柑桔青霉病拮抗细菌的分离、筛选及防病效果的研究.pdf

年期四川省食品与发酵 柑桔青霉病拮抗细菌的分离 、 筛选及防病效果的研究 秦文叶华智叶劲松 四川农业大学 摘要 关键词 从雅安城区附近柑桔园的柑桔 叶围和果 围分离得到株芽抱杆菌 , 通过室 内平板对 峙法测定 , 对青霉菌抑菌圈直径大于的有株 , 再经采后果实常温贮藏实验 , 筛选出具有良好防病效果的号菌株为拮抗菌 。 用 残菌株处理温 州蜜柑和甜橙果实 效果明显优于清水对照 , 较对照分别延长贮期 天 、 天与特克多浸果效果相当 , 出库时失水少 , 品质变化小 。 柑桔青霉病拮抗细菌防病效果 前言 柑桔青霉病是柑桔采后发生最多 、 危害最严重的侵染性病害 。 近几十年来 , 主要使 用化学杀菌剂进行 防治 。 但长期使用会对人类健康和环境带来巨大危害 , 如产生抗药性 菌株 , 一些杀菌剂还具有致癌危险等 。 利用拮抗微生物 防治果蔬采后病害已 日益受到人 们的重视 。 等人的研究已证明枯草芽抱杆菌廷鱼逃竺丝丝丝丝对柑桔绿霉 、 酸腐 、 蒂腐有较好的防效 , 其抗病机制主要是产生抗菌物质阻止病原微生物 的繁殖 。 我们试图 从本地柑桔果围和叶围分离筛选 出芽抱杆菌坦丝鱼旦业 , 通过室内平 板拮抗性测定 和贮藏保鲜实验 , 研究其防病效果 , 为柑桔生物防治保鲜方法提供理论基础 。 材料和方法 生物 防治对象菌株的分离 采用稀释分离法 。 从已感染青霉病的柑桔果实上挑取青霉抱子 一环 , 制成菌悬液 , 在平板上进行划线分离培养 , 挑取单个菌落 , 进一步分离纯化至菌落形态基本一 致的单菌落为止 。 菌种斜面保存于冰箱中 。 拮抗菌的分离和筛选 分离 在雅安城区附近不同的果园采摘不同柑桔品种的红桔 、 蜜桔 、 甜橙 、 脐橙果实 及叶片做样品 , 取果皮和叶片各分别置于无菌水中振荡洗涤 , 制成菌悬液 , 水浴处理一 , 用划线法分离纯化得到芽抱杆菌 , 菌种斜面保存于冰箱中 。 拮抗菌株筛选 采用对峙法 。 将柑桔青霉菌接种于平板 , 下培养 。 然后在平板培养物上 用打孔器取菌丝琼脂块 。 将青霉菌菌丝块接在平板 中央 , 四周接分离纯化后 的芽 年期 四川省食品与发酵 抱杆菌菌悬液 , 观察青毒菌的生长情况 , 测定抑菌圈的直径大小 , 初 筛出有抑菌效果的菌株 , 根据抑菌圈直径大小判断拮抗效果 。 拮抗菌的防病效果测定 采后果实接种测定防病效果 采收新鲜完好的甜橙果实 , 用次氯酸钠作表面消毒 。 用集束针在果表四 周刺深 , 直径的园形伤口 , 两分种后将初筛拮抗菌的菌悬液浓度控制在 护喷雾于伤口上 , 待干后在伤 口处喷雾青霉菌抱子悬 液 。 单果薄膜包装 , 一下保温贮藏 天 , 以清水处理做对照 。 每个处理个 果 , 每果个伤口 。 根据伤口感染情况统计每 天的伤 口侵染率 , 进行方差分析 , 从中选 出防腐效果好的芽抱杆菌做为拮抗菌 。 果实贮藏试验 将筛选出的拮抗菌在采后果实上进行防治青霉病的贮藏试验 。 共设三个处理 , 每个 处理三次重复 , 每次个 果 。 选择新鲜 、 健壮 、 无机械伤 、 成熟的果实做原料 , 常 温下通风预贮天后 , 进行各种处理 。 定期各种处理 , 定 期测定 病斑大 小 , 统计腐烂 率 , 并进行两样本率差异显著性试验方法检验 , 出库时检测果实品质 , 主要包括含糖 量 、 含酸量 、 含量等理化指标的变化 。 处理设置为 对照 以清水处理果实 拮抗菌菌悬液浸果浓度为护 砰浸果 , 作为药剂处理对照 结论与讨论 拮抗菌的分离和筛选 从雅安城区附近果园采摘甜橙 、 红桔 、 蜜桔的果实和叶片 , 共分离纯化得到株 芽抱标菌 , 经室 内平板对峙法测定 , 得到抑菌圈直径在以上的芽抱菌株 , 编号 为 , 气 , 共 。 防治效果测定 采后果实接种病原菌测定防病效果 将筛选出的株菌分别进行防效测定 , 从接种后第二天开始观察 , 统计每天果实的 伤口侵染率 , 结果见表 。 由表可知菌株具有很好的防病效果 , 果实贮藏天 , 伤口侵染率仅为 , 而对照为 , 其余各菌株对青霉菌有一定防效 , 伤 口侵染率均较对照 低 , 但效果差异不 显著 。 故选用 朴菌株 残作为拮抗菌 。 残 菌株在贮藏期的防病效果测定 温州蜜柑贮藏期的防病效果测定 年期四省食品与发酵 株菌悬液浸果处理对果实伤口侵染率的影响表 饵饵 差异异 显显显显显显显显显显显显著性性 菌悬液液 残残菌悬液液巧 几几菌悬液液 氏氏 菌悬液液 几几菌悬液液 对对照照 刃刃 注字母不同为方差分析差异显著 天贮期平均室温为 一巧 , 相对湿度 一 , 防效测定结果见表 , 出 库时理化指标分析见表 , 各处理间腐烂情况差异显著性检验结果见表 。 根据以上三 表分析可以得出用氏 菌悬液处理温州蜜柑 , 效果明显优于清水对职 , 腐烂率与对照 呈极显著性差异 , 温 州蜜柑 贮藏天 , 种 处 理的腐烂率分别为 、 、, 说明清水处理与化学药剂处理差异显著 , 其余处理间差 异不显著贮藏天 , 种处理的腐烂率分别为 、, , 说明清水处理与化学药剂处理及菌悬液处理均差异显著 。 温州蜜柑 贮藏后期出现表皮失水皱缩 , 果皮发泡 , 果 肉松驰 , 风味变淡等浮皮现象 。 用氏菌株 处理 , 温州蜜柑可延长贮期天 。 甜橙贮藏期的防病效果测定 天贮期平均室温为 一 , 相对湿度范围一 , 防病效果见表 , 出 库时理化指标分析见表 , 各处理间腐烂情况经两样本率差异显著性试验方法检验结果 见表 。 分析结果表明甜橙贮藏天 ,、 均大于与处理效果基本 相当 , 腐烂率差 异不显著 。 贮藏天 , 三种处理 的腐烂率分别为 、 。 各处理间发病程度前期无明显差异 , 病斑较小 , 后期用 氏菌悬液处理的果实 病斑不扩展 , 不深及果肉 , 而对照与化学杀菌剂处理的均出现病斑急剧扩大至全果面积 乃以上 , 甚至全果腐烂 , 说 明拮抗菌产生的抗菌物质具有抗青霉菌在果皮下扩展的作 用 , 这是所选 氏菌株最突出的特点之一 。 甜橙贮藏后理化指标与贮前无明显变化 , 品 质保持较好 。 用氏 菌株处理 , 甜橙可延长贮期天 。 年期四川省食品与发酵 用菌悬液处理温州蜜桔的防效表 贮贮藏天数数处理方法法病斑大小 。 腐烂率率 天天清水处理理 菌菌菌悬液浸果果 药药药剂处理理 天天清水处理理 菌菌菌悬液浸果果 药药药剂处理理 天天清水处理理 菌菌菌悬液浸果果 药药药剂处理理 天天清水处理理 菌菌菌悬液浸果果果 药药药剂处理理理 温州蜜柑果实不同处理贮藏前后理化指标分析结果表 瓜瓜 尹甄 出汁还原糖蔗糖总糖总酸 率率率 贮贮藏前前 贮贮贮清水水 后后后菌悬液液 药药药剂剂 年期四少省食品与发酵 用氏 菌悬液处理甜橙的防效表 贮贮期期处理方法病笋平均大小腐烂率率 气气气, , 天天清水处理 菌菌菌悬液浸果 药药药剂处理 天天清水处理 菌菌菌悬液浸果 , 药药药剂处理 天天清水处理 菌菌菌悬液浸果 药药药剂处理 天天清水处理 菌菌菌悬液浸果 药药药剂处理 天天清水处理 、 菌菌菌悬液浸果 只 药药药剂处理 甜橙果实不同处理贮藏前后理化指标分析结果表 议议议 还原糖蔗糖总糖总酸 出出出计率率 贮贮藏前前 贮贮贮清水处理理 后后后菌悬液浸果果 药药药剂处理理 年期四川省食品与发酵 两种柑桔不同处理腐烂差异显著检验结果表 畜畜产之 、 温州蜜桔桔甜橙橙 妇妇妇 一 姚 天腐率率天腐率率 天腐率率天腐率率 天腐率率天腐率率 天腐率率天腐率率 天腐率率 注表示 同品种不 同处理腐烂率差异 的值 , 如表示温州蜜柑或检与处理之间 腐烂率差异值】表明两样本率差异不显著 表明两样本率差异显著鑫表明两样本率差异极显著 讨论 拮抗氏 菌株对柑桔青霉病有良好的防治效果 , 腐烂率与对照呈极显著性差异 , 与 高效 、 广谱的化学药剂处理效果相当 。 出库时果实能保持较好品质 。 残 菌只是针对柑桔青霉菌筛选的 , 对其它青霉 菌引起的病害是否 有效可进一步研 究 。 为进一步应用拮抗菌提供理论依据 , 还需进行生物学特性 、 抗菌机理 、 主要抗菌物 质性质等基础间题的研究 。 参考文献 一 李