0 %-1 0 0 %的菌株阳 性; -s 0 写 - 1 0 0 %的菌株阴 性， 士 大多数菌株阳性; 平 大多数菌株阴 性 本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似， 但后者可籍细胞内产生蛋白 质毒素结晶加以鉴别。 其检查方法如下: 取营养琼脂上纯培养物少许， 加少量蒸馏水涂于玻片上， 待自 然干燥后用弱火焰固定， 加甲醇于玻片上， 半分钟后倾去甲醇， 置火焰上干燥， 然后滴加。5 %碱性复红液， 并用酒精灯加热至微 见蒸气维持1 . 5 m i n ， 移去酒精灯， 将玻片放置半分钟， 倾去染液， 置洁净自 来水充分漂洗， 晾干， 镜检， 在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶