肽类天然防腐剂产生菌—LactobacillusparacaseiHD1．7菌株培养基成分的研究.pdf

第 2期 ( 总 第 8 7 ) 2 0 0 7年 4月 中 国 林 副 特 产 For e s t By Pr o du c t a n d S pe c i a l i t y i n Ch i na No 2 ( GS NO 8 7 ) Apr 2 0 07 肽类天然防腐剂产生菌一L a c t o b a c i l l u s p a r a c a s e i HD1 7 菌株培养基成分的研究 么宏伟 ， 雷虹 ， 聂怀林。 ， 冯磊 ， 吴 洪军 ， 张磊 ， 谢晨 阳 ， 赵凤 臣 ( 1 黑龙江省林副特产研究所 ， 黑龙江 牡丹江 1 5 7 0 1 1 ； 2 黑龙江大学生命科学学院 ； 3 东宁县计量检定测试所) 摘 要 ： 对 小分子肽产生茵的发 酵培养基成分进行研 究。小分子肽 的生物合 成主要 受碳 源 、 氮 源、 磷 源 和金属 离子 的调控 。本文主要对各种不 同的有机 氮 源、 无机氮 源进行 了试验 ， 发 现 以 2 蛋 白胨作 为氮 源效果最好 ， 另外还对发酵培 养基 中氯化钠 的添加 量进行 了试验 ， 氯化纳 的添加量为 2 0 g L抑茵效果最 好。此 外， 添加复合维生素对 小分子肽的产生无显著促进作用。在对种子培养基 的优化 中， 以茵体 的生 长速率为标 准得到 最佳 组合 为葡萄糖 2 、 酵母 膏 1 、 牛 肉膏 1 、 C a 抖0 0 0 0 5 mo l L、 Mn 抖0 0 0 0 2 5 mo l L、 吐 温 0 5 ml L。 关键词 ： 乳酸茵 ； 小分子肽； 发 酵； 氮源 S t u d y o n Co mp o ne nt s i n Cu l t u r e M e di u m f o r Pr o d u c i n g S t r a i n La c t o b a c i l l u s pa r a c a s e i HD1 7 o f Pe p t i d e Bi 0 p r e s e r V a t i V e Y a o Ho n g w e i ， L e i Ho n g 2 ， Ni e Hu a i l i n 3 ， F e n g L e i ， Wu ao n g j u n ， Zh a ng Le i ， Xi e c h e ny a ng ， Zh a o F e n g c he n ( 1 I n s t i t u t e o f f o r e s t b y - p r o d u c t a n d s p e c i a l i t y r e s e a r c h i n He i l o n g j i ang p r o v i n c e ， He i l o n g j i ang ， Mu d a n j i ang ， 1 5 7 0 1 1 ； 2 T h e l i f e s c i e n c e c o l l e g e o f He i l o n g j i ang Un i v e r s i t y ； 3 Do n g n i n g me a s u r e m an d v e r i f i c a t i o n t est i n g s t a t i o n ) Ab s t r a c t ： The f e r me n t a t i o n me di u m o f s ma l l pe p t i d e s wa s s t u d i e d Sma l l p e p t i de s b i o s y n t h e s i s s e e ms t O be d e p e n d e n t o n c a r b o n s o u r c e r e gu l a t i o n， n i t r o g e n s o u r c e r e g ul a t i o n， me t a l h y d r o n i u m a n d p h o s p h a t e c o n t r o 1 Di f f e r e n t o r g a n i c a n d i n o r g a n i c n i t r o g e n r e s o u c e h a d be e n e x a mi n e d f o r t h e i r a b i l i t i e s t O p r o mo t e s ma l l p e p t i d e s b i o s y n t h e s i s 2 p e p t on e wa s t h e b e s t c a r b o h y d r a t e Th e c o n t e n t o f t he Na C1 i n t he f e r me n t a t i o n me d i u m wa s e x a mi n e d t o o ，t h e b e s t c o n t e n t o f i t i s 2 0 g L Ad d i t i o n a l l y ， t h e c o mp l e x v i t a mi n s wa s r e c o v e r e d h a s n o i mp r o v e me n t f o r t h e p r o du c t i o n o f s ma l l p e p t i d e s I n t he p r o c e s s o f o p t i mi z i n g t h e me d i u m o f s e e d，wi t h t he s t a n d a r d o f t he g r o wt h o f t he Lb p a r a c a s e i HD1 7，t h e b e s t c o mb i n a t i o n o f 2 g l u c o s e ，1 mi c r o z y me ，1 b e e f e x t r a c t ，0 0 0 0 5 mo l L C a 抖 ，0 0 0 0 2 5 mo l L Mn 2 ， 0 5 ml L t we e n we r e o b t a i n e d Ke y wo r d： l a c t i c a c i d b a c t e r i a ； s ma l l p e p t i d e ； f e r me n t a t i o n； n i t r o g e n s o u r c e 1 前 言 防腐剂( p r e s e r v a t i v e ) 是指为 防止食 品腐败 、 变质 ， 延长食 品保存 期 、 抑制 食 品 中微生 物 繁殖 的 物质n 。 大致 可分为化学 防腐 剂和天然 防腐剂 。 目前 ， 我 国及 其它发展 中国家仍 然普遍 使用化学 防腐剂 ， 这 对人 体 或多或少地会产生毒害作 用0 。随着人们生活水平 的 提高 ， 健康意识 不断 增强 ， 倡 导安全 、 营养 的绿 色消 费 观念 已深入人心 ， 因此 安全 高效的天 然食 品 防腐 剂取 代或部分取代化学 防腐剂 已成为一种趋势 3 。微生物 收稿 日期 ： 2 0 0 6 一 l 1 1 2 4 天然防腐剂 中研究最早 最透彻 的是乳 酸链球 菌素 ( N i s i n ) ， 也称乳链 菌肽 ， N i s i n在乳制 品、 酿造业 、 制药业等 工业 中的应 用 已充分 展示 了其 作 为生 物 防腐 剂 的作 用 。 据研 究发现 ， 未经灭菌 的 L - 乳 酸菌发 酵的酸菜 在 常温下保 质期长达 1 5年之久 ， 经实验 证 明发现其 可 能为一种在食品 中具有较好 防腐作 用 ， 而在 体 内可 被 分解 为氨基 酸的 高安 全性 的小 肽类 物 质极 具研 发 价 值 ， 对提 高我国的天然 防腐剂 的技术 含量 和推进我 国 维普资讯 2 0 0 7年 么宏伟等： 肽类天然防腐剂产生茵一L a c t o b a c i l l u s p a r a c a s e i HD 1 7菌株培养基成分的研究 第 2 期 的绿色 食 品 发 展 战 略 的发 展 都 具 有 十 分 重 要 的 意 义 。 本实验经过对小分 子肽产 生菌 的不 断筛选 ， 获得 的 L a c t o b a c i l l u s p a r a c a s e i HD 1 7 乳 酸 菌菌株 的 抑菌 效果 比较好 ， 适用 于发 酵条 件的优 化 ， 诱变 育种 ， 原生 质体融合等实 验 。为了使 L b p a r a c a s e i HD 1 7乳酸 菌菌株能够高产 ， 本实验进行 了发酵条件 优化的研究 。 本试验从有机 氮源 、 无机氮源和其他 氮源 等方面 出发 ， 对 L b p a r a c a s e i H D 1 7乳酸 菌菌株 的发酵培养 基成 分进行 了优化 ， 得到 了最佳发酵培养基 配方 ， 以及 通过 正交实验得到 了最佳 种子 培养基 配方 ， 为进 一步 的研 究及生产工作 奠定 良好 的基础 。 2 材料与方 法 2 1 材料 2 1 I 1 供试菌种及来源 L a c t o b a c i l l u s p a r a c a s e i H D 1 7菌株 ： 齐齐哈尔 丰 源食 品公司提供 的酸菜发酵液 中分离得到 。 枯草芽孢杆 菌( B a c i l l u s s u b t i l i s ) ： 黑龙 江省科 学 院应用微生物研究所提供 。 2 1 2 培养基 M 培养 基 、 牛 肉膏蛋 白胨 培养 基 、 素琼 脂 培 养基、 发 酵 培 养 基 ( 1 L ) ： 豆 芽 1 5 0 g ， 番 茄 2 0 0 g ， 白菜 2 0 0 g ， 蔗糖 2 0 g ， N a C 1 2 0 g ， 蛋 白胨 2 0 g ， 蒸 馏水 1 0 0 0 ml ( O 1 5 MP a ， 灭菌 2 0 mi n ) 。种 子培养基 ： 葡 萄糖 2 、 酵 母膏 1 、 牛 肉膏 1 、 C a 0 0 0 1 mo l L、 Mn 0 0 0 0 5 mo l L、 吐 温 0 5 ml L、 p H6 8 2 2 方 法 2 2 1 培养 方法 刮半环 r a c a s e i HD 1 7菌株 到 M6 培养 基 上 ， 恒 温 3 O 厌 氧 培养 4 8 h 。将 2环 p a r a c a s e i HD 1 7菌株刮 入 l ml 无 菌水 中， 混匀后 转 入 3 0 m1 种 子培养基 中， 恒 温 3 O 培养 2 4 h 。在 1 0 0 ml 发酵 培养 基 ， 以 3 的接 种量 接 人种 子 培养 基 ， 恒 温 3 O 培养 4 8 h。 2 2 2 分析方法 2 2 2 1 培养基 菌体浓度 的测定 。用 UV 7 7 5 B型分 光光度计在 5 2 0 n m处 测定 培养 4 8 h后 的培养 基 的光 密度 ， 即 OD值。 2 2 2 2培养基 p H值 的测定 。用 P HS - 2 5 型标 准酸 度计测定离 心 ( 4 0 0 0 r mi n ，l O mi n ) 后 的培养 基 的 p H 值 。 2 2 2 3 双层检测平 板法 。在无 菌平皿 中倒 入 2 0 ml 加热融化的素琼脂( 2 ) ， 待其充分冷却凝固后， 按一 定次序摆放整齐数个 已灭菌 的牛津杯 。将分装 于三角 瓶中的 3 0 ml 融化的指示菌培养基冷却至 5 o 左右， 加入稀释后 的指示 菌( 枯 草芽孢 杆 菌) 菌 悬液 2 ml ， 迅 速混合均匀 ， 倒 入平板 。冷却后 ， 用无 菌镊子取 出牛津 杯 。此平板 为小分子肽抑菌效果 的检测平板 。将培养 好的培养基 浓 缩 1 O倍 ， 用 移 液 枪 吸取 1 1 0 1 进 行 点 样 ， 最后将平板置 于 3 7 的培养箱 中培养 1 2 h 后 ， 测抑 菌 圈大小 。 2 2 3 发酵培养基成分优化 2 2 3 1 发 酵 培 养 基 成 分 优 化 结 果 的对 比。 p a r a c a s e i HD 1 7菌株 经平板 、 种子培养 基活 化、 扩大 培养后 ， 按 3 的量接入各优化后 的培养基 ， 3 O 静止 培养 4 8 h 后 ， 4 0 0 0 r mi n离 心 1 0 mi n后 测定 p H 值 ， 剩 余培养基 1 O倍 浓缩 后 ， 双层 检测 平板 法 检测 抑 菌效 果 。各优化 的培养基成分见表 2 1 。 表 2 1 发酵培养基优化成分表 单位 ： L 2 2 3 2 不 同有机 氮源对 小分子 肽产量 的影 响 。将 发酵培养基 中的蛋 白胨分别用 2 牛 肉膏 、 2 酵母 膏 等有 机氮源进行替换 ， 配制各培养基 ， 同时 以发酵 培养 基 和不加蛋 白胨 的发酵培养 基作对 照 。 p a r a c a s e i HD 1 7 菌株经 平板 、 种子培养基 活化 、 扩大培养后 ， 按 3 的量 接入各 培养 基 ， 3 O 静 止培养 4 8 h后 ， 4 0 0 0 r mi n 离 心 1 0 mi n后 测定 p H值 ， 剩 余培养基 1 O倍浓缩 后 ， 双层 检测平板法检测抑菌效果 。 2 2 3 3 不 同无机 氮源对 小分子肽 产量 的影 响。将 发酵培养基 中的蛋 白胨分别用 0 4 ( NH 。 ) 。 S O 。 及含 氮量相等 的 NH 。 C 1 、 N H。 N O 。 、 ( NH。 ) 。 C O 。 、 N a N O 。 、 尿 素等无机氮源替换 ， 配制各培养基 ， 同时以发酵培养基 和不加 蛋 白胨 的 发 酵 培 养 基 作 对 照 。 p a r a c a s e i HD 1 7菌株经平板 、 种子培养基活化 、 扩 大培养后 ， 按 3 的量接 入各 培养基 ， 3 O 静止 培养 4 8 h后 ， 4 0 0 0 r mi n离心 1 0 m i n 后 测定 p H 值 ， 剩余 培养基 1 O 倍 浓缩 后 ， 双层检测平板法检测抑菌效果 。 2 2 3 4 不 同其 他氮 源对小分 子肽产 量 的影 响 。将 发酵 培 养基 中的 蛋 白胨 分别 用 2 O 牛 肉 汤 、 5 O 豆 浆 、 等作为唯一 氮源进行 替换 ， 配制 各培养 基 ， 同时 以 发酵培养基 和不加 蛋 白胨 的发 酵培养 基作 对照 。 p a r a c a s e i HD 1 7菌株经平 板 、 种子 培养基 活化 、 扩 大 培养后 ， 按 3 的量 接入各 培养 基 ， 3 O 静 止 培养 4 8 h 后 ， 4 0 0 0 r m i n 离 心 1 0 mi n后测定 p H值 ， 剩余 培养 基 1 O倍浓缩后 ， 双层检测平板法 检测抑菌效果 。 2 2 3 5 氯化钠 不 同浓 度 的小 分子 肽产 量 的影 响 。 将发酵培养基 中的氯化钠成分 ， 按 1 0 g L、 2 0 g L 、 3 0 g L的梯度 ， 分别作 成培养基 ， L b p a r a c a s e i HD 1 7菌 株经平板 、 种子 培养 基活 化 、 扩 大培养 后 ， 按 3 的量 接入各培养基 ， 3 O 静止培养 4 8 h 后 ， 4 0 0 0 r mi n 离 心 1 0 m i n 后 测定 p H 值 ， 剩余 培养基 1 O 倍 浓缩后 ， 双层 检 测平板法 检测抑 菌效果 。 2 2 3 6 复合维生素不 同浓度对小 分子肽 产量 的影 5 维普资讯 2 0 0 7血 中 国 林 副 特 产 第 2期 响 。将 等量 的维 生 素 B l 、 B 2 、 、 B 、 B 。 、 B H混合 制 成 复合维生素 ， 分别 按 0 g g L ， 1 0 g g L， 2 0 g g L的量 ， 用 细菌滤器打入 以灭好 的发酵培 养基 中 ， 作为培养 基使 用。L 6 p a r a c a s e i HD1 7菌株 经平板 、 种 子培养 基 活 化 、 扩 大培养 后 ， 按 3 的量接 入各 培养 基 ， 3 O 静止 培养 4 8 h后 ， 4 0 0 0 r mi n离心 1 0 m i n后测定 p H 值 ， 剩 余培养基 1 O倍 浓缩 后 ， 双 层 检测 平 板法 检测 抑 菌效 果 。 2 2 4 种子培养基 成分 的优 化( 正交试验) 以种子培养基为 基础进行 培养 基成 分 的优 化 ， 设 置葡萄糖 、 酵母 膏和牛 肉膏 、 C a 。 和 Mn 、 吐 温 8 O四 个 因子 ， 每个因子设 计三个 水平 ， 因子 、 水平 设计 见表 2 - 2 ， 试验方案见表 2 3 。 表 2 - 2 种子培养基成分的优化正交试验的因子 与水平表 表 2 3 种子培养基成分 的优化正交试验的试验方案 葡 萄糖 吐 组合 1 1 1 1 1 组合 2 1 2 2 2 组合 3 1 3 3 3 组合 4 ， 2 1 2 3 组合 5 2 2 3 1 组合 6 2 3 1 2 组合 7 3 1 3 2 组合 8 3 2 1 3 组合 9 3 3 2 1 L 6 p a r a c a s e i H D 1 7 菌株经平板 、 种子培养基活 化 、 扩 大培 养后 ， 按 3 9 5 的量接 入各培 养基 ， 3 O 静止 培养 4 8 h后 ， 光 电比浊法 在 5 2 0 n m 波长下测定培养基 O D值、 4 0 0 0 r rai n 离心 1 0 rai n 后测定 p H值， 剩余培养 基 1 O 倍浓缩后 ， 双层检测平板法检测抑菌效果 。 3 结果与分析 3 1 发 酵培 养基各成分对 小分子肽产量的影响 3 1 1 发酵培养基成分优化结果的对 比 依据本 实验 室人员对发酵培养基组分做 正交实验 所得 的两种 优化结 果 ， 做进一 步 的优 化验证 。将 优化 出的两种发酵培养基 ， 各 自培养 L 6 p a r a c a s e i HD 1 7 菌株后 ， 测得 p H 值和抑菌效果见表 3 1 。 表 3 - 1 发酵培养基成分优化的对 比 表 中结果 可 看 出， 优化 一、 优化 二均 能促 进 L b p a r a c a s e i HD1 7菌株 产 小分 子 肽， 但 产 量有 明显 差 别 ， 优化一抑菌圈直径最大 ， 说 明优化一的配方较好 。 3 1 2 不同有机氮源对 小分子肽产量的影 响 将发酵培养基 中的蛋 白胨分别用 2 牛 肉膏、 2 酵母 膏等有机氮源进行替换 ， 配制各培养基 ， 同时 以发 酵培养基和不加 蛋 白胨 的发酵培养 基作对 照 ， 各培 养 基培养 L 6 r a c a s e i HD 1 7 菌株后 ， 测得 p H 值和抑 菌效果见表 3 2 。 表 3 - 2 有机氮源培养基 p H 值和抑 菌效果 图 3 一 l 有机氮源培养基 p H值和抑菌效果 图 由表 中结果可 看 出， 蛋 白胨 、 牛 肉膏 、 酵 母 膏等有 机 氮源源， 均 能促进 L 6 r a c a s e i HD 1 7菌株产小分 子肽 ， 但产 量有 明显 差别 ， 其 中 2 蛋 白胨 的抑菌 圈直 径最大 ， 说 明作为 氮源优 于其它有机氮 源。 3 1 3 不 同无机氮源对小分子肽产量 的影响 将 发 酵 培 养 基 中 的 蛋 白 胨 分 别 用0 4 ( NH ) 。 S O ,及 含 氮 量 相 等 的 NH C 1 、 NH N O 。 、 ( N H ) 。 C O 。 、 N a N O 。 、 尿素等 无机氮 源替换 ， 配制 各培 养基 ， 同时以发 酵培养 基和 不加蛋 白胨 的发酵培 养基 作对 照。各培养基培养 L 6 p a r a c a s e i HD 1 7菌株后 ， 测得 p H 值和抑菌效果见表 3 3 。 表 3 3 无机 氮源培养基 p H值和抑 菌效果 6 维普资讯 2 0 0 7年 么宏伟等： 肽类天然防腐剂产生茵一 l_ c t o b a c i l l u s p a r a c a s e i H D1 7菌株培养基成分的研究 第 2期 图 3 8 图 3 9 由表中结果 可看 出， N H 4 C l 、 N H 4 N Q 、 ( NI4 , ) 。 C 0 3 、 N a N Q 、 ( NH 4 ) 。 S 0 4 、 尿素、 蛋 白胨 等氮源， 均能促进 工 6 ? -a c a $ c i H D 1 7 菌株产小分子肽 ， 但产量有明显差别， 其 中 2 蛋 白胨的抑菌圈直径最大， 说明作为氮源优于其它 无机氮源。 3 1 4 不同其他氮源对小分 子肽产量 的影 响 将 发酵 培养 基 中的 蛋 白胨 分 别用 2 0 牛 肉汤 、 5 0 豆浆等其他氮源进行替换 ， 配制各培养基 ， 同时 以 发酵培养基和不加蛋 白胨 的发酵 培养基作 对照 ， 各 培 养基培养 p a ? - a c a s e i HD 1 7菌株后 ， 测得 p H值 和 抑菌效果见表 3 4 。 表 3 4 其他氮 源培养基 p H值和抑 菌效 果 表 中结果可看出 ， 牛肉汤 、 豆浆 、 蛋 白胨 等氮源 ， 均 能促进 L b p a r a c a s e i HD 1 7 菌株产小分子肽 ， 但产量 有明显差别 ， 其 中 2 蛋 白胨 的抑 菌圈直径 最大 ， 说 明 2 蛋 白胨 作为氮源优于其氮源 。 3 1 5 氯化钠不 同浓度的小分子肽产量的影 响 将 发酵培养基 中的氯化钠成分 ， 按 1 0 g L 、 2 0 g L 、 3 0 g L的梯度 ， 分别作成培养基 ， 同时以不加蛋 白胨 的 发 酵培 养 基 作 对 照 ， 各 培 养 基 培 养 L b p a r a c a s e i HD 1 7菌株后 ， 测得 p H值 和抑菌效果见表 3 - 5 。 表 3 - 5 不 同氯化钠浓度的发酵培 养基 p H 值和抑茵效 果 图3 一 l 1 不同氯化钠浓度的发酵培养基 p H值和押茵效果图 表中 结 果 可 看 出 ， 四 种 培 养 基 均 能 促 进 p a ? - a c a s e i HD 1 7菌株 产 小分 子肽 ， 但 产量 有 明显 差 别 ， 其 中 N a C 1 添加量为 2 0 g L的抑菌 圈直径最 大 ， 说 明 N a C 1 添加量为 2 0 g L作为培养基成分较好 。 3 1 6 复合维生素不同浓度对小分子肽产量的影响 将 等量 的维生 素 B 、 B 2 、 B 4 、 B 6 、 B 。 、 B H混合 制成 复合维生 素 ， 分 别按 1 0 t g L ， 2 0 “ g L的量 ， 用 细菌 滤 器打入 以灭好 的发酵培 养基 中， 作为培养 基使用 。同 时以发酵培养基作对 照 ， 各培养基 培养 p a ? - a c a s e i H D1 7菌株后 ， 测得 p H值和抑菌效果见表 3 - 6 。 表 3 - 6 不同复合维生素浓度 的发酵培养基 p H 值和抑 菌效果 表 中 结 果 可 看 出， 三 种 培 养 基 均 能 促 进 p a r a c a s e i H D 1 7菌株 产 小分 子肽 ， 但 产量 有 明显 差 别 ， 其 中发酵培养基的抑菌圈直径 最大 ， 说 明发 酵培养 基 中不 添加维生素较好 。 3 2 种子培养基成分的优化 ( 正交试验) 以种子培养基为基 础进行 培养基 成分 的优化 ， 设 置葡萄糖 、 酵 母膏和 牛肉膏、 C a 。 和 Mn 2 、 吐温 8 O四 个因子 ， 每个因子设计三个水平 ， 作正交试验 。各培养 7 维普资讯 2 0 0 7 生 中 国 林 副 特 产 第 2期 基培养 L b p a r a c a s e i H D 1 7菌 株后 ， 抑 菌 圈、 O D值 的直观分析见表 3 7 、 3 8 。 表 3 7 ( 3 ) 正交表 ： 种子 培养基成分优化 的 正 交试验结果的直观分析 从表 3 7 可 以看 出， C a 、 Mn 2 和酵母 膏 、 牛 肉膏 的极差 R分居第 一 、 二 位 ， 是 影响 培养 基抑 菌效 果 的 关键 因子 ， 其次是吐温 8 0 ， 葡萄糖 的影 响最小 。 根据各试验 因子 的总计数 或平均数 计算 ， 以小 分 子肽的产量可以看 出， 发 酵培养 基成分最 佳组合 为 葡 萄糖 2 、 酵 母 膏 0 5 、 牛 肉膏 0 5 、 C a 0 0 0 1 5 mo l L、 Mn 2 0 0 0 0 7 5 mo l L、 吐 温 0 5 ml L。 表 3 8 L 。 ( 3 ) 正交表 种子培养基成分优化的 正 交试验结果的直观分析 ( too l L ) 。 ( m l L 。 ) 。值 ( ) 牛 肉膏( ) T2 1 1 65 5 1 3 2 5 9 T3 1 0 08 1 1 1 2 3 6 1 2 3 2 3 1 3 1 2 1 1 6 5 7 1 0 2 9 7 9 0 0 4 3 8 8 6 3 4 3 2 3 O 01 0 8 8 5 1 2 3 3 l 2 2 3 1 1 O 0 8 1 1 1 5 4 8 9 3 2 9 3 3 6 0 3 84 9 3 1 1 O O 7 3 9 2 1 5 5 4 4 5 6 2 6 1 1 2 2 6 2 4 3 4 7 5 0 4 6 2 0 4 6 4 4 5 6 3 5 7 9 8 从表 3 8可以看 出， 酵母 膏、 牛 肉膏和 C a 、 Mn 。 的极差 R分居第 一 、 二 位 ， 是 影 响 培养基 抑菌 效果 的 关键因子 ， 其 次是葡 萄糖 ， 吐温的影 响最小 。 根据各试 验因子 的总计数 或平 均数计算 ， 以菌 体 的生长素率为标 准可 以看 出， 种子 培养基成 分最佳组 合为葡萄糖 2 9 5 、 酵母 膏 1 9 5 、 牛 肉膏 1 、 C a 0 0 0 0 5 mo l L、 M n z 0 0 0 0 2 5 mo l L、 吐 温 0 5 ml L 。 4 结论 经过对 r a c a s e i HD 1 7菌株发酵培 养基及 种子培养基各成 分的试验 ， 筛选 出一组最佳条件 ： 4 1 蛋 白胨 、 牛 肉膏 、 酵 母