4种滋阴中药对衰老小鼠脑M受体的影响.pdf

il-1 表达有关。il-1ra 和 il-1 这两种分子都会在脑损害后被 快速诱导， 但是控制其表达的机理还不清楚。 4 参考文献 1 yang gy， mao y， zhou l f， et al . attenuation of temporary focal cere- bral ischemic injury in the mouse following transfection with interleukin-1 receptor antagonistj . brain res mol brain res，1999； 72 （2） ： 129- 37. 2 buttini m， sauter a， boddeke hw. induction of interleukin-1 mrna af- ter focal cerebral ischemia in the rat j . mol brain res， 1994； 23： 126- 34. 3 relton jk， rothwell nj. interleukin-1 recepter antagonist inhibits ische- mic and excitotoxic neuronal damage in the ratj . brain res bull， 1992； 29： 243-6. 4 longa ez， weinstein pr， carlson s， et al . reversible middle cerebral ar- tery occlusion without craniectomy in ratsj . stroke，1989； 20 （1） ： 84- 91. 5 nagasawa h，kogure k. correlation between cerebral blood flow and his- tologic changes in a new rat model of middle cerebral artery occlusion j . stroke， 1989； 20 （8） ： 1037-43. 6 张 凤， 李向红， 谷志远 . 大鼠脑缺血-再灌注损伤诱导 il-1 的表 达 j . 中国病理生理杂志， 1999； 15 （2） ： 107-9. 7 gutierrez e， banks wa， kastin aj. blood-borne interleukin-1 receptor antagonist crosses the blood brain barrierj . j neuroimmunol， 1994； 55： 153-60. 8 dinarello ca， thompson rc. blocking il-1： interleukin 1 receptor antag- onist in vivo and in vitro j . immunol today， 1991； 12 （11） ： 404-10. 9 loddick sa， wong ml， bongiorno pb， et al . endogenous interleukin-1 receptor antagonist is neuroprotectivej . biochem biophys res com- mun， 1997； 234 （1） ： 211-5. 10 relton jk， martin d， thompson rc， et al . peripheral administration of interleukin-1 receptor antagonist inhibits brain damage after focal cere- bral ischemia in the rat j . exp neurol， 1996； 138 （2） ： 206-13. 11 relton jk， rothwell nj. interleukin-1 receptor antagonist inhibits ische- mic and excitotoxic neuronal damage in the rat j . neurosci biobehav rev， 1992； 29： 243-6. 12 toulmond s， rothwell nj. interleukin-1 receptor antagonist inhibits neu- ronal damage caused by fluid percussion injury in the ratj . brain res， 1995； 671 （2） ： 261-6. 2004-10-25 收稿 2005-03-17 修回 （编辑 张 慧） 4 种滋阴中药对衰老小鼠脑 m-受体的影响 包照日格图 胡雅儿1 夏宗勤1 易宁育 1 （云南中医学院中药系临床中药学研究室， 云南 昆明 650200） 摘 要 目的 比较观察有效成分均为甾体皂甙的滋阴中药知母、 薯蓣、 玉竹和麦冬对衰老小鼠脑 m-受体的调节作用。方法 采用放射配 基结合分析比较老年小鼠 （18 月龄） 对照组和用药组的脑 m-受体 rt 值变化， 并比较老年组与青年组小鼠 （ 3 月龄） 脑 m-受体 rt 值。用药各组每只 鼠剂量均为0. 1 g/ d， 连续3 个月。结果 老年小鼠脑 m-受体 rt 值明显低于青年小鼠脑 m-受体 rt 值 （p 0. 05） ；薯蓣未显示明显的上调作用 （p 0. 05） 。结论 滋阴中药知母和玉竹对衰老小鼠脑 m-受体具有上调作用。 关键词 滋阴中药； 甾体皂甙；衰老小鼠；m-胆碱受体 中图分类号 r749. 1 +6 文献标识码 a 文章编号 1005-9202 （2005） 07-0795-02 1 上海第二医科大学细胞调控研究室 作者简介： 包照日格图 （1957-） ， 男， 副教授， 博士， 主要研究临床中药 学。 研究表明， 人和动物衰老时往往出现不同程度的脑功能障 碍，如学习、 记忆、 联想、 认知等障碍和大脑 m-胆碱系统的功能 低下，包括 m-胆碱受体密度降低有密切关系 1。滋阴药知母、 玉竹、 薯蓣和麦冬均是抗衰老药或包含于抗衰老方剂中 2。近 年研究发现，这几种中药的有效成分中均含有甾体皂甙，甙元 的母核结构相近而不尽相同 3-5。共同的滋阴药性与其共同的 有效成分甾体皂甙 （元） 之间是否有一种内在联系，值得深入 研究。知母对 受体 camp 系统有下调作用， 对 m-受体 cgmp 系统有上调作用 6。知母滋阴有效成分知母皂甙元 （zms） 能 重现知母的上述作用。本研究比较观察上述 4 种中药对衰老 小鼠脑 m-受体的影响， 为深入研究滋阴药性与所含甾体皂甙 （元） 的结构之间的构效关系提供实据。 1 材料和方法 1. 1 材料 1. 1. 1 药物 知母、玉竹、薯蓣和麦冬的生药由上海市药材 公司按科研规格提供， 经上海医大药学院生药教研室鉴定。 1. 1. 2 试剂 3h-qnb，英国 amersham 公司产品， 比活度 1. 5 tbq （42 ci） / mmol；非标记 qnb （二苯羟乙酸奎宁酯） ，sigma 公司产品， 其他试剂均为分析纯。 1. 1. 3 动物 balb/ c 雌性小鼠，上海计划生育研究所比凯 公司产品。 1. 2 方法 1. 2. 1 动物模型制备及给药 小鼠从 3 4 月龄开始饲养至 18 月龄为老年小鼠，随机分为老年对照组、 知母组、 玉竹组、 薯 597包照日格图等 4 种滋阴中药对衰老小鼠脑 m-受体的影响 第 7 期 蓣组和麦冬组。另取 3 月龄相同来源和性别的小鼠作为青年 对照组， 以上各组小鼠数见实验结果。各组动物均在同一环境 下饲养。药物制成水煎剂后，加入饮水中给药 3 个月， 剂量为 每只鼠 0. 1 g/ d。 1. 2. 2 脑 m-受体 rt 值测定 小鼠断头后迅速取其大脑，置 于制备缓冲液中匀浆， 匀浆液先以 5 000 r/ min 离心 10 min，取 上清液再以21 000 r/ min 离心 15 min，沉淀加入反应缓冲液匀 浆制成膜蛋白悬液。受体配基结合反应采用单点法，三复管， 各管中加入 200 l 膜蛋白液，其中总结合管中加入相同浓度 的3h-qnb （终浓度 1. 5 nmol/ l） ，平行的非特异性管中加入非 标记 qnb 100 l （终浓度 0. 1 mol/ l） ，上述操作均在 0 4 条件下进行。然后在 37温育 30 min，冰冷缓冲液终止反应， 玻璃纤维滤膜抽滤淋洗，滤膜烘干，投入闪烁液中用液体闪烁 计数仪测量 cpm 值。 1. 2. 3 蛋白含量测定 用 lowry 微量定蛋白法测定 7。 2 结 果 2. 1 衰老小鼠脑 m-受体 rt 值的变化 放射配基结合分析结 果表明：3 月龄青年小鼠对照组 （9 只） 脑 m-受体 rt 值为 （870. 0 111. 9） fmol/ mg prot， 月龄 18 月龄的老年组 （11 只） 小 鼠脑 m-受体 rt 值为 （787. 6 82. 7） fmol/ mg prot。配对 t 检验 分析 （青年组 rt 值 - 老年组 rt 值） /2 sx =0. 26 0. 09 （p 0. 05） 。薯蓣未显示 m-受体上调作用 （p 0. 05） 。 表 1 4 种滋阴中药对衰老小鼠脑 m-受体 rt 值的影响 （x s） 组别例数rt （fmol/ mg prot）x s 老年组11787. 6 82. 7 知母组8977. 9 148. 90. 39 0. 121） 玉竹组11925. 8 113. 80. 11 0. 082） 薯蓣组9735. 4 34. 80. 17 0. 063） 麦冬组9803. 7 79. 70. 19 0. 103） 与老年对照组比较： 1） p 0. 05 3 讨 论 传统中医药学滋阴学派认为 “阳有余而阴不足” 是机体早 衰的重要原因， 且衰老多以脑衰为主。对此中医的治则就是 “虚则补之” 。滋阴中药知母、 玉竹、 薯蓣及麦冬的有效成分均 为甾体皂甙，具有降血糖 4-5、 改善心血管功能8、 免疫调节和 抗癌 9等作用。已有报道某些滋阴益气药能延长动物的寿命， 调整内分泌功能和免疫功能，清除自由基，促进物质代谢 等 10。相对来说，对中药包括益气滋阴药防治脑衰老的机理 研究进展较慢。主要涉及到疲劳实验，脂褐素含量，抗自由基 等。而很少有反映脑衰老的细胞生物学如高级中枢细胞受体 变化的研究。据我们所知，除知母之外其他几种药均没有关 于对衰老动物脑 m-受体的调节作用的报道。已知人和动物衰 老时往往出现不同程度的脑功能障碍，如学习、 记忆、 联想、 认 知等方面的障碍。这种障碍和大脑 m-胆碱系统的功能低下， 包括 m-胆碱受体密度降低有密切关系 1。以往的研究表明， 在大鼠或小鼠从成年转入老年时每天喂服一定量的单味知母 水煎剂，能使动物脑 m-受体 rt 值在较长时期保持正常水 平 11， 12。 本实验结果表明，自然衰老小鼠脑 m-受体 rt 值明显低 于青年对照组小鼠脑 m-受体 rt 值。知母对衰老小鼠脑 m-受 体 rt 值有明显上调作用 （p 0. 01） 。这与本室过去的研究结 果一致； 玉竹对 m-受体上调作用最明显 （p 0. 05） ； 麦冬对 m- 受体上调作用也有趋势； 薯蓣没有显示 m-受体上调作用。玉竹 组和知母组小鼠脑 m-受体 rt 值相比较， 虽略低于知母组，但 无明显差异，提示玉竹可能是很有希望的抗衰老药。 4 参考文献 1 muller we， stoll l， schubrt t. central cholinergic functioning and aging j . acta psychiatr scand， 1991； suppl 366： 34-9. 2 陈可冀， 李春生 . 抗衰老中药学 m . 北京： 中医古籍出版社， 1989： 38-45. 3 林厚文， 韩公羽， 寥时萱 . 中药玉竹有效成分研究 j . 药学学报， 1994； 29 （30） ： 215-8. 4 noboru nakashima，ikuko kimura，masaysau kimura. isolation of pseu- doprototimosaponin a from rhizomes of anemarrhena asphodeloides and its hypoglycemic activity in streptozotocin-induced diabetic micej . j natur prod， 1993； 56 （3） ： 345-53. 5 atsushi kato， toshihiro miura. hypoglycemic activity of polygonati rhizo- ma in normal and diabetic micej . biol pharmacol bull， 1993； 16 （11） ： 1118-24. 6 易宁育， 夏宗勤， 胡雅儿 . 一些滋阴助阳药调整 m-受体 cgmp 系统 与 受体 camp 系