培养基的制备与灭菌.ppt

微生物学实验,前言,微生物实验技术和方法是微生物学建立和发展的基础，曾为整个生命科学技术的发展做出过积极而重要的贡献，随着分子生物学的诞生及技术的应用，各科学的交叉和渗透，极大地丰富了微生物实验技术的内容。在其它生命科学分支领域，不断发挥着它独特的作用。因此，“微生物学实验”是一门十分重要的基础课实验！,内容提要：,实验1、牛肉膏蛋白胨培养基，马丁培养基的制备； 实验2、干热灭菌的原理与应用范围，干热灭菌器的操作技术； 实验3、高压灭菌的原理与应用范围，高压灭 菌器的操作技术； 实验4、理解紫外线灭菌的原理和方法、灭菌范围； 讲述微孔滤膜过滤除菌，超高温除菌。,实验一：培养基的制备与灭菌, 实验目的 ； 培养基的制备 ； 3. 调节pH 4. 培养基配制的原则 ； 5. 消毒与灭菌 ； 6. 实验器材 ； 7. 本次实验任务安排； 8. 实验报告 。,实验报告要求：,1、实验题目； 2、实验目的； 3、实验材料； 4、实验原理； 5、实验内容（包括：实验方法、简单实验步 骤、实验过程）； 6、实验结果； 7 、实验结果分析； 8、实验结果讨论； 9、思考题。 实验报告要求字体工整、层次分明、独立完成！,一、实验目的：1、明确培养基配制原则，掌握配制方法； 2、了解灭菌的原理，学习掌握灭 菌器的使用方法。,尽管目前在细菌分类和鉴定中引用分子生物学的方法，但我们认识细菌仍主要依靠细菌的培养，如在一定的培养基中可观察细菌的细胞特征，菌落特征，生理作用，生化反应等，可见培养基的制备在细菌鉴定中是非常重要的。,二、培养基的制备：,培养基的组成因细菌、霉菌、放线菌、酵母这些微生物的种类而定，但主要包括以下几种成分：水分、氮源、碳源、无机盐、能源、生长因子。 本次实验制备 P17 牛肉膏蛋白胨培养基普通细菌培养基 成分： 牛肉膏 0.3；蛋白胨1；NaCl0.5；琼脂1.4%；水100mL；pH7.0-7.2。 P19 马丁氏培养基分离真菌； 成分： KH2PO4 0.1%；MgSO4.7H2O 0.05%；蛋白胨 0.5%；葡萄糖1%；琼脂1.4%；水100mL；pH自然。加1%的孟加拉红水溶液0.3mL.,1、水分：主要成分； 2、N源： （1）无机N:如氨态氮、硝态氮、尿素、氨水、硫氨、硝酸铵； （2）有机N:如氨基酸、蛋白质、蛋白胨、游离N（即气态氮）。 3、碳源：无机碳化物、有机物、有机大分子、天然的含炭物质等。 4、无机盐：如NaCl KH2PO4 等；微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn 5 、生长因子：有些细菌除上述成分外还需要添加 “生长因子”，他们通常是维生素类（如B族维生素）某些氨基酸或核酸等。,5、（根据需要）培养基按成分的不同分为：,（1）天然培养基：马铃薯、玉米粉、豆饼粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、糖蜜、麦芽汁、麦芽粉等； （2）合成培养基：如查氏培养基用于营养代谢、分类鉴定、选育；教材中的高氏培养基； （3） 半合成培养基：天然有机物加化学药品如PDA培养基、马丁培养基。,6培养基按物理状态的不同分为：,（1）固体培养基； （2）半固体培养基； （3） 液体培养基。 依据凝固剂的多少，是否添加而定。 添加凝固剂（琼脂、明胶、硅胶 （自养 微生物）,7培养基按用途可分为：,(1)基础培养基：细菌的普通培养基（牛肉膏蛋白胨） (2)营养培养基（加富）：苛求特殊营养，加血清、血液、组织液、酵母膏、生长因子、核酸、氨基酸等 (3)鉴别培养基：某代谢产物需特定化合物或试剂。（某种微生物在这种培养基上培养后某代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征。因此可以区别不同微生物）如测大肠菌群-伊红美兰培养基 (4)选择培养基：抑制不需要的，利于所需微生物生长。如马丁培养基选择真菌；pH偏酸（加乳酸），抑制细菌生长（如细菌喜中性或弱碱性）,三、 调节pH值：,霉菌、酵母偏酸pH4.5-5.5,配制时须把pH值调高些。细菌、放线菌中性或碱性。（自然即可）微生物在生长中有可耐受的pH值范围，琼脂在pH5以下有酸解现象，如不调pH固体培养基不凝固。 酸性培养基应注意琼脂单独灭菌后加入，防止酸解。,四、培养基配制的原则：,有机物总量不得超过底物的15%，盐类一般不超过1%。如果已知在发酵过程中多产酸或偏产碱，可适当加入酸性盐或碱性盐。 注意：有糖的培养基中一般不用加酸性盐，培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。,五、消毒与灭菌：,消毒（disinfection）：消灭病原菌和有害微生物的营养体。 灭菌（sterilization）：杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子。,1、灭菌可分为：,干热灭菌（蛋白质失水）：A)火焰烧灼如接种工具、试管口、瓶口；B) 利用电烤箱（160170）玻璃器皿 2小时 ； 湿热灭菌：A)高压蒸汽0.1MPa、121(15磅/1cm2) 1530min 培养基等。（蒸气穿透）B）常压蒸汽常用间歇灭菌 残留冷空气排除P22空气膨压水蒸气膨压，同一压力下含空气的水蒸汽温度低于蒸汽温度。 超高温杀菌（ultra high temperature sterilization,UHTS）:135150 几秒钟对牛乳、果汁、液态食品进行处理的一种工艺，即能杀死产品中的微生物又能保护产品的品质和营养价值。,2、过滤除菌：,如血清、抗生素、糖类溶液常用此方法除菌，细菌被截留在膜上。实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22m），但若要除掉病菌，孔径还要小。微孔膜不仅可以除菌还可以来测定液体和气体中的微生物。 举例说明,3、辐射灭菌：,（1）紫外线波长200300nm，具有杀菌作用，其中260nm杀菌力最强，容易被细胞中的核酸吸收，造成细胞损伤而达到杀菌目的。 杀菌机制诱导胸腺嘧啶二聚体形成和DNA的交联抑制DNA复制；O2 O,再使O2氧化成O3或使水氧化成H2O2。 （2）60Co（清华有） （3）r射线（计量院有） (4) 化学药品+UV复合使用,电离,4、化学药品灭菌（后面有实验证明）：,实验室常用的化学药品有2%煤酚皂溶液（来苏尔 ）、 0.25%新洁尔灭、0.1%升汞、3%5%甲醛溶液、75%酒精。,五、实验器材及本次试验任务安排：,三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、琼脂、移液管、试管架、试管帽、铁针、量筒 （1） 配制培养基: 每个同学配100ml牛肉膏蛋白胨培养基（固体）； 每两个同学配50ml马丁氏培养基（固体）。 （2）每人制备2支4.5ml的无菌水. （3） 每人包一包培养皿（一包为5套）和2支移液管。,六、实验报告 ：,1、P20 (1) (2) (7) 2、P27 (1) (4) 3、你配制的是什么培养基？ 下次实验为：实验室环境与人体表面微生物的检测