植物离体培养体系建立.ppt

,第三节 植物离体培养体系的建立,一、植物组织培养的阶段划分： 通常将组织培养过程划分为四个阶段 1、起始培养阶段（诱导阶段） 2、增殖培养阶段 3、生根培养阶段 4、驯化移栽,Stage 0 Selection hardened off,Steps of Micropropagation,二、外植体起始培养（无菌体系建立） 起始培养阶段是指无菌体系的诱导和建立过程。主要受外植体、培养基、环境条件等因素的影响。,（一）外植体的起始培养过程 1、 起始培养的一般过程： A、选取适宜的基因型（品种）； B、选取适宜的外植体；常用外植体有茎尖、茎段、节间、叶片、叶柄等。 C、流水冲洗外植体； D、外植体切割、分离及灭菌处理； E、外植体接种于诱导培养基。 F、环境条件控制促进外植体的生长。,2、接种外植体的生长过程： A 细胞分裂的启动； B 细胞增殖； C 组织和器官的形成。,（二）影响外植体起始培养的因素： 1、影响外植体起始的因素 A 外植体的遗传基础及生理影响 B 培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、生长调节物质、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多胺等。 C 培养条件：光照、温度、湿度,A 外植体 (1) 外植体种类及基因型 (2) 外植体供体植株和外植体的来源与生理状态 (3) 外植体大小 (4) 外植体的极性,外植体种类及基因型,单子叶植物不易诱导器官发生。 b. 木本植物较难诱导。 c. 存在基因型差异（如番茄29%63%） d. 开始生长季节取材容易诱导。,外植体状态：,外植体大小： 外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。 外植体极性： 当外植体以形态学的基部接种于培养基上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。,B、培养基 a 培养基类型: b 碳 源的影响:,C、植物生长调节物质 a 细胞分裂素和生长素类 b 赤霉素类 c 乙烯及其生物合成抑制剂 d 其他有机化合物,细胞分裂素和生长素：,a.部分植物单独使用细胞分裂素（CTK）可以形成 无根苗 b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。 c. 外源CTK与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。 d. 不同细胞分裂素对分化的作用效果不同 e. 苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性 （4PU、CPPU 、TDZ）,赤霉素类： 赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。 如马铃薯、甜菜、樱桃等。 乙烯及其生物合成抑制剂： 具有促进和抑制两方面的影响，但抑制作用多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑制剂可以促进芽的形成。 AgNO3 、CoCl、AVG,其他有机化合物： 腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。 椰子汁等物质也具有促进分化的功能。,3. 培养条件及其他因素 （1）光照 通常10005000 Lx 16 小时光照。 非洲菊1000 lx ，洋葱 16小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。 光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。,（2）温度 大部分植物要求25 oC，少数要求较低温度（15 20 oC）或较高的温度（30 oC ） 如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。 变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。,（3）湿度： 培养室相对湿度以7080为适宜，培养容器内要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿度过大。 （4）气体： 要注意保持培养容器内良好的通气性。维持适宜的氧气和二氧化碳浓度，防止有