GB9695.23-1990肉与肉制品L(-)-羟脯氨酸含量测定.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 肉L ( 一 )与肉制品GB 9 69 5 - 23一9 0经 脯氨 酸 含量 测 定Me a t a n d me a t p r o d u c t s - Me t h o d o f L ( 一 - h y d r o x y p r o l i nf o r d e t e r mi n a t i o n 本标准等效采用国际标准I S O 3 4 9 6 -1 9 7 8 肉和肉制品中L ( 一) 一 羚脯氨酸含量的测定 。1 主题内容与适用范围 本标准规定了 肉与肉制品中L ( 一) 径脯氨酸含量的测定方法 本标准适用于肉与肉制品中以一) 一 轻脯氨酸含量的测定2 引用标准 G B 9 6 9 5 . 1 9 肉与肉制品 取样方法3 原理 试样在氯化亚锡的盐酸溶液中水解， 释放出经脯氨酸。经氯胺T氧化， 生成含有毗咯环的氧化物用高氯酸破坏过量的氯胺T . 轻脯氨酸氧化物与对二甲 氮基苯甲醛反应生成红色化合物， 在波长5 5 8 n m处进行比色测定4 试剂 所用试剂均为分析纯， 水为蒸馏水或同等纯度的水。4 . 1 氯化亚锡( G B 6 3 8 ) : 0 . 7 5 %溶液。 将淑化亚锡7 . 5 g 溶于5 0 0 m l , 水中， 再加入5 0 0 m l , 浓盐酸( G B 6 2 2 )4 . 2 盐酸( G B 6 2 2 ) : 6 m o l / L 溶液4 . 3 氢氧化钠( G B 6 2 9 ) : 1 m o l / L , 1 0 m o l / L 溶液。4 . 4 缓冲液: 将5 0 g 柠檬酸, 2 6 . 3 8 氢氧化钠和 1 4 6 . 1 g 结晶乙酸钠( G B 6 9 4 ) 溶于水， 稀至1 1 ， 此溶液与2 0 0 m l , 水和3 0 0 m L 正丙醇混合。4 . 5 氯胺T ( H G 3 -9 7 2 ) 溶液: 将 1 . 4 1 g 氯胺T ， 溶于1 0 m l , 水中， 依次加入 1 0 m L 正丙醇和8 0 m l , 缓冲溶液( 用时现配) 。4 . 6 显色剂: 称取 1 0 g 对二甲 氨基苯甲醛， 用3 5 m L 高氯酸( G B 6 2 3 ) 溶解， 缓慢加入6 5 m L 异丙醇。4 . 7 L ( 一) - 轻脯氨酸( C , H , N O , ) 标准溶液。4 . 7 . 1 标准储备液5 0 0 w g / m L : 称取5 0 . 0 m g L ( 一) - 轻脯氨酸用少量水溶解， 加一滴 6 m o l / L 盐酸， 定容至 1 0 0 m L 容量瓶中4 . 7 . 2 标准工 作液5 u g / m L : 吸取标准储备液 5 . 0 0 m L于5 0 0 m L容量瓶中， 定容。国家技术监督局1 9 9 0 一 1 1 一 1 5 批准1 9 9 1 一 1 0 - 0 1 实施GB 9 6 95 . 23 一 9 05 仪器和设备5 . 1 实验室常规设备。5 . 2 绞肉机: 孔径不超过 4 m m,5 . 3 配有冷凝管的三角瓶: 2 5 0 m L ,5 . 4 恒温水浴。5 . 5 试管加热器或水浴. 可控温于 6 0。5 . 6 分光光度计6 试样6 . 1 按 G B 9 6 9 5 . 1 9 取样 . 2 试样准备6 . 2 . 1 生肉与生肉制品: 用快刀把完整的肉切成约0 . 5 c m , 的小丁， 装人密封样品盒中， 或者用耐热塑料袋真空包装， 在7 0 C 以上保温3 0 m i n ， 以下按6 . 2 2 步骤进行。6 . 2 . 2 熟肉 制品: 取有代表性的试样2 0 0 g ， 于绞肉 机中纹两次， 使其混匀， 贮于容器中备用。6 . 3 制备 好的试样要尽快分析， 若不立即分析要密封冷藏保存， 防止变质和成分变化。 贮存的试样在启用时必须重新匀质。7 分析步骤了 . 1 试样前处理 称取试样5 g ( 精确至0 . 0 0 1 g ) 放入2 5 0 m L 磨口 三角瓶中， 注意不要使样品 粘在壁上。 加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液 1 0 0 m L ， 置于水浴上加热回流 1 6 h , 趁热将水解溶液过滤于2 0 0 m L 容量瓶中， 用6 m o l / L 热盐酸1 0 m L 反复三次冲洗三角瓶和滤纸，冷却. 用水定容到刻度. 混匀。吸取5 -2 5 m L ( V , ) 水解液于1 0 0 m L 烧杯中， 用1 0 m o l / L , 1 m o l / L 氢氧化钠溶液调节p H为8 士0 . 2 ， 过滤于2 5 0 m L 容量瓶中， 用3 0 m L 水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀， 反复三次， 把洗液并入滤液中， 以水洗至刻度， 摇匀备用。7 . 2 测定7 . 2 . 1 标准曲线的绘制 吸取L ( 一) 一 轻脯氨酸标准工作液0 . 0 0 , 1 0 . 0 0 , 2 0 . 0 0 , 3 0 . 0 0 , 4 0 . 0 0 m L ， 分别置于1 0 0 m L 容量瓶中， 定容摇匀。浓度分别为0 . 0 , 0 . 5 , 1 . 0 , 1 . 5 , 2 . 0 p g / m L 。取不同浓度的上述溶液 4 . 0 0 m L ， 分别加入2 0 m L 具塞试管中， 加抓胺T溶液2 m L ， 摇匀后于室温放置2 0 m in 。 加入显色剂2 m L ， 摇匀， 塞上塞子于6 0 C 试管加热器( 或恒温水浴) 中保温2 0 m i n 后取出， 迅速冷却， 在波长5 5 8 士2 n m处测定吸光值， 绘制标准曲线。了 . 2 . 2 试样测定 从2 5 0 m L 容量瓶中吸取已制备好的样液( 7 . 1 ) 4 . 0 0 m L 于2 0 m l , 具塞试管中， 以下按7 . 2 . 1 步骤进行， 同时作空自试验。8 分析结果的计算计1 ) 公式:式中: x C一 一样品中以一) 一 经脯氨酸的含量， x =% ;- 一从标准曲线上 查得相应的L ( 一) - 羚脯氨酸量， 陀; 一 称取试样的质量 ， 9 ;GB 9 6 95 . 23 一 90V- 一 从2 0 0 m L 容量瓶中吸取滤液的 体积， m L ,当符合允许差所规定的要求时， 取两次测定结果的算术平