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文档简介
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察,一实验目的: 1学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 2观察骨髓细胞染色体,计数染色体。,二原理:,活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分析,秋水仙素(或以对二氯苯代之)可使细胞分裂停滞于分裂中期,经染色处理,可得到清晰的中期染色体标本。,三材料试剂,1材料:小白鼠; 2试剂:Giemsa染色液,0.4KCl,2柠檬酸钠,固定液(甲醇:冰乙酸3:1)。,四操作步骤,1实验前48h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml(0.14mg/ml),(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和对二氯苯。 2脱臼处死小鼠,取后肢胫骨和股骨,去两端。用细针头注射器吸取2柠檬酸钠1ml,反复冲洗骨髓腔5次,将冲洗液(离心管中)加入0.4%KCl低渗10min(8ml,37)。 3离心(1000rpm,8min),去上清液,加固定液5ml(注意缓慢加入)。充分吹打,使沉淀块分散,静置10min,再离心10min,弃上清液,重复一次。,4用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液(依沉淀量定)。 5取冷冻载片,距载片15cm高度滴下悬液(取悬液前吸打均匀),单向吹气展开,酒精灯上文火烘干。 6加Giemsa染液染色810min,流水冲去染液(注意水流不可急,细流冲去即可),干燥(晾干),观察,可见分散良好的染色体。,小白鼠的保定和注射,五结果与讨论,1结果: (1)选取分散良好的染色体绘实物图,上传图片1幅)。 (2)染色体计数(2n=40)。 2讨论: (1)实验前注射秋水仙素的作用?不作此步
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