西南大学药学综合资料药物分析第十五章甾体激素类药物的分析.ppt

第十五章,（Analysis of Steroid Hormones),甾体激素类药物的分析,更多药综资料找西大16年考本学院学姐QQ：1003050289,第一节 基本结构与分类,内 容,第二节 鉴别试验,第三节 特殊杂质检查,第四节 含量测定,药 物 分 析,基本结构：环戊烷并多氢菲,第一节 结构与分类,一 、基本结构,二、分类及结构,结构、性质与分类,甾体激素,肾上腺皮质激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,性激素,肾上腺皮质激素,氢化可的松,C17 -醇酮基,4-3-酮基,结构、性质与分类,醋酸地塞米松,肾上腺皮质激素,结构、性质与分类,4-3-酮基,醋酸曲安奈德,肾上腺皮质激素,结构、性质与分类,地塞米松磷酸钠 肌注时可延长作用时间,肾上腺皮质激素,结构、性质与分类,肾上腺皮质激素类结构特点,A环4-3-酮基： UV、与羰基试剂反应 C17 -醇酮基: 还原性 （或醇酮基的醇羟基与酸成酯）,结构、性质与分类,雄 性 激 素,甲睾酮,C17 羟基,结构、性质与分类,4-3-酮基,雄 性 激 素,丙酸睾酮,4-3-酮基,结构、性质与分类,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,结构、性质与分类,4-3-酮基,雄性激素及蛋白同化激素类特点,A环4-3-酮基 UV、与羰基试剂反应 C17 :醇羟基 可成酯,结构、性质与分类,孕 激 素,黄体酮（天然孕激素）,4-3-酮基,C17 甲酮基,结构、性质与分类,醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate ),孕 激 素,炔诺酮,4-3-酮基,结构、性质与分类,A环4-3-酮基 UV、与羰基试剂反应 C17 :甲酮基（黄体酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮） 与亚硝基铁氰化纳反应 C17 :乙炔基（炔诺酮、左炔诺孕酮）,孕激素结构特点,雌二醇,A环3OH 苯环,C17 羟基,结构、性质与分类,雌 激 素,炔雌醇,A环3OH 苯环,C17 乙炔基,C17 羟基,结构、性质与分类,A环3OH 苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应 C17 :C17 乙炔基 与AgNO3反应 C17 羟基 可成酯,雌激素类结构特点：,结构、性质与分类,第二节 鉴别试验,一、化学鉴别法,二、紫外-可见分光光度法,三、红外分光光度法,四、色谱法,甾体激素类药物,呈色,H2SO4或H3PO4 、 HClO4或HCl,（一）与强酸的呈色反应（母核）,一、化学鉴别法,与硫酸显色反应,显色 荧光 加水稀释,泼尼松龙 深红 絮状灰,泼尼松 橙 黄蓝绿,炔雌醚 橙红 黄绿 红色,炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红,醋酸可的松 黄或微带橙 褪色并澄清,鉴别试验,（二） 官能团的反应,1 C17 醇酮基 （肾上腺皮质激素类）还原性,（1）呈色反应,醋酸泼尼松,红色,氯化三苯四氮唑试液 NaOH,（2） 沉淀反应,肾上腺皮质激素药物,氨制硝酸银,Ag黑色,碱性酒石酸铜,Cu2O橙红色,醋酸可的松,黄色,2. C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,硫酸苯肼试液,70，,黄体酮,异烟肼,甲醇、稀盐酸,黄色,鉴别试验,3. C17 甲酮基,黄体酮,其他甾体激素类,亚硝基铁氰化纳,蓝紫色,淡橙色 不显色,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物，可与亚硝基铁氰化纳、间二硝基酚、芳香醛呈色。,鉴别试验,碳酸钠，醋酸钠,黄体酮,蓝紫色,鉴别试验,4. 酚羟基（雌激素类）,雌激素类药物,重氮苯磺酸,红色偶氮染料,鉴别试验,5. 乙炔基（炔雌醇、炔诺酮）,白,鉴别试验,苯环 280nm,二、 UV法,C=C-C=O -3-酮 240nm,鉴别试验,专属性高。几乎所有的甾体激素原料药都采用了IR法鉴别。,三、IR法,-OH 3750 3300cm-1,CH 3320 cm-1,C-H 3000 2700cm-1,C=O 1900 1650cm-1,C=C 1650 1450cm-1, =CH 1000 650cm-1,鉴别试验,1630cm-1,3420cm-,亚甲基、角甲基吸收带,1750cm-1,1232cm-1,1052cm-1,醋酸可的松,结构特征：43酮、C17 OH C20 酮基、 C11 酮基、醋酸酯,1590cm-1,3505cm-,3300cm-1,1505cm-1,3610cm-,酚羟基,醇羟基,1616cm-1,苯环的骨架振动,炔雌醇,结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基 、苯环,（一） TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法,鉴别试验,（二） HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,四、色谱法,第三节 特殊杂质检查,甾体激素类药物中“有关物质”的检查,1. 来源：原料、中间体、异构体、降解产物等“其他甾体” 2. 特点: 结构类似，具有相似的甾体母核结构，采用色谱法检查,TLC法：供试品自身稀释对照法 显色：碱性四氮唑蓝试液、硫酸-乙醇、荧光等 HPLC法（主成分自身对照法）,3.方法,炔孕酮中有关物质检查,溶剂CHCl3-MeOH(3:1) 硅胶G 展开剂CHCl3-MeOH(95:5) 展开后晾干 120加热5min 365nm比较荧光强度,黄体酮中“有关物质”检查,供试液1 mg/ml,对照溶液0.02mg/ml,供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4,0.01 mg/ml,四、含量测定,（一）HPLC法,（二）UV法,（三）比色法,（一）HPLC法,RPHPLC,由于“其它甾体”有关物质的存在，色谱法可消除它们的干扰,含量测定,定量方法：,ChP(2005年版)及以前 大多内标法,固定相：ODS柱 流动相：甲醇-水或乙腈-水,3、样品测定：供试品+内标,i内标 r 对照品 x 待检杂质,1、系统适用性试验：,2、校正因子f 的测定：对照品+内标,含量测定,内标法,ChP（2010年版）附录 D 高效液相色谱法,色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更重要的参数。,己烯雌酚,黄体酮,黄体酮含量测定的HPLC图,示例：地塞米松磷酸钠的外标法测定 ChP（2010年版）,示例：醋酸曲安奈德乳膏的内标法测定 ChP（2010年版）,色谱柱：ODS柱,流动相：三乙胺溶液（磷酸调pH值为3.00.05 ）-甲醇-乙腈（55:40:5）,检测波长：242nm,色谱柱：ODS柱,流动相：甲醇-水（60:40）,检测波长：242nm,内标：炔诺酮,（二）UV法,-3-酮 max 240nm （）,肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素孕激素,苯环 max 280nm （）,雌激素,（三）比色法,1、四氮唑比色法：C17 -醇酮基 强还原性,含量测定,2、异烟肼比色法：C3酮基,3、Kober反应比色法：雌激素,ChP（2010年版）醋酸地塞米松注射液,ChP（1977年版）地塞米松磷酸钠注射液,ChP（2010年版）复方炔诺孕酮滴丸中炔雌醇的测定,1、四氮唑比色法,- 2e,含量测定,分子重排,肾上腺皮质激素 C17 -醇酮基 强还原性,含量测定,氯化三苯四氮唑（TTC、红四氮唑）,ChP、BP：,2e,（深红色）,max 480-490nm,蓝四氮唑（BT）,USP：,2e,单甲瓒,2e,双甲瓒,（暗蓝色）,max 525nm,四氮唑盐：,甲瓒,三苯甲瓒深红,含量测定,含量测定,蓝四氮唑（BT）,双甲瓒（暗蓝）,原 理,HCl,2、异烟肼比色法：C3酮基,异烟腙（黄色）,含