《母液的配制》PPT课件.ppt

理论知识：,培养基：是植物组织培养的物质基础，也是组织培养 能否成功的重要因素之一。 培养基的主要成分是植物生长发育所必需的各种营养元素。,成分：水分（主要成分） 无机盐类：大量元素、微量元素、铁盐 有机营养成分：维生素、肌醇、氨基酸等 植物生长调节剂：细胞分裂素类、 生长素类： IAA（吲哚乙酸）、 萘乙酸 （NAA）,培养基类型：MS培养基、B5培养基、N6培养基,MS培养基是由Marashige和Skoog为培养烟草组 织而设计的，是应用最为广泛的培养基。,根据培养材料的种类、有针对性地选择 适宜的培养基，没有任何一种培养基可适合 所有情况下的组织培养。,培养基制备是植物组织培养的基本工作。培养基含 有很多化学成分，而且数量多少不等，性质各有差异。,特别是微量元素、维生素等微量成分，因用量少，不仅 称量麻烦，还容易出现误差，所以配制母液是科学和方便 的方法。使用母液不但可以保证培养基个物质成分的准确 性及配制的方便性，且便于低温保藏，从而提高工作效率。,储备液（母液） 母液是将培养基成分扩大若干倍，一般为10倍、20倍、100倍甚至更高倍数的浓缩溶液。 按试剂种类和性质将其分别称量、分别溶解、分别配制、单独保存或几种混合保存，配制培养基时在按比列吸取即可。 配制母液及培养基时要选用蒸馏水，以免带入杂物质对培养材料产生不利影响。,实验一 MS培养基贮备液（母液）的配制,一、实验目的 熟悉MS培养基的组成，掌 握贮备液（母液）的配制方法。,二、实验原理： 配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。,三、实验器具与药品 电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、 容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、 玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。,四、母液配制流程图,按照扩大倍数称量,母液分装,确定培养基,溶 解,定 容,贴标签,保存于冰箱,按顺序混合,五、实验方法及步骤 1.大量元素母液的配制,即含N、P、K、Ca、Mg、S六种元素的混合溶液，一般配成浓度为10倍或20倍的母液。,注意： (1) 配制是各化合物应分别称量、分别溶解，经充分溶解后才能混合。 （2）某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。速度宜慢，边搅拌边混合。待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入容1000ml的量瓶中，再加水定容1000ml 。,（3）CaCl22H2O要在最后单独加入（因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀）。 （4）然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制 日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4冰箱保存备用。,2.微量元素母液的配制 将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO44H2O 22.3g， ZnSO47H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO42H2O 0.25g，CuSO45H2O 0.025g， CoCl26H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解再依次混合后用容量瓶定容至1000ml，后倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4冰箱保存备用。,2、微量元素母液的配制,3.铁盐母液的配制 Fe是用量较多的一种微量元素，因铁离子在水溶液中不稳定，易与氢氧根离子结合二发生沉淀，必须单独配制。只有其螯合物才容易被植物吸收和利用，因此需要单独配制成铁盐螯合物母液。 目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且不易发生沉淀。,3、MS铁盐母液的配制,铁盐母液的配制方法是： 用电子天平称取硫酸亚（FeSO4.7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA），分别用蒸馏水加热溶解，煮沸，使之全部溶解，溶解后混合后继续煮沸几分钟（约加热5min至溶液呈金黄色)，冷却后定容至500ml的容量瓶中，倒入棕色磨口试剂瓶中，经室温放置一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4冰箱保存备用。,如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。 则会容易形成沉淀。,4、有机母液的配制 MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基 酸等，由于用量小，也应配成母液。培养基中的有 机成分原则上应分别单独配制。,（1）维生素母液的配制 按培养基配方用量的100倍，用电子分析天平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解，然后混合定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中保存于4冰箱。,（2）肌醇母液的配制 按培养基配方用量的100倍，用电子分析天平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解，然后定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中保存于4冰箱。,5.植物生长调节剂的配制 常用的激素如生长素和细胞分裂素等配制成母液使用起来方便、准确。 配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶解，然后再定容。贴好标签，写明配制激素的浓度，存放于冰箱中。,激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种类和目的而定。 该培养基的生长素选择配制IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸），母液的配制的终浓度为1mg/ml： （）配制生长素类，称取NAA（萘乙酸）物质500mg，应先用少量1mol/LNaOH，然后加水约100ml后用1mol/L的HCI调PH值（当出现白色沉淀时表明HCL已经过量），然后分别用蒸馏水定容到500ml，即得质量浓度为1 mg/mL的母液。,（2）配制生长素类IAA（吲哚乙酸）物质，方法同上,注意： 所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有的母液都应保存在04冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。,作业：,