(好资料)6_内毒素性休克

六、内毒素性休克【实验目的】1复制感染性休克中常见的内毒素性休克的动物模型。2观察内毒素性休克时动物血流动力学和肠系膜微循环的变化。3比较缩血管药与扩血管药在内毒素性休克治疗中的作用。【实验对象】雄性家兔1.52.5kg【实验原理】严重的革兰氏阴性细菌感染是引起感染性休克的常见原因，革兰氏阴性细菌所产生的内毒素是主要的致病因子。内毒素可通过其直接与间接作用，引起复杂的神经体液反应和细胞损伤，导致全身性血液循环障碍，引起休克。本实验直接采用静脉注射内毒素引起休克，观察内毒素性休克时机体的血流动力学和肠系膜微循环的变化，并探索缩血管药与扩血管药在内毒素性休克治疗中的作用。【实验药品与器材】20%氨基甲酸乙酯溶液，1%普鲁卡因，1%肝素生理盐水溶液，内毒素（100g/ml），生理盐水，去甲肾上腺素，山莨菪碱，液体石蜡；兔台，1ml、5ml注射器，20ml量筒，小烧杯，手术器械，动脉插管，静脉插管，导尿管，静脉输液装置，恒温水浴灌流盒，动态微循环分析仪，血压、中心静脉压描记装置，温度计。【观察指标】动脉血压（BP）、脉压（PP）、中心静脉压（CVP）、体温（T）、肠系膜微循环、尿量（ 如有条件可用心阻抗血流图等法测心输出量）。【实验方法与步骤】1家兔称重，耳缘静脉注入20%氨基甲酸乙酯溶液（0.51g/kg体重）麻醉后,仰卧固定于兔台，颈部剪毛。2颈部正中皮下注射1%普鲁卡因作局部浸润麻醉后，正中切口，分离左颈总动脉，右颈外动脉，穿线备用。3肝素化：作右颈外静脉插管，通过三通管连中心静脉压测定装置，按1ml/kg静脉输入肝素溶液并测定中心静脉压。4动脉插管肝素化后，作左颈总动脉插管，接血压描记装置，描记动脉血压。5用液体石蜡浸润导尿管后行尿道插管，记录尿量（滴/分）。6将涂有润滑油的温度计插入直肠，测量和记录肛温。7肠系膜微循环观察：侧腹部切口，选择一段游离度较大的小肠袢，拉出，放入加有37C生理盐水的恒温灌流盒的水浴槽内，使肠系膜均匀铺在有机玻璃凸形观察环上，调整液面，使之刚覆盖过肠系膜，用透射光源或侧光源在显微镜下观察。镜下选择好视野，辨别肠系膜微动脉、微静脉和毛细血管网，观察血流速度、血管数目及毛细血管入口口径、出口口径，找出标记血管，以便固定视野作动态的前后比较。8动物安静5分钟，记录术后基础状态的各指标。930分钟内从颈外静脉注入内毒素（参考剂量300g/kg）,造成内毒素素休克，或静脉注入活大肠杆菌（60亿菌数/kg）,造成败血症休克，注射后60分钟内密切观察动物各指标变化。10动物出现明显的休克病理生理变化后，通过静脉输液装置，经耳缘静脉按100150ml/kg剂量快速滴注生理盐水补液，直至CVP恢复正常。同一实验室四组实验中，两组在输液同时加入去甲肾上腺素（参考剂量0.66mg/kg），另两组加入山莨菪碱（参考剂量3.3mg/kg），观察并记录各指标变化。【注意事项】1实验过程中尽量减少手术引起的出血和疼痛，注意防止血管插管内凝血。2在观察肠系膜微循环的过程中，不断滴加预温的生理盐水，以防肠系膜干燥，影响观察。3粗制内毒素注入前应将死菌沉渣摇匀，粗制内毒素最好新鲜培养以免沉渣过多。死菌和活菌注入剂量受菌株毒力高低影响，实验前要进行预实验。【实验结果与分析】 BP PP CVP T 尿量 微循环 血管数 管径（入口 出口）流速 流态基础状态注入内毒素后输液+A治疗输液+B治疗注：A：去甲肾上腺素，B：山莨菪碱。分析：1各监测指标的意义。2为什么内毒素注射可引起休克？3如何判断感染性休克模型复制是否成功？4依据实验指标的变化判断动物处于休克哪一期？是高排低阻型还是低排高阻型休克？5使用何种血管活性药物治疗效果更好，为什么？6本次实验成败的原因。附录：大肠杆菌活菌及粗制内毒素的制备 将分离的大肠杆菌接种肉汤培养液50ml中，在37C温箱中培养24小时，将肉汤培养液5ml加入到预先放有牛肉汤固体培养基的柯氏皿中，在37C培养24小时后，培养基表面就长出一层厚厚的菌苔，用5ml无菌盐水加入柯氏皿中，反复摇晃，洗下细菌。收集含菌的盐水，摇匀后用硫酸钡标准比浊得出菌液浓度，调节菌液浓度每毫升含1000亿菌数。即获得活菌菌液。粗制内毒素制备是将活菌灭活。具体方法是：将培养出的活菌菌液，在30磅高压下灭菌30分钟，再置于-20C低温冰箱过夜使之冰融，以后又反复灭菌又冻融共三次，即制成粗制内毒素混悬液，放0C冰箱保存。注：如本实验选用大白鼠，需改用鼠台，麻醉剂量应改为0.5ml/100g，采用腹腔麻醉，“实验方法与步骤”第5步尿道插管可改为膀胱插管，第3