常见临床标本的细菌学检验.ppt

常见临床标本的细菌学检验,一、常见临床标本 1、血液 2、尿液 3、粪便、肛拭子 4、脓汁及脓拭子 5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、 脑脊液、鞘膜液） 6、痰 7、胆汁 8、咽拭子 9、空气,二、标本采集的一般原则,1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗法之前采集标本。 2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避免其它微生物特别是正常微生物的污染。 3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌不能使用消毒剂）加入适当保存液 。 4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌氧运送。防止污染及扩散。 5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。,三、常见标本的采集（一般由临床医师执行）,（一）血液： 1、一般在发热高峰期采集（发热初期1-2天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。 2、采血部位：一般为静脉（动脉阳性率更高些）。 3、采血量：5-1ml，直接加入酚红葡萄糖肉汤中（血/肉汤=1：10）（防止血凝、稀释Ab等因子）如不能直接接种应置入已灭菌适量20%枸橼酸盐瓶中。尽快送检。,4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤中加入相应对抗剂。 磺胺类药物对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素2u青霉素酶/ml 其他抗生素MgSO4 5mg/100ml （二）粪便： 1、应尽量在用药前自然排便；取有胧血、粘液部分2-3 g（新鲜）液壮便应取絮壮物1-2ml于无菌广口瓶中。,2、如无法获取粪便，应用直肠拭子，小儿入肛门2-3cm。成人入肛门4-5cm.取直肠粘液入无菌试管/保存液。 3、如需保送运送测量PH7.0甘油PSB中（0.033mol/L PSB与等体积甘油混匀。PH7.0),( 三）、脓汁 1、创伤：先以无菌NS清洗创口周围，再以棉签来取脓汁/分泌物脓拭子置无菌试管。 2、脓肿：先消毒患部表面皮肤，再以注射器抽吸/切开脓时接留脓汁1-2ml置无菌试管。 3、厌氧菌：一定要由伤口深处取样，半小时内接种完毕。,（四）咽拭子： 1、由咽部扁桃体处采集分泌物（注意部位、方式） 2、如凝为白喉患者，则应先除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物，再取样。 3、凝为百日咳患者，可采用咳碟法。,（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h痰。（冰箱保存）,（六）胆汁： 1、行十二指肠引流水收集“胆汁乙”10-15ml。 胆汁甲胆总管（ ） 胆汁乙胆素（柠黄色） 胆汁丙肝胆管（金黄色） 胆汁丁十二指肠（ ）,（七）穿刺液： 1：原则上由临床医生先穿刺获得。 2：采样量：胸水，腹水：5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸橼酸钠。1：10,（八）尿液： 1、一般用导尿.5-10ml，也可用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾，2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。 2、作结核杆菌培养，留取24h尿，将沉淀部分送检。,3、肾盂尿，应标明右、左，每侧分3份留联（导尿管插入输尿管。） 4、通常宜取清晨第一次尿。 5、采集后应立即送检，接种，一般不得超过1h，冰箱保存，不过6h。,四、常见临床标本鉴定程序,染色镜检 变浊、色、 质 BA 菌落 染色镜检 1血液酚红葡萄糖肉汤 有菌落 无改变BA 报告：无菌生长 无菌落 无菌落 BA 有菌落染色镜检 变浊、色、质BA菌落染色镜检 2穿刺液 血肉汤 有菌落 无改变BA 报告：无菌生长 无菌落 染色,3，拭子（咽、脓）,BA,菌落分类、编号、染色镜检,染色镜检,注：接种血平板时，拭子作原划线、接种环划开,4、痰,BA,菌落分类、编号、染色,TB培养,罗氏斜面（先消化处理）,4%NaOH 6%H2SO4,5、尿液,BA（直径=9.0cm，接种量0.01ml） 注：将标本充分划开,集菌（3000n/min 15）,沉渣,革兰氏染色,BA,无菌落,报告：无菌生长,有菌落,染色镜检,菌落计数,报告：检出*菌 *个/ml 10万/ml感染,6、粪便,（含肛拭子）,SS、MaC（强弱各1个）,无可疑菌落 报告：无致病菌生长,可疑菌落（透明/半、无酸色）,增菌（一般不进行）,T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤） M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤) S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）,沙门氏菌,煌绿增菌液 亚硒酸盐增液,沙志,G.N,志贺氏菌,碱性蛋白胨水,霍乱弧菌,革兰氏染色,球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细菌染色性,形态排列选择恰当生化反应,免疫学反应及动物试验,报告,G-杆菌,KIA,菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度,根据KIA结果选择适当生化反应项目,+/+,I M Vi C 七叶,+ + ,-/+,I MAN SUC C U PA,_ _ _ _ I项“+”非沙门氏菌, + + +,I项“+”非志贺氏菌,+ 变+普,-/- I 葡 C 不动杆菌 绿脓杆菌 +/- 一般不会出现，可考虑接种不当，空 气污染 根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果,五、空气细菌计数,将直径9 .0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板按五点法/三点法打开盖暴露20，盖好37 24h计数菌落数，称出平均每个板菌落数N,奥梅梁斯基法则： 100cm2 510L A t *10L,At 100*50,XX个/M3= *1000= 39.32N,N *10,At 100*5,50000N At,（49.0；20）,结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血琼 脂平板培养”,肠杆菌科各属KIA结果,斜面 底层 产气 H2S 动力 埃希氏菌属 A/K A +/- - （+）/- 志贺氏菌属 K A - - - 沙门氏菌属 K A +/- d/+ + 枸橼酸盐菌属 d A + d + 克雷伯氏菌属 A A + - - 肠杆菌属 A A + - + 欧文氏菌属 K/A A -/+ +/- +/- 沙雷氏菌属 K/A A +/- - -/d 哈夫尼亚菌属 K/A A + - +/- 爱得华氏菌属 K A +/d +/- +,斜面 低层 产气 H2S 动力 变形杆菌属 K A + +/- + 普罗菲登斯菌属 K A + +/- + 摩根氏菌属 K A （+） - + 耶尔森氏菌属 K/d A d/- - - 肥杆菌属 K A - - - 致病性杆菌属 K A - - + 克沃尔氏菌属 A A + - +/（+） 拉思氏菌属 A A （+） - - 西地西菌属 K/d A （+）/+ - - 塔特母氏菌属 - A - - -,注：A 产酸； K 产碱； + 90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌株阳性 ；d 26-75%菌株阳性； - 0-10%菌株菌阳性,七、肠杆菌微量快速鉴定,一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液，将其示为酶 予成酶,酶+低物+显色剂（或其他添加剂）观察现象,二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空， 低温干燥，密封保存备用。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16,H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO,序号 实验名称 英文缩写 阴性 阳性 1 H2S H2S 无色 棕色、黑色 2 硝酸盐还原 N 淡黄/白色 粉红 3 苯丙胺酸 P 白色 绿色 4 吲哚 I 白色 粉红,序号 实验名称 英文缩写 阴性 阳性 5 赖胺酸 LD 黄色 紫兰色 6 乌胺酸 OD 黄色 桔色 7 丙二酸盐 M 黄缘色 湖兰色 8 尿素 U 黄色 粉红 9 VP VP 白色 粉红 10 七叶苷 E 白色 棕黑色 11 ONPG ONPG 白色 黄色 12 蔗糖 S 紫色 黄色 13 阿拉伯糖 A 紫色 黄色 14 侧金盏花醇 AD 紫色 黄色 15 肌醇 1N 紫色 黄色 1 6 山梨醇 SO 紫色 黄色,1 2 3 4 5 6 7 8,H2S N PD I LD OD M U 2 1 4 2 1 4 2 - - + - + - +