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文档简介
实验四 蛋白质的性质实验二 等电点测定和沉淀反应,一 实验目的,1、了解蛋白质的两性解离性质。 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 5、了解变性与沉淀的关系。,二 实验原理-等电点测定,蛋白质是两性电解质,即其分子中含有的 自由氨基和羧基均可解离,解离示意式如下:,二 实验原理-等电点测定,蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱 度影响。当溶液的PH达到一定数值时,蛋白质颗粒上 正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极 移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为此种蛋 白质的-等电点。,二 实验原理-等电点测定,各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨 基酸的数目不同,因而有各自的等电点。凡碱性氨基 酸含量较多的蛋白质,等电点就偏碱性,如组蛋白、 精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质, 等电点就偏酸性,人体体液中许多蛋白质的等电点在 pH5.0左右,所以在体液中以负离子形式存在。,所带电荷影响因素,内因:酸性、碱性氨基酸含量 外因:所在溶液环境的PH值,二 实验原理-等电点测定,不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时,蛋 白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测 定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度 最低时的溶液pH值。 本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪 蛋白的等电点。配制各种不同pH值的醋酸溶液,向各 个溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白的等电点。,二 实验原理-沉淀反应,蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体溶液, 保持稳定的因素有两点:蛋白质颗粒含有很多极性 基团,氨基,羧基,巯基等,亲水后形成水化层,使 蛋白颗粒互相隔开,不容易聚集;非等电点状态 时,蛋白颗粒带有相同电荷,互相排斥。因此,蛋白 质在水溶液中,虽分子量很大,但仍能维持稳定的溶 解状态。在一定的理化因素影响下,蛋白质颗粒可因 脱水和失去电荷而沉淀。,二 实验原理-沉淀反应,蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷),并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。所以,蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系。,三 实验操作-等电点测定,(一)酪蛋白等电点的测定 (1)取同样规格的试管4支,按下表顺序分别精确地 加入各试剂,然后混匀。,三 实验操作-等电点测定,(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,摇 匀。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、 3.5。静置10分钟后,观察其混浊度。最混浊的一管pH 即为
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