GBT5413.14-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B12的测定.pdf

GB / T 5 4 1 3 - 1 4 -1 9 9 7 自 ii言 本标准等效采用美国公职分析化学师协会( A O A C ) 方法， 方法准确、 灵敏度高。 本系列标准从实施之日起， 代件G B 5 4 1 3 -8 5 本标准由中国轻工总会提出。 本标准由全国乳品标准化中心归口。 本标准负责起草单位: 国 家乳制品质量监督检验中心。 本标准参加起草单位: 卫生部食品卫生监督检验所、 浙江省轻工业研究所、 哈尔滨森永乳品有限公 司、 雀巢( 中国) 投资 服务有限公司。 本标准主要起草人: 张玉杰、 王芸、 殷晓红、 吕为群。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 婴 幼 儿 配 方 食 品 和 乳 粉 G B / T 5 4 1 3 - 1 4 -1 9 9 7 维 生 素 B 1 2 的 测 定 代替 GB 5 4 1 3 -8 5 Mi l k p o m A e r a n d f o r mu l a f o o d s f o r i n f a n t a n d y o u n g c h i l d r e n 一 Xt e r mi n a t i o n o f v i t a mi n B1 2 c o n t e n t 范围 本标准规定了用微生物法测定维生索B , : 的方法。 本标准适用 ; 婴幼儿配方食品和乳粉中维生索Bi: 的测定。 方法原理 莱十曼氏乳酸杆菌( L a c t o b a c i l l u s l e i c h m a n n i i ) 对维生素B , : 的存在具有极高灵敏性。 利用这种特异 性可定量测出样品中维生素1 3 1 2 的含量。 试剂、 菌种和培养基 所有试剂， 如未 注明规格， 均指分析纯; 所有实验用水， 如未注明其他要求， 均指三级水。 3 . 1 生R -A水: 9 9 / L . 3 . 2 乙醉: 体积分数为2 5 %. 3 . 3 无水磷酸氢二 钠。 3 . 4 无水偏垂W . 硫酸钠。 3 . 5 柠檬酸( 含一 个结品水) 。 3 . 6 菌种: 莱士曼氏乳酸杆菌( L a c t o b a c i l l u s l e i c h m a n n i i ) . 3 . 了 培养草. 3 . 7 . 1 乳酸杆菌琼脂培养A: 光解陈 1 5 g , 酵母i s 膏5 g , 葡萄掂 l o g ， 番茄汁 l O O m L , 磷酸 二 氢钾2 g , 聚 w梨掂单油酸酷 l g 琼脂 l o g , 蒸馏水 1 0 O O m L , p H 6 . 8 士0 . 2 ( 2 5 C ) . 3 . 7 . 2 乳酸杆菌肉汤培养A . : 光解陈 1 5 g , 酵母i 膏5 g , 葡萄掂 l o g ， 番茄汁 I O O m L , 磷酸二 氢钾2 g , 聚 d i 梨掂单油 低浓度维生素B 1 2 的浓度为0 . 0 1 f i g / M L 。从中间液中( 5 . 2 . 2 ) 吸 几 个5 m L ， 用蒸馏水分别定容到2 5 0 r n L和5 0 0 ,n L . 操作步骤 6 . 1 样品的处理 6 . 1 . 1 无水磷酸氢 几 钠( 3 . 3 ) 1 . 3 g , 无水偏重敢硫酸钠( 3 . 4 ) 1 . 飞， 柠檬酸( 含一个结.钻 水) ( 3 . 5 ) . 飞， 用 I O O M L蒸馏水溶解。 6 . 1 . 2 称 一定量的样品( 约含维生索B , 2 5 0 -1 0 0 n g ) ， 用 I O m L的上述溶液( 6 . 1 . 1 ) A合后， 再加 1 5 0 m L蒸馏水， f - 1 2 1 水解I O m i n ， 冷却后调p H i t . 4 . 5 ， 再用蒸馏水稀释， 使鼓终溶液中维生索B ,: 的 质量浓度约在0 . 0 1 -0 . 0 2 n g / m L , 偏T 4 F . 硫酸钠的质量浓度小J - 0 . 0 3 m g / m L . 6 . 2 标准曲线的制备 按表I 顺序加入燕馏水、 标准溶液和维生索B 12 测定用培养摹于培养管中，一 式三份。 表 I 试管号N o . I234567891 0 蒸馏水， m L 5543210210 标准溶液， , m L 0012345345 培养基， m L 5555555555 1 试管N o . 3 -7 中加低浓度标准溶液p N o . 8 -1 0 中加高浓度标准溶液。 3 测定液 按表 2 顺序加蒸馏水、 样品溶液和维生素 B 1 2 测定用培养基 r 培养管内， 式三份。 GB / T 5 4 1 3 - 1 4 -1 9 9 7 表 2 试管号N o . 1234 蒸馏水， m L 4321 样品， mL1234 培养基， m L 5555 6 . 4 接种 将6 . 2 和6 . 3 中所有的试管J - - 1 2 1 灭菌5 m i n , 然后迅速冷却。 将6 . 1 . 2 中的菌悬液用毛细滴管向 L 述试竹中各加I 滴( 其中标准曲 线管中N o . I 除外) ， 混匀， 3 7 士0 . 5 培养 1 9 -2 0 h . 6 . 5 测定 以接种空白 管做对照， 测鼓高浓度标准样管的T ， 二 个小时后乖新读数， 二 次结果T值(2 Y , ， 则取 出全部检验竹测上 T , 井记录。 分析结果的表述 以标样含维生素B 1 2 的量为横坐标， ，值为纵坐标做工作曲线。根据样品测得的T值， 从标准曲线 中查得维生索B 1 2 含量的平均值， 再根据式( 1 ) 计算侮百克( 或毫升) 样品中的实际含量: L 、 ， 。、 二 、 _尸， 。 。 ，、 ，x ，F、 ，_ ， 。 样品中维生索 B . u g / 1 0 0 g ( -L) j= 今 x _ x 1 0 0 (1) ， ， H “，“ 几一 尔 “， 乙 廿0 1 “ “ 0、 “， 刁