甘蓝型油菜籽单宁含量及其分布研究.pdf

江苏农业科学2 0 1 2年第 4 O卷第 2期 刘 琴， 白兴梁， 吴梨， 等甘 蓝型油菜籽单 宁含量及其分布研 究 J 江苏农业科 学， 2 0 1 2， 4 o ( 2 ) ： 2 3 32 3 6 甘蓝型油菜籽单宁含量及其分布研究 刘 琴 ，白兴梁 ， 吴 梨 ， 浦惠明 ， 李春阳。 ， 韩 建 ( 1 南京财经大学食品科学与工程学院， 江苏南京 2 1 0 0 4 6 ； 2 江苏省粮油品质控制及深加工重点实验室， 江苏南京 2 1 0 0 4 6 ； 3 江苏省农业科学 院， 江苏南京 2 1 0 0 1 4 ) 摘要 ： 通过单因素试验对香草醛法测定单宁含量的试验条件进行了优化， 并利用优化后的香草醛法对我国 1 0个 品种甘蓝型油菜籽种粕单宁含量进行了测定。结果表明， 优化后的香草醛法的反应条件为： 以体积分数为 3 5 的硫 酸作为酸性介质 ， 显色温度为2 0 2 5 ， 显色时间为 2 0 mi n ， 无水； 菜籽粕单宁含量为 0 7 31 0 6 m g g ， 各品种间差 异显著； 种胚粕单宁含量( 0 7 71 6 0 m g g ) 显著高于种皮粕单宁含量( O 0 9 0 1 6 m g g ) 。 关键词 ： 甘蓝型油菜籽 ； 单宁含量；香草醛法； 种皮粕； 种胚粕 中图分类号： s 5 6 5 4 0 1 文献标志码： A 文章编号： 1 0 0 21 3 0 2 ( 2 0 1 2 ) o 2一 o 2 3 3 0 3 我国是油菜种植大国， 年产量接近 1 0 0 0万 t ， 按种粕产 率为 6 0 7 0 计， 菜籽粕的产量非常可观。然而， 由于菜 籽中存在硫苷、 芥酸和多酚类抗氧化物质 ， 使得菜籽粕的利用 受到了极大限制。经基因改 良育种获得的双低菜籽硫苷、 芥酸含量大幅降低， 但菜籽多酚含量始终未得到改观 J ， 目 前仍为限制菜籽粕再加工利用的主要因素之一， 如何降低菜 籽多酚含量成为提高菜籽粕利用率研究中的热点 I 4 ， 其中 对不同菜籽品种中多酚含量的准确分析必不可少。 菜籽中的多酚主要分为两大类： 一类是芥子碱、 芥子酸及 其衍生物， 其中芥子碱为最主要组分 ； 另一类为缩合单 宁 。本研究组近期工作表明， 无论菜籽种皮还是脱壳后 的种胚粕中， 芥子碱都是主要组分 ， 且菜籽种胚粕芥子碱含量 远高于种皮粕 J 。尽管油菜籽中单宁含量早已引起关注 ， 但我国对于油菜籽单宁含量的研究还不多， 王立峰等曾测定 了油菜籽单宁含量， 但他们采用的是 F o l i nD e n i s 法， 该方法 一 般用于 测定 总 酚含 量 ， 对 单 宁 的测定 并无 特 异性 u 。此 外， 近年来为提高菜籽油品质和菜籽粕利用率， 脱壳技术越来 越广泛地使用在工业榨油工艺中 。根据 J e n s e n等的研究， 油菜籽种皮在油菜籽中含量为 1 0 5 一1 7 2 ， 脱油后的菜 籽粕中种皮含量为 2 0 9 一 3 0 4 。因此， 分别对油菜籽 种皮和种胚的化学组成进行分析是种皮和种胚粕进一步加工 利用的基础。目前关于我国不同基因品种菜籽粕单宁含量以 及菜籽壳粕和脱壳菜籽种胚粕单宁含量的分布还未见报道。 本研究对 1 O个品种的甘蓝型油菜籽种粕、 种皮和脱壳后的种 胚粕单宁含量进行 了分析 ， 以期为菜籽粕 、 种皮粕 和种胚粕 的 进一步加工利用提供科学依据。 1 材料 与方法 1 1 材料 沪油杂 8号 ( 上海市农业科学 院作物研究所 培育) ， 收稿日期： 2 0 1 1 0 9 3 0 基金项目： 江苏省高校自然科学研究重大项目( 编号： 1 1 K J A 5 5 0 0 0 1 ) 。 作者简介： 刘琴( 1 9 6 8 一) ， 女， 江西宜春人， 博士， 副教授， 主要从事 食品化学研究。Em a i l ： l iu q _ s y a h o o c o rn。 8 2 1 3 5 ( 湖北省武汉市中油种业公司培育) ， 8 6 P 2 5 ( 中国农业 科学院油料研究所培育) ， 滁核0 5 0 3 ( 安徽省滁州市农科所培 育) ， D 4 8 1 8 ( 贵州省油菜研究所培育) ， P b 4 ( 江苏省农业科学 院经济作物研究所培育) ， 0 9 H Y 1 ( 江苏省农业科学院经济作 物研究所培育) ， 秦油 7号( 陕西省杂交油菜研究 中心培育) ， 秦优 1 0号( 陕西省咸阳市农科所培育) ， 宁杂 l 9号( 江苏省 农业科学 院经 济作物研 究所 培育 ) 。以上 1 0个不 同基 因品 种油菜籽均于2 0 0 9年 9月栽种子江苏省农业科学院种植基 地， 并于 2 0 1 0年 5月收获。 香草醛( 3一甲氧基 一4一羟基苯 甲醛) 、 儿茶素购 自 S i g m aA l d r i c h 公司； 其他试剂均为分析纯。 1 2 仪器与设备 M i l l i Q A c a d e m i c超纯水系统； 7 2 5型分光光度计 ； 低温 高速冷冻离心机； 高速万能磨碎机 ； J L G 4 5砻谷机。 1 3试 验 方 法 1 3 1 油菜籽样品预处理油菜籽经砻谷机碾压后 ， 用空气 分离法将种皮和种胚分离。分离后的种皮和种胚分别用高速 万能粉碎机粉碎， 再以石油醚( 3 06 0) 为溶剂， 用索氏抽 提装置抽提脱油 4 8 h 。室温下置于通风橱中过夜 ， 将残余溶 剂挥发后再次粉碎， 并过4 0目筛 ， 分别得到种皮粕和种胚粕。 完整油菜籽用高速万能粉碎机粉碎后 ， 同样以上述方式除油、 粉碎并过筛， 得到油菜籽全种粕。所有预处理样品均采用 1 0 5 o C 恒重法测定水分含量。 1 3 2 油菜籽样品单 宁含量测定条件的优化缩合单宁的 测定是以改良的香草醛 一 硫酸法 为基础进行优化。 1 3 2 1 香草醛反应时间及酸性介质的优化配制浓度为 2 m g r n L的儿茶素标准储备液和由 1 香草醛 一冰乙酸溶 液、 8 盐酸( 硫酸)一冰乙酸溶液按 1：1 混合配制而成的工 作液。在 2 5下取适量儿茶素标准储备液用无水 甲醇稀释 成 1 2 0 Ix g m L的儿茶素标准溶液。取 2 0 0 1 2 0 g m L的 儿茶素标准溶液， 加入 6 mL香草醛 一冰乙酸和盐酸( 硫酸) 一 冰乙酸的混合工作液， 在室温( 2 5 o C) 下混合均匀， 跟踪测 定该混合溶液在 5 1 0 n m处的吸光度， 每 5 mi n测 1次。 共跟 踪 9 0 ra i n ， 从而得到香草醛显色反应的最优反应时间和比较 分别用盐酸或硫酸作为酸性介质时的稳定性。 - 2 3 4- 江苏农业科学2 0 1 2年第 4 0卷第2期 1 3 2 2 硫酸 一冰 乙酸溶液中硫酸体积分数 的优化 在 2 5下配制硫 酸体积分数分别 为 5 、 1 5 、 2 5 、 3 5 、 4 5 、 5 0 和 5 5 的硫酸 一冰乙酸溶液， 将其与香草醛溶液 混合配制成不同浓度工作液， 加入 2 0 0 la ,L 1 2 0 p , g mL儿茶素 标准溶液， 室温下反应2 0 rai n 后于5 1 0 n m处测定其吸光度， 以确定该显色反应中硫酸的最佳浓 度。 1 3 2 3 香草醛反应温度的优化将 6份 3 5 的硫酸 一冰 乙酸溶液与香草醛溶液混合的工作液， 分别加入 1 2 0 Ix g m L 儿茶素标准溶液， 在不同温度( 2 0 、 2 5 、 3 0 、 3 5 、 4 O 、 5 O c C) 水浴 中反应 2 0 m i n后取出， 测定其在5 1 0 r i m处的吸光度 ， 以确定 香草醛显色反应的最佳温度。 1 3 2 4水对香 草醛反应 的影 响在 2 5下将 3 5 的硫 酸 一冰乙酸溶液与香草醛混合 的工作液， 按照表 1所示加入 不同体积蒸馏水 ， 并分别与儿茶素标准溶液于室温下混合 2 0 rai n 后测定其在5 1 0 n m处的吸光度， 以确定水对香草醛反 应的影响。 表 1 不同含水量工作液的配制 I 3 3 油菜籽中单宁的提取提取单宁的常用溶剂为 7 0 的丙酮水溶液 J 。取 0 5 g经脱油、 粉碎的试验原料( 菜籽 粕、 菜籽种皮粕、 菜籽种胚粕) ， 加入 1 5 m L 7 0 的丙酮水溶 液 ， 在 2 5下振荡提取 2 h 。然后离心( 4 0 0 0 r m i n ) 得到上 层清液 ， 残渣再分别用 1 5 m L丙酮水溶液洗涤 3次， 离心后将 上层清液合并， 在真空旋转蒸发器上将溶剂蒸干( 4 O) ， 再 用 2 m L甲醇重新溶解定容 ， 留样待测。 1 3 4 单宁含量的测定 1 3 4 1 标准曲线的绘制配制浓度为 4 O 、 8 0 、 1 2 0 、 1 6 0 、 2 0 0 Ia , g mL的儿茶素标准溶液。取上述标准溶液各 0 2 m L ， 分别加入6 m L硫酸 一冰乙酸溶液与香草醛混合的工作液， 按 上述单因素的优化条件得到单宁含量测定的标准曲线。 D =0 1 1 5 9 B +0 0 0 2 8 r =0 9 9 9 7 其中D为吸光度值 ， 曰为儿茶素溶液浓度。 1 3 4 2 单宁含量的测定取 0 2 mL菜籽单宁的甲醇溶液 进行显色 ， 各单因素优化后的显色条件为： 硫酸 一冰乙酸溶液 中硫酸浓 度 ( V：V ) 为 3 5 ， 显色温 度 2 5， 显色 时间 2 0 m i n ， 在5 1 0 n m处测定吸光度。根据标准曲线计算单宁含 量， 结果用儿茶素 当量表示， 即 m g儿茶 素当量 g菜籽粕 干重 。 1 3 4 3 统计分析每个处理重复 3 次。利用 S P S S 1 7 0 软件对测定数据进行 A N O V A及 D u n c a n s 多重 比较分析。 2 结果与分析 2 1 香草醛的单因素条件优化 2 1 1 香草醛反应时间及酸性介质的优化 图 1 是分别以 8 盐酸和8 硫酸的冰乙酸溶液为酸性介质， 在室温下混合 不同时间后香草醛溶液在 5 1 0 n m处吸光度值的变化。从图 1可以看出， 以盐酸作为酸性介质时， 香草醛反应液的吸光度 值由开始时的0 5 7 2下降到9 0 m i n时的0 4 0 1 ； 以硫酸作为 酸JI 生 介质时， 开始混合时吸光度值为0 5 2 5 ， 9 0 m i n后下降到 0 4 8 7， 其稳定性明显高于盐酸， 并且反应的前 2 0 m i n基本稳 定。因此选择硫酸作为香草醛反应的酸性介质 ， 反应时间定 为 2 0 m i n 。 时间 ( mi n) 图1 不同酸性介质及时间对香草醛反应的影响 2 1 2 硫酸 一冰乙酸溶液中硫酸体积分数的优化 以硫酸 作为香草醛反应的酸性介质， 对硫酸 一冰乙酸溶液中硫酸体 积分数( V：V ) 进行了优化， 结果见图 2 。硫酸体积分数为 3 5 时， 吸光度值达到最大； 随着硫酸体积分数继续增加， 体 系的吸光度值略有下降并趋于稳定， 因此确定硫酸 一冰乙酸 溶液中的硫酸体积分数为3 5 。 硫酸体积分数 ( ) 图2 硫酸 冰乙酸溶液 中硫酸体积分数对香草醛反应 的影响 2 1 3 香草醛反应温度的优化图3显示了不同温度下反 应2 0 rai n后反应液在5 1 0 l i ft 处的吸光度值。由图3可见 ， 在 反应温度为2 0或2 5时， 吸光度值接近； 反应温度升高到 3 0后， 体系的吸光度值明显呈下降趋势。为便于温度控 制 ， 选择 2 5( 接近室温) 为反应温度。 温度 ( ) 图3 反应温度对香草醛反应的影响 2 1 4 水对香草醛反应的影响有研究发现香草醛反应 中 水的存在会对显色反应产生淬灭 ， 为此本研究测定Ts： 作 液中水含量对香草醛反应的影响， 结果见图 4 。随着工作液 中水的体积分数增加， 反应体系在 5 1 0 ri m处的吸光度值呈明 显下降趋势， 说明此显色反应应尽可能在无水介质中进行。 遥 冒 0 遥 日 【 0 _【 n 遥 目 I 0 _【 n 刘琴等： 甘蓝型油菜籽单宁含量及其分布研究 2 3 5- 0 8 O 0 7 5 0 7 0 0 6 5 0 6 0 0 5 5 O5 O 0 45 0 40 工作液中水的体积百分数 ( ) 图4 工作液中水的含量对香草醛反应的影响 2 2 不同品种菜籽粕中单宁含量 由表 2可知， 本研究中 1 0个品种油菜籽种粕中单宁含量 范围在 0 7 31 0 6 msg ， 各品种间差异显著( P 0 0 5 ) 。其 中以滁核 0 5 0 3的单宁含量最高， 为 1 0 6 m sg ； 其次为 8 2 1 3 5 和 8 6 P 2 5 ， 单宁含量分别为 0 9 3 、 0 9 2 ms g ； P b 4的单宁含量 最低， 为 0 7 3 m sg 。N a c z k等研究发现， 菜籽中单宁类物质 含量与油菜籽品种、 菜籽成熟程度和提取方法相关， 脱脂的菜 籽粕缩合单宁类物质含量范围是 0 0 2 一 0 3 ， 这与本 研究结果一致。 表 2 不同品种油菜籽种粕 中单宁含量 油菜品种 油菜品种 沪油杂 8号0 8 7 0 0 2 e P b 4 0 7 3 4- 0 0 2 a 8 2 5 0 9 3 4 - 0 0 3 d 0 9HY1 0 7 9 4-0 0 1 b 8 6 P 2 5 0 9 2 4 - 0 0 2 d 秦油 7号0 7 9 4-0 0 6 b 滁核 0 5 0 3 1 0 6 4- 0 0 0 e 秦优 1 0号0 8 5 4- 0 0 6 c D 4 8 1 8 0 8 6 4- 0 O l e 宁杂 1 9号0 7 8 0 0 2 a b 注 ： 表 中同列数字后不同字母代表差异显著( P 0 o 5 ) 。表 3同。 2 3 油菜籽种粕 中单宁含量分布研 究 表 3给出了 1 O个品种油菜籽种皮粕和种胚粕中单宁含 量的测定结果。从表 3可以看出， 种皮粕中单宁的含量范围 在 0 0 90 1 6 msg ， 宁杂 1 9号 的种皮粕 单宁含量最高 ( 0 1 6 m sg ) ； 其 次 为 秦 油 7号 ( 0 1 5 m sg )和滁 核 0 5 0 3 ( 0 1 5 m sg ) ； 8 2 1 3 5和 0 9 H Y1最低 ， 均为 0 0 9 m sg 。种胚 粕中单宁含量范围在0 7 71 6 0 m sg ， 其中滁核0 5 0 3的种 胚粕单宁含量最高， 为 1 6 0 msg ； 其次为秦油 7号和 8 6 P 2 5 ， 均为 1 2 1 m g g ； P b 4最低， 为0 7 7 m g g 。 本试验中各品种菜籽种胚粕中单宁含量均明显高于种皮 粕。1 0个品种的种胚粕单宁的平均含量为 1 1 2 m sS ， 种皮 粕中单宁的平均含量为 0 1 2 msg ， 即种胚粕中单宁含量平 均为种皮粕的9 3倍。其中以0 9 H Y I 相差最大， 种胚粕中单 宁含量为种皮粕的 1 1 1 1 倍； P b 4中二者含量最接近， 但种胚 粕中单宁含量也达到了种皮粕的6 4 1 倍 。 3 结论 优化后的香草醛反应条件为 ： 以体积分数为 3 5 的硫酸 作为酸性介质 ， 显色温度为2 0 2 5 ， 显色时间为2 0 m i n ， 无 水。本研究中 l O个甘蓝型油菜籽品种的菜籽种粕单宁含量 为 0 7 31 0 6 m sg ， 各品种间差异显著。种胚粕单宁含量 范围为 0 7 71 6 0 msg ， 平均为 1 1 2 m sg ； 种皮粕单宁含 量范围为 0 0 90 1 6 m sg ， 平均为 0 1 2 msg 。种胚粕单 宁含量明显高于种皮粕， 平均约为种皮粕的9 3 倍。 本研究结 表 3 不 同品种油菜籽的种皮粕和种胚粕 中单宁含量 油菜 品种 单宁含量 ( mg s ) 种皮粕 种胚粕 果可为我国油菜籽加工中的菜籽粕、 种皮粕和种胚粕的进一 步加工利用及油菜籽育种提供科学依据。 参 考 文献 1 G i l a n i G S ， C o c k e l l K A， S e p e h r E E ff e c t s o f a n t i n u t r i t i o n a l f a e t o m o n p r o t e i n d i g e s t i b i l i t y a n d a mi n o a c i d a v a i l a b i l i t y i n f o o d s J J o u r - h al o f AO A C I n t e rna t i o n al， 2 0 0 5 ， 8 8 ( 3 ) ： 9 6 7 9 8 7 2 Ma i l e r J RA n t i n u t r i t i o n a l c o mp o n e n t s ， fi b r e ， s i n a p i n e and g l u c o s i n o l a t e C o n t e n t ， i n A u s tr al i a n c a n o l a ( B r a s s w a n a p u s L ) m e a l J J o u rnal o f t h e A me r i c a n O i l C h e m i s S o c i e t y ， 2 0 0 8 ， 8 5( 1 O) ： 9 3 7 9 4 4 3 H u a n g J ， B h i n u V S ， L i X， e t a1P l e i o t r o p i c c h a n g e s i n A r a b i d o p s i s f 5h an d s c t mu t a n ts r e v e ale d b yl a r g e*s c ale g e n e e x p r e s s i o nan d me t a b o l i t e a n aly s i s J P l a n t a ， 2 0 0 9， 2 3 0 ( 5 )： 1 0 5 71 0 6 9 4 L a e k i K， D u v n j a kZ Ame t h od f o r t h e d e c r e a s e o f p h e n o l i c c o n t e n t i n c o mme r c i al c a n o l a me al u s i n g an e n z y me p r e p a r a tio n s e c r e t e d b y the w h i t erot f u n g u s T r a m e t e s v e r s i c o l o r J B i o t ech n o l o g y B i o e n g i - n e e r i n g ， 1 9 9 9， 6 2 ( 4 ) ： 4 2 2 4 3 3 5 K h a t t ab R， E s k i n M， Al i ani M， e t a1D e t e r m i n a ti o n o f s i n a p i c a c i d d e riv a t i v e s i n c a n o l a e x t r a c t s u s i n g h i s h - p e r f o rm an c e l i q ui d c h roma - t o g r a p h y J J o u r n al o f t h e A m e ri c an O i l C h e m i s t s S o c i e ty ， 2 0 1 0 ， 8 7( 2 )： 1 4 71 5 5 6 T h i y a m U， C l a u d i a P， J an U， e t a1D eo i l e d r a p e s e e d and p ro t e i n i s o l a t e： c h ara c t e riz a t i o n o f s i n a p i e a c i d d e r i v a t i v e s b y HPL C DAD a n d L C M S J E u r o p e an F o o d R e s e a r c h and T e c h n o l o g y ， 2 0 0 9 ， 2 2 9 ( 5 ) ： 8 2 58 3 1 7 T h i y a m U， S t O c k ma n n HA n t i o x i d a t i v e e ff ect o f t h e ma in s i n a p i c a c i d d e ri v a t i v e s f r o m r a p e s e e d a n d m u s t a r d o i l b yp r o d u c t s J E u rop e a n J o u rna l o f L i p i d S c i e n c e and T e c h n o l o g y ， 2 0 0 6， 1 0 8( 3) ： 2 3 9 2 4 8 8 N a c z k M， A m a r o w i e z R， P i n k D， e t a 1 I n s o l u b l e c o n d e n s e d t a n n i n s o f c a n o l a r a p e s e e d J J A g r i c F o o d C h e m ， 2 0 0 0 ， 4 8( 5 ) ： 1 7 5 8 1 7 6 2 9 刘琴 ， 吴梨， 石嘉怿， 等油菜籽多酚的分布及加工过程对菜 籽多酚含量的影响 J 食品科学， 2 0 1 0 ， 3 1 ( 1 9 ) ： 3 3 3 7 1 0 N a c z k M， A m a r o w i e z R， S u l l i v an A， e t a 1 C u r r e n t r e s e a r c h d e v e l o p me n t s o n p o l y p h e n o l i c s o f r a p e s s e d c ano l a ： a rev i e w J F o o d C h e m， 1 9 9 8， 6 2 ( 4) ： 4 8 9 5 0 2 ( 下转第 2 3 6页) 米 口 I 0 一 2 3 6一 江苏农业科学2 0 1 2年第4 0卷第 2期 王 虹霞，粱剑平 ，李雪虎 ， 等大青叶 中靛玉红 HP L C测定方法的建立 J 江 苏农业科 学， 2 0 1 2， 4 0 ( 2 ) ： 2 3 6 2 3 7 大青叶中靛玉红 H P L C测定方法的建立 王虹霞 ，梁剑平 ，李雪虎 ，陆锡宏 ，雷宏 东 ( 1 甘肃农业大学动物医学院， 甘肃兰州 7 3 0 0 7 0 ； 2 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所， 甘肃兰州 7 3 0 0 5 0 ； 3 中国科学院近代物理研究所， 甘肃兰州 7 3 0 0 0 0 ) 摘要： 为建立大青叶中靛玉红含量测定方法。用Wa t e r s A l l i a n c e 2 6 9 5高效液相色谱仪测定 ， 色谱柱 ： C 。 ( 4 6 m 1 5 0 m m) 柱， 流速： 1 m L m i n ， 柱温： 2 5， 进样量： 1 0 。结果表明， 在 1 5 2 4 0 I g mL内靛玉红含量与峰面积呈 良好的线性关系( r = 0 9 9 9 9 ) ； 靛玉红溶剂选用氯仿， 流动相选用甲醇 ： 水为 7 5： 2 5 ， 吸收波长选用 2 8 9 m m， 萃取溶 液p H值调至 1 0， 萃取溶剂选用氯仿 ， 此条件下 H P L C法测定大青叶中靛玉红， 精密度高( R S D：0 6 4 ， ) 加样回收率 为9 7 3 3 ， 重现性好( R S D= 0 5 4 ) 。 关键词：大青叶； 靛玉红； HP L C 中图分类号 ： R 2 8 4 文献标志码 ： A 文章编号： 1 0 0 21 3 0 2 ( 2 0 1 2) 0 2 0 2 3 6 02 大青叶为十字花科植物菘蓝的干燥叶，是一味常用 中 药， 具有清热解毒、 凉血利咽的功效， 用于温邪入营， 高热 神昏， 发斑发疹， 黄疸 ， 热痢 ， 痄腮 ， 喉痹， 丹毒， 痈肿等 。临 床上则用作治疗各种病毒性流行性感冒、 乙型脑炎、 单纯疱疹 病毒性角膜炎、 流行性腮腺炎 和病 毒性肝炎等传 染性疾 病 。大青叶 主要含 靛蓝、 靛 玉红等 吲哚类生理 活性成 分 ， 其中靛玉红具有抑菌、 解热、 抗炎等作用 j 。近年来利 用高效液相色谱法测定靛玉红含量的方法 已有报导， 但所采 用的样品提取方法均有提取不充分和测定含量偏低等问题 ， 我们拟以高效液相色谱法作为大青叶中靛玉红含量检测方 法， 探讨萃取溶液不同 p H值和不同萃取溶剂对大青叶中靛 玉红测定含量的影响， 建立 H P L C法测定大青叶中靛玉红的 有效方法 。 1 材料与方法 1 1 仪 器 A g i l e n t 紫外可见分光光度计， Wa t e r s A H i a n c e 2 6 9 5高效 液相色谱仪 ， K Q一 3 0 0 D E型数据超声波清洗器。 收稿 日期 ： 2 0 1 10 62 2 基 金项 目： 国家科技支撑计划( 编号 ： 2 0 0 6 B A D 3 1 11 0 5 ) 。 作者简介： 王虹霞( 1 9 8 6 一) ， 女， 甘肃会宁人， 硕士研究生， 讲师， 研究 方向为兽医药理学与毒理学。E m a i l ： w h x l 1 5 8 6 1 6 3 c o m 。 通信作者： 梁剑平， 男， 研究员， 博士生导师。Em ai l ： l i a n g j p 1 0 0 1 2药材 大青叶( 甘肃陇西生产) 。 1 3 试 剂 靛玉红， 由中国药品生物制品检定所提供， 批号为7 1 7 2 0 0 2 0 4 。甲醇为色谱纯 ， 氯仿、 盐酸、 氨水均为分析纯。 1 4方 法 ， 1 4 1 色谱条件采用 C 。 ( 4 6 m1 5 0 m m) 柱 ， 流速： 1 ml V m i n ， 柱温 2 5， 进样量 1 0 I L L， H P L C法测定。 2结果与分 析 2 1 靛 玉红溶剂的选择 分别以甲醇、 氯仿作为样品的溶剂 ， 进行液相色谱， 考察 其对色谱的影响， 以甲醇 ： 水( 7 5： 2 5， 体积比) 为流动相， 流 速 1 m L mi n ， 检测波长 2 8 9 n m。结果显示用氯仿作为样品的 溶剂， 靛玉红的峰旁边出现一个杂峰， 用甲醇作为样品的溶剂 则峰型正常 因此选用甲醇作为靛玉红的溶剂。 2 2 流动相的选择 取供试品溶液进样 ， 分别选用不同比例的甲醇、 水作为流 动相 ， 流速 1 mL m i n ， 检测波长2 8 9 n m， 结果表明当甲醇 ： 水 为