GBT18932.20-2003蜂蜜中氯霉素残留量的测定方法气相色谱-质谱法.pdf

G B/ T 1 8 9 3 2 .2 0 -2 0 0 3 前言 G B / T 1 8 9 3 2 的本部分的附录A和附录B为资料性附录。 本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分起草单位: 中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分主要起草人: 庞国芳、 刘永明、 范春林、 曹彦忠、 张进杰、 李学民、 贾光群。 本部分系首次发布的国家标准。 GB / T 1 8 9 3 2 . 2 0 -2 0 0 3 蜂蜜中氮霉素残留量的测定方法 气相色谱一 质谱法 范围 G B / T 1 8 9 3 2的本部分规定了蜂蜜中氛霉素残留量气相色谱一 质谱测定方法。 本部分适用于蜂蜜中氯霉素残留量的测定。 本部分的氯霉素方法检出限: 0 . 1 0 p g / k g , 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过G B / T 1 8 9 3 2的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本部分。 然而， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本 部分。 G B / T 6 3 7 9 测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性( G B / T 6 3 7 9 -1 9 8 6, n e q I S O 5 7 2 5 ; 1 9 8 1 ) G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法( G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 , n e q I S O 3 6 9 6 ; 1 9 8 7 ) 3 原理 蜂蜜试样用水溶解后， 用乙酸乙醋提取试样 中残留的抓霉素， 提取液浓缩后再用水溶解， O a s i s H L B固 相萃取柱净化， 经硅烷化后用气相色谱一 质谱仪测定， 外标法定量。 4 试荆和材料 4 . 1 水: G B / T 6 6 8 2 规定的一级水。 4 . 2 甲醉: 色谱纯。 4 . 3 乙腊: 色谱纯。 4 . 4 乙酸乙醋: 色谱纯。 4 . 5 乙睛+水( 1 +7 ) : 量取 2 0 mL乙睛( 4 . 3 ) 与 1 4 0 mI水混合。 4 . 6 Oa s i s HL B固相萃取柱或相当者: 6 0 mg , 3 mL 。使用前分别用 3 mL甲醇和 5 mL水预处理， 保 持柱体湿润。 4 . 7 毗陡: 色谱纯。 4 . 8 六甲基二硅氮烷: 色谱纯。 4 . 9 三甲基氯硅烷: 色谱纯。 4 . 1 0 硅烷化试剂: 将九份毗吮( 4 . 7 ) 、 三份六甲基二硅氮烷( 4 . 8 ) 和一份三甲基氯硅烷( 4 . 9 ) 混合。 4 . 1 1 氯霉素标准物质: 纯度)”%。 4 . 1 2 氯霉素标准储备溶液: 0 . 1 m g / m L 。准确称取适量的氯霉素标准物质( 4 . 1 1 ) ， 用甲醇配成 0 . 1 mg / m L 的标准储备液。储备液贮存在 4 冰箱中， 可使用两个月。 4 . 1 3 氯霉素基质标准工作溶液: 选择不含氯霉素的蜂蜜样品五份， 按本方法提取( 7 . 1 ) 和净化( 7 . 2 ) 后， 制成 蜂蜜空白样品提取液， 用这五份提取液分别配成氯霉素浓度为 。 . 4 n g / m L , 1 . 0 n g / m L , 3 . 0 n g / m L , 1 0 n g / m L , 2 0 n g / m L 溶液， 经硅烷化后配成标准工作溶液， 在4 保存 可 使用一周。 1 GB/ T 1 8 9 3 2 . 2 0 - 2 0 0 3 5 . 仪器 5 . 1 气相色谱一 质谱仪: 配有化学源。 5 . 2 分析天平: 感量0 . 1 m g 和。 . 0 1 g 各一台。 5 . 3 自动浓缩仪或相当者。 5 . 4 氮 气吹干仪。 5 . 5 振荡器. 56 液体混匀器。 5 . 7 固相萃取装置。 5 . 8 贮液器: 5 0 m L , 5 . 9 真空泵: 真空度应达到8 0 k P a , 5 . 1 0 离心机。 5 . 1 1 具塞试管, 1 0 ml 。 5 . 1 2 移液器: 0 . 0 5 mL , 1 0 m L, 5 . 1 3 离心管: 5 0 mL ， 具塞。 试样的制备与保存 6 . 1 试样的制备 对无结晶的实验室样品， 将其搅拌均匀。对有结晶的样品， 在密闭情况下， 置于不超过 6 0 的水浴 中温热， 振荡， 待祥品全部融化后搅匀， 迅速冷却至室温。 分出0 . 5 k g 作为试样， 置于样品瓶中， 密封， 并做上标记。 6 . 2 试样保存 将试样于常温下保存。 侧 定步骤 7 . 1 提取 称取5 g 试样， 精确到。 . 0 1 g ， 置于5 0 m L具塞离心管中， 加人5 m L水， 于 液体混匀器上快速混合 1 mi n ， 使试样完全溶解。加人 1 5 m L乙酸乙醋， 在振荡器上振荡 1 0 mi n ， 在 3 0 0 0 r / mi n下离心 1 0 min ， 吸取上层乙酸乙醋 1 2 mL转人自动浓缩仪的蒸发管中， 用自动浓缩仪在 5 5 减压蒸干， 加人 5 mL 水溶解残渣， 待净化。 7 . 2净化 将提取液( 7 . 1 ) 移人下接Oa s i s HL B柱( 4 . 6 ) 的贮液器中， 溶液以小于等于3 mL / mi n的流速通过 O a s i s HL B固相萃取柱， 待溶液完全流出后， 用 2 X5 m L水洗蒸发管并过柱， 然后再用 5 mL乙睛十水 ( 4 . 5 ) 洗柱， 弃去全部淋出液。在 6 5 k P a 的负压下， 减压抽干 1 0 mi n ， 最后用 5 mL乙酸乙醋( 4 . 4 ) 洗 脱， 收集洗脱液于1 0 m L 具塞试管( 5 . 1 1 ) 中， 于5 0 水浴中用氮气吹干仪吹千， 待硅烷化。 7 . 3 硅烷化 在上述 1 0 mL具塞试管中加人 5 0 t L硅烷化试荆( 4 . 1 0 ) , 混合 。 . 5 m i n - 1 m i n ， 立即用正己烷定 容至 1 mL ， 待测定。 7 . 4侧定 7 . 4 . 1 气相色谱一 质谱侧定条件 a ) 色谱柱: B B - 5 MS ( 3 0 mX0 . 2 5 m mX0 . 2 5 p m)石英毛细管柱或相当者; b ) 载气: 氦气， 纯度)” 9 9 9 %; c ) 流速: 1 . 0 mL / mi n ; G B/ T 1 8 9 3 2 . 2 0 -2 0 0 3 d ) 柱温: 初始温度 7 0 0C， 然后以2 5 C / m i n程序升温至2 5 0 0C， 保持 5 m i n ; e ) 进样量: 1 k L ; f ) 进样方式: 无分流进样; 9 ) 进样口 温度: 2 8 0 0 C ; h ) 接口温度: 2 8 0 0C ; i ) 负化学源: 1 5 0 e V; i ) 离子源温度: 1 5 0 0C ; k ) 反应气: 甲烷， 纯度)9 9 . 9 9 %; 1 ) 反应气流量: 4 0 %; m) 选择离子检测: 检测离子/ ( m / z )离子比/(%)允许相对偏差/(%) 4 6 6 1 0 0 4 6 8 8 0士 2 0 4 7 0 2 1士2 5 3 7 6 1 8士3 0 7 . 4 . 2 定性测定 进行样品测定时， 如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致， 并且在扣除背景后的样品质谱 图中， 所选择的离子均出现， 而且所选择的离子比与标准样品衍生物的离子比相一致， 则可判断样品中 存在氯霉素。如果不能确证 ， 应重新进样， 以扫描方式( 有足够灵敏度) 或采用增加其他确证离子的方式 或用 L C - MS - MS 仪器来确证 7 . 4 . 3 定量测定 用配制的基质标准工作溶液( 4 . 1 3 ) 分别进样， 绘制峰面积对样品浓度的五点标准工作曲线， 仪器测 定以m/ z 4 6 6为定量离子， 用标准工作曲线对样品进行定量， 样品溶液中氯霉素衍生物的响应值均应在 仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下， 氯霉素衍生物参考保留时间约为 1 2 . 3 min ,氯霉素标准 物质衍生物总离子流图和质谱图参见附录A中的图A. 1 , 图A . 2 . 7 . 5 平行试验 以上步骤， 对同一试样进行平行试验测定。 7 . 6空白试验 除不称取试样外， 均按上述步骤进行。 结果计 算 结果按式( 1 ) 计算: 1 0 0 01 0 0 0 ( 1 ) V一m 亡 - X 式 中: X 试样中被测组分残留量， 单位为微克每千克( 1, g / k g ) ; 。 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度， 单位为纳克每毫升( n g / mL ) ; V 样品溶液定容体积， 单位为毫升( m L ) ; m 样品溶液所代表试样的质量， 单位为克( 9 ) 。 注: 计算结果应扣除空白值 精密度 本部分的精密度数据是按照G B / T 6 3 7 9 的规定确定的， 其重复性和再现性的值是以9 5 %的可信度 3 GB / T 1 8 9 3 2 . 2 0 -2 0 0 3 来计算。 9 . 1 重复性 在重复性条件下， 蜂蜜中抓霉素的含量在0 . 1 0 p g / k g -4 . 0 p g / k g范围内， 获得的两次独立测试结 果的绝对差值不超过重复性限( ， ) ， 本部分的重复性限按式( 2 ) 计算: r= 0 . 0 8 4 5 m + 0 . 0 0 8 2 (2) 式 中: m氯霉素测定值的 浓度. 单位为微克每千克( p g / k g ) , 如果差值超过重复性限， 应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的侧定。 9 . 2再现性 在再现性条件下， 蜂蜜中抓霉素的含量在0 . 1 0 p g / k g - 4 . 0 iA g / k g范围内， 获得的两次独立测试结 果的绝对差值不超过再现性限( R ) ， 本部分的再现性限按式( 3 ) 计算: 1 蟀 =0 . 8 2 1 7 1g m一0 . 6 2 9 6 ( 3) 式 中: m氯霉素测定值的 浓度， 单位为微克每千克( p g / k g ) , G B/ T 1 8 9 3 2 . 2 0 -2 0 0 3 附录A ( 资料性附条) 标准物质衍生物总离子流 图和质谱 图 A . 1 氛霉素标准物质衍生物总离子流图， 见图 A . 1 , 12 _， 月 1 5 00 1 4 00 1 3 00 12 00 11 00 10 00 卯 O 800 7 0 0 60 0 5 0 0 月0 0 30 0 20 0 8 . 5 0 9 . 0 0 9 . 5 0 1 0 . 0 0 1 0 . 5 0 1 1 . 0 0 1 1 . 5 0 1 2 . 0 0 1 2 . 5 0 1 3 . 0 0 1 3 . 5 0 1 4 . 0 0 t / mi n 圈 A. ， A . 2 氛霉素标准物质衍生物质谱图， 见图A. 2 4 66 1 6 00 0 1 4 00 0 12 00 0 1 000 0 80 00 60 00 40 00 37 6 20 00 2062 46 2 8 3 3 0 4 a阴 42 6 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 0 2 4 02 5 0 2 6 0 2 7 0 2 8 0 2 9 0 3 0 0 3 1 0 3 2 0 3 3 0 3 4 0 3 5 0 3 6 0 3 7 0 3 8 0 3 9 0 4 0 0 4 1 0 4 2 0 4 3 04 4 0 4 5 0 4