乳腺癌组织中 MT1-MMP、VEGF 的表达及其相关性.doc

精品论文推荐乳腺癌组织中 mt1-mmp、vegf 的表达及其相关性陈艳波，庞达，张国强，王劲松 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院，哈尔滨（150081） e-mail：摘要：目的： 探讨mt1-mmp和vegf在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法： 采用免疫组织化学方法检测67例乳腺癌组织和癌旁正常组织中mt1-mmp 和vegf的表达情况，并与临床病理特征进行相关性分析。 结果：mt1-mmp和vegf在乳 腺癌组织中的表达水平显著高于在癌旁正常组织中的表达水平( p0.05) 。vegf 和mt1-mmp在乳腺癌组织中的表达呈正相关( p=0.005)。vegf表达与乳腺癌的tnm分期和淋巴结转移相关( p 0.05) ；mt1-mmp表达与乳腺癌的tnm分期和腋窝淋巴结转移相关( p0. 05) 。结论：mt1-mmp和vegf的过表达与乳腺癌的浸润转移有关，二者的联合检测对 判断乳腺癌的恶性程度和预后具有重要价值。关键词：乳腺癌；mt1-mmp；vegf；免疫组织化学中图分类号：a1引言乳腺癌的侵袭和转移依赖于肿瘤间质中的血管生成和细胞外基质的降解。血管内皮生长 因子( vascular endothelial growth factor, vegf)是重要的促血管生成因子, 在肿瘤血管生成过 程中发挥着核心作用。基质金属蛋白酶(mmps)通过降解细胞外基质, 在肿瘤细胞的侵袭、 转移和血管生成中起着重要的作用1。其中膜型基质金属蛋白酶(membrane type-1 matrix metalloproteinase, mt1-mmp)已被证明在血管生成反应中起关键的调节作用2。本研究采用 免疫组织化学方法检测mt1-mmp和vegf乳腺癌和癌旁组织的表达水平，探讨二者与乳腺 癌临床病理特征的关系。2材料与方法2.1 标本来源收集哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科2004年11月2006年11月手术切除乳腺癌组 织的石蜡包埋标本67例, 平均年龄46.9 岁。同时另取距离癌组织边缘5cm以外的正常组织石 蜡标本为对照。所有患者术前均未行化疗或放疗。按照who乳腺肿瘤组织学类型分类标准： 浸润性导管癌51例，浸润性小叶癌8例，导管内癌5例，粘液癌3例。按照国际抗癌联盟（uicc）1997年tnm分期标准：期13例，期35例，期19例。2.2 主要试剂与方法浓缩型兔抗人mt1-mmp多克隆抗体（bs-0414r）购自北京博奥森公司。即用型vegf 单克隆抗体（za-0509）和pv-9000试剂盒购北京中杉试剂公司。采用免疫组化pv两步法进 行检测。石蜡包埋标本制成4m 的连续切片。抗原采用高压热修复，免疫染色按说明书进 行操作。用已知的阳性片作阳性对照，用pbs液代替一抗作阴性对照。2.3 结果判定所有切片均由两位病理科医生双盲计数，差异超过10%需重新计数。低倍镜下分别选取 阳性细胞最密集区，在100倍视野下计数1000个肿瘤细胞，以阳性细胞占肿瘤细胞的百分率 来表示。mt1-mmp/vegf表达的评分标准如下：不着色为阴性（）；阳性细胞数10%为- 5 -弱阳性（1+）；阳性细胞数10%50%为阳性（2+）；阳性细胞数50%为强阳性（3+）。2.4 统计学方法采用spss 13.0 统计软件进行数据处理，采用2 检验、spearman等级相关分析法, 以a =0. 05作为统计学检验的显著性水准。3结果3.1 mt1-mmp和vegf在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达mt1-mmp蛋白阳性染色为棕黄色颗粒,主要定位于细胞膜和细胞浆，见图1；vegf蛋白 阳性染色为棕黄色颗粒,主要定位于细胞浆，见图2。图1 乳腺癌中mt1-mmp蛋白的阳性表达（sp,200）图2 乳腺癌中vegf蛋白的阳性表达（sp,200）mt1-mmp在乳腺癌组织中表达的阳性率为67.2%( 45/67) , 显著高于在癌旁正常组中表 达的阳性率41.8%( 28/67) 。vegf 在乳腺癌组织中表达的阳性率为71.6%( 48/67) , 显著高 于癌旁正常组中的阳性率47.8%( 32 /67) , 详见表1。表1 mt1-mmp与vegf 在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达mt1-mmpvegf阳性阳性率（%）阳性阳性率（%）乳腺癌组织674567.20.0034871.60.005癌旁正常组织672841.83247.8组别例数 p p3.2 mt1-mmp和vegf表达与乳腺癌临床病理特征的关系vegf的表达与乳腺癌的tnm分期和腋窝淋巴结转移有关( p 0.05)。mt1-mmp的表达乳腺癌的tnm分期和腋窝淋巴结转移有关( p 0.05)。见表2。表2 mt1-mmp 及vegf表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系mt1-mmpvegf临床病理特征例数年龄（岁）p阳性阳性率（%）p阳性阳性率（%）50241358.30.0911562.50.21550433272.13374.4肿瘤大小2 cm281757.10.1911553.60.5602 cm392874.43384.6tnm 分期期483060.40.0143164.60.042期191584.21789.5淋巴结转移有463576.10.0213780.40.018无211047.61152.43.3 乳腺癌组织中mt1-mmp和vegf表达的关系48例vegf表达阳性的乳腺癌中, mt1-mmp呈阳性表达37 例, 共同阳性率为77.1% , 而19例vegf表达阴性者中, mt1-mmp呈阳性表达8例,阳性率为42.1 % , spearman相关分析 显示mt1-mmp、vegf在乳腺癌中的表达呈显著正相关( r = 0.336 , p 0. 05)。见表3 。表3 乳腺癌组织中mt1-mmp和vegf表达的关系mt1-mmp表达vegf表达 合计 阳性阴性4. 讨论阳性371148 阴性 81119 合计452267血管生成在促进肿瘤生长、转移中起着至关重要的作用。vegf能特异性地作用于血管 内皮细胞,引起内皮细胞分裂增殖,并在体内诱导血管形成3,是目前已知的作用最强的促血管 生成因子4。已有学者研究证实vegf在乳腺癌中过度表达5,6，且常伴有血清vegf 水平升 高7,8。本研究通过免疫组化测定结果表明，vegf在乳腺癌的肿瘤组织中的表达明显高于癌旁 正常组织，并且vegf在乳腺癌组织中的表达与tnm分期和淋巴结转移呈正相关性，这可能 与vegf增加蛋白水解酶活性,促进间质降解及增加血管的通透性的生物学功能有关。这些都 促进了癌细胞的局部浸润和远处转移。有研究也显示9，vegf能借其裂解内皮屏障的功能 促进肿瘤细胞的渗出和转移。除了肿瘤血管形成外,肿瘤细胞突破基底膜和细胞外基质降解是肿瘤细胞侵袭和转移的 重要步骤。mmps 是一类与肿瘤的侵袭和转移关系十分密切的蛋白水解酶。膜型基质金属 蛋白酶(membrane-type matrix metalloproteinase , mt-mmp) 是mmps 家族中的新成员,至今 已鉴别出6 种。与分泌性mmps 不同,它们依靠疏水性的c 末端锚定在细胞膜上,在细胞表面 发挥水解作用10。okada a 等人已经证实mt1-mmp在多种肿瘤中过表达11。最近的研究 12,13发现mt1-mmp的过表达能增加细胞的侵袭活性，而沉默了mt1-mmp的表达抑制了细胞的迁移和侵袭，表明这个酶是侵袭机制中最关键的酶之一。本实验结果显示, mt1-mmp在乳腺癌与癌旁正常组织的阳性表达率差异具有统计学意 义( p 0.05) 。mt1-mmp的表达与乳腺癌的tnm分期和组织学分级呈正相关( p 0.05)。这 可能是由于mt1-mmp位于侵犯性癌症细胞的前沿，能降解细胞外基质中含量最多的i 型胶 原，也能通过活化的mmp-2，将位于基底膜的iv型胶原裂解，解除限制癌细胞浸润和转移 的屏障，进而促进癌细胞向周围组织扩散和远处转移。另外，有研究显示14，mt1-mmp也 可通过对透明质酸受体cd44和整合素等黏附分子的裂解也参与肿瘤细胞的侵袭。本实验在67例乳腺癌中,发现mt1-mmp与vegf的表达呈正相关( r =0.336, p= 0.005)，提 示mt1-mmp与vegf可能在乳腺癌的血管发生和转移中有内在的联系。这可能如sounni 等 15所报道的，mt1-mmp过表达可通过上调血管生成诱导因子vegf的表达来促进肿瘤的生 长和血管的发生，但其具体的作用机制还有待于进一步研究。综上所述, mt1-mmp与vegf的高表达与乳腺癌的浸润和转移密切相关, 它们在乳腺癌 的血管发生和侵袭、转移过程中可能起到了协同作用，二者的联合检测对判断乳腺癌的恶性 程度和预后具有重要价值。参考文献1gonzlez lo, pidal i, junquera s, et, al. overexpression of matrix metalloproteinases and their inhibitors in mononuclear inflammatory cells in breast cancer correlates with metastasis-relapse j. br j cancer, 2007,97(7):957-9632genis l, galvez bg, gonzalo p, et al. mt1-mmp: universal or particular player in angiogenesis j? 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