维生素C和E混合饲喂对中华鳖幼鳖抗酸应激能力的影响.pdf

动物学研究2 0 0 4 ，F e b2 5 ( 1 ) ：3 7 4 2 Zoo l o g i c a l Re s e a r c h C N 5 3 - l O 4 O Q I S S N 0 2 5 4 - 5 8 5 3 维生素 C和 E混合饲喂对中华鳖幼鳖抗酸应激能力的影响 周显青- ， 一 ，牛翠娟 ，孙儒泳 ( I 北京师范大学 生命科学学院生物多样性与生态工程教育部重点实验室，北京 1 0 0 8 7 5 2 首都医科大学 实验动物科学 部 ，北京 1 0 0 0 5 4 ) 摘要 ：来自甲鱼养殖场的 6 o只中华鳖 ( P e l o d i s c u s s i n e n s i s )幼鳖驯养 3 周后，实验设 5组 ：对照组、处理 I、和组。各组设 2个平行，依次在饵料中混合添加维生素 c( V )和 E ( V E )为 0和0 、2 5 0和 5 0 、 2 5 0 0 和 5 0 、2 5 0 和 2 5 0 、2 5 0 0 和 2 5 0 m g k g ，喂食 4 周后，每组取半数幼鳖经酸应激处理 2 4 h 。取幼鳖血液， 用镜检法测定血细胞的吞噬率 ，透射比浊法测定血清溶菌活力、杀菌活力以及补体 c 3和 c 4含量。经酸应激 与未经酸应激处理相比：对照组血细胞吞噬率显著降低，而处理 I一组无显著变化；对照组和处理 I 组血清 溶菌活力和补体 c 3含量显著下降，而处理 组无显著变化；血清杀菌活力均有显著下降 ( 对照组、处理 I和组极显著，处理 组和组显著) ；对照组、处理 I和组血清补体 c 4显著下降，而处理 和V组无显 著变化。经酸应激处理，血细胞吞噬率、血清溶菌活力 、杀菌活力和补体 c 3含量 ，处理 I组的均显著 高于对照组 ，处理组显著高于其他 4组；血清杀菌活力，处理 组又高于处理 I和组；血清补体 c 4 ，对照 组显著低于处理 I 组 ，而处理 I 组间无显著相异。v 和 v E 混合饲喂对酸应激后中华鳖血细胞吞噬率 、 血清溶菌活力、杀菌活力和补体 c 3含量有显著协同促进作用，对血清补体 c 4的合成无协同作用。说明 V 和 v E 混合饲喂能显著增强中华鳖抗酸应激能力，缓解或部分缓解酸应激造成的不利影响。 关键词 ：维生素 C；维生素 E；酸应激；吞噬率； 中图分类号 ：Q 9 5 9 6 3 ；Q 9 5 5 文献标识码 ：A 溶菌活力；杀菌活力；补体 C 3 ；补体 C 4 文章编号 ：0 2 5 45 8 5 3 ( 2 0 0 4 ) 0 1 0 0 3 7 0 6 Ef f e c t s 0 f t he Co mb i n a t i o n Fe e d i ng 0 f Vi t a m i n C a n d E 0 n An t i a c i d S t r e s s Ab i l i t y i n J u v e n i l e S o f t s h e l l e d Tu r U e s( j ， e l o d i s c u s s i n e n s i s) Z H OU X ia n q i n g 一，N I U C u i j u a n ，S U N R u y o n g ( 1 Mi n i s t r y o fE d u c a t i o nK e y L a b o r a t o r y f o r B i o d i v e r s i t y S c i e n c e a n dE c o l o g i c a l E n g i n e e r i n g，I n s t i t u teofr if e S c ie n c e s ，B e ij i n gN o r m a l U n i v e r s i t y B e ij i r rg 1 0 0 8 7 5 ，C h i n a；2 D e p a r t m e n t o fLab o r a t o ry A n i m a l Scie nce ，C a p i t a l U n iver s i tyofMe d ic a l Scie nces，B e ij in g 1 0 0 0 5 4 ，C h i n a ) Ab s t r a c t T h e 6 0 j u v e n i l e s o f t s h e l l e d t u r t l e s( P e l o d i s c u s s i n e n s i s )o b t a i n e d f r o m a c o mm e r c i a l f a r m w e r e a c c l i m a t e d i n l a b o r a t o r y f o r t h r e e w e e k s T h e fi v e g r o u p s j u v e n i l e t u rt l e s o n e c o n t r o l g r o u p( C )a n d f o u r e x p e ri m e n t e d g r o u p s ( I， ，m a n d 1 V) w e r e f e d w i th V a n d V E s u p p l e m e n t a t i o n a t t h e d o s a g e s o f 0 a n d 0 ，2 5 0 a n d 5 0 ，2 5 0 0 a n d 5 0 ，2 5 0 a n d 2 5 0 ，2 5 0 0 a n d 2 5 0 mg k g d i e t s ，r e s p e c t i v e l y Th e r e we r e t wo r e p l i c a t e s p e r gro u pA f t e r f e e d i n g 4 w e e k s ，h a l f t u rtl e s p e r gro u p we r e t r e a t w i t h a c i d s tr e s s for 2 4 hT h e b l o o d i n t u rt l e s we re c o l l e c t e d，a n d the p e r c e n t a g e p h a g o c y t i c r a t e o f b l o o d c e l l wa s a n aly z e d b y c o u n t i n g u n d e r mi c r o s c o p e；s e r u m b a c t e r i o l yti c a c t i v i t y ，b a c t e ric i d al a c t i v i t y，l e v e l s o f c o m p l e m e n t C 3 a n d C 4 w e r e a n al y z e d b y t r a n s m i s s i o n c o l o r i m e t r i c m e t h o d The r e s u l t s s h o w e d ：t h e p h agocyt i c r a t e s o f b l o od c e l l i n s t r e s s e d C s i g n i fi c an t l y l o w e r e d c o mp a r e d wi th n o n s tr e s s e d C ， w h i l e the re w e r e n o s i gn i fi c an t c h a n g e s i n t h e o 山e r f o u r gro u p s o f I I v b e t we e n s t r e s s e d a n d n o n s t r e s s e d t u r t l e s ；s e rum b a c t e r i o l yti c a c t i v i t y and the l e v e l o f c o m p l e m e n t C 3 i n t h e s tr e s s e d C a n d I s i gni fi c a n t l y d e c l i n e d w h i l e t h e r e w e re n o s i gni fi c a n t c h a n g e s i n I II V c o m p are d with n o n s tr e s s gr o u p s S e rum b a c t e ri c i d al a c t i v i t y i n al l s t r e s s e d gro u p s l o w e r e d( t h e th r e e gro u p s o f C I a n d m t r e m e n d o u s l y s i gni fi c antl y l o w e r e d ，a n d I I a n d IV s i g n i fi c antl y l o w e r e d ) Th e l e v e l s o f c o m p l e m e n t C 4 i n the s t r e s s e d t h r e e gro u p s o f C， I a n d m w e r e s i gni fi c antl y d e c l i n e d ，w h i l e t h e o t h e r s t r e s s e d two gro u p s o f a n d h a d n o s i gni fi c a n t c h a n g e c o m p are d with n o n s t r e s s e d o n e s A m o n g o f th e a c i d s t r e s s e d j u v e n i l e t u r t l e s ，the p h agocyti c r a t e o f b l o o d c e ll ，s e rum b a c t e r i o l yti c a c t i v i t y ，b a c t e ri c i d al a c t i v i ty and l e v e l o f c o m p l e m e n t C 3 i n IIV w e re s i gni fi c a n tl y h i ghe r tha n tha t i n C，a n d I v w a s s i gni fi c a n t l y h i g h e r than th e o the r f o u r gro u p s Th e b a c t e ri c i d al a c t i v i ty i n I1 w a s h i ghe r than 收稿 13期 ：2 0 0 30 8 0 6；接受 13期 ：2 0 0 3 1 1 0 3 维普资讯 动物学研究 2 5卷 b o t h I a n d I I T h e l e v e l o f c o mp l e m e n t C 4 i n C w a s s i g n i fi c a n tl y l o w e r t h a n t h o s e i n l一1 V，w h i l e t h e r e w a n o s l g 。 n i fi c a n t d i f f e r e n c e哪 0 n g t h e f 0 u r g r o u p s o f I 一 T h e c o mb i n a t i o n o f V a n d VE h a d i n t e r a c t i o n e f f e c t s o n t h e p h a g o 。 c y t i c mt e o f b l o 0 d c e U， s e l m m b a c t e r i o l y t l c a c t i v i t y ， b a c t e r i c i d a l a c t i v i t y a n d t h e l e v e l o f c o mp l e me n t C 3 a f t e r a c i d s t r e s s ， w h i l e n 0 i n t e r a c t i o n e f lf e c t o f t h e t w o v i t a mi n s o n c o mp l e me n t C 4 w a s o b s e r v e dT h e r e s u l t s s u g g e s t e d t h a t t h e c o mb i n a t i o n o f V a n d VE s i g n i fi c a n t l y i mp mv e d ant i a c id s t r e s s a b i l i t y i n s o f t - s h e l l e d t u r t l e s ， a n d all e v i a t e d o r p a r t l y a l l e v i a t e t h e a d v e r s e e f f e c t s c a u s e d d u e t o a c i d s t r e s s Ke v wO r d s ： Vi t a mi n C； Vi mmi n E； A c i d s t r e s s ；P h a g o c y t i c r a t e ； B a c t e r i o l yti c a c t i v i t y； B a c t e ri c i d al a c t i v i ty； Co mp l e me n t C3；Co mp l e me n t C4 应激是机体对外界或内部的各种异常刺激所产 生的非特异性应答反应的总和，会对机体产生许多 不利影响。如转运应激能降低虹鳟 ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s )白细胞的吞噬率和血浆溶菌酶含量 ( J e n e y e t a l ，1 9 9 7 ) ；拥 挤胁 迫能 抑 制赤鲷 ( P a g r u s p a g r u s )非特异性免疫 ( R o fl l a n t e t a l ，1 9 9 7 ) 。因此 ， 如何防止应激和减轻应激的程度是该领域研究的热 点。2 0 0 0 m g k g 维生素 C( V )的添加能补偿农药 高丙体六六六 引起 的虹鳟 B淋巴细胞 的下 降 ( D u n i e r e t a l ，1 9 9 5 ) ，部分地缓解高温 ( P a r d u e e t a l ，1 9 8 5 )和冷暴露 ( G r o s s ，1 9 8 8 )导致 的鸡抗体 反应的下降。维生素E ( V E )能减轻剧烈训练对肌 细 胞 造 成 的 氧 化 损 伤( S a c h e c k & B l u m b e r g ， 2 0 0 1 ) 。V 和V E 合用对金头鲷 ( S p p a r a u r a t a L ) 白细胞的移动和吞噬作用有显著的协同促进作用 ( M u l e r o e t a l ，1 9 9 8 ) ，但对豚鼠肝脏 D N A的氧化损 伤无影响 ( C a d e n a s e t a l ，1 9 9 7 ) 。 水质污染和疾病蔓延等是中华鳖在人工养殖过 程中经常面临的问题 ，对其生长 和存活极为不利。 水质污染包括水质酸化、盐浓度变化以及富养化 等。为增强中华鳖在应激条件下对新环境的适应能 力和对疾病的抵抗力，我们曾经以水质 p H为应激 源 ，在饵料中添加 V E 研究其含量对酸应激 中华鳖 幼鳖血清补体 c 3 和 c 4的影响 ( Z h u 0 e t a l ，2 0 0 3 ) 。 其结果表明 V E 在一定剂量范围内能促进血清补体 c 3 和 c 4的合成。在此基础上试图探讨 v 和 v E 混 合添加对中华鳖抗应激能力的影响。以下是这一工 作的继续报道。 1 材料和方法 1 1 实验动物和驯化 实验用 中华鳖 ( P e l o d i s c u s s i n e n s i s )幼 鳖购 于 北京顺义县天竺甲鱼养殖场，买回后饲养于实验室 玻璃缸内。饲养和驯化条件同 z h 0 u e t a l( 2 0 0 3 ) 。 在此条件下驯养 3 周，使其适应实验室环境条件后 再开始实验。 1 2 实验设计 选用 6 0只健康的中华鳖幼鳖 ( 体重范 围为 1 0 3 4 2 1 4 g ) ，将其随意分成 5组。每组 1 2只分 设两个平行 ，分别置于 6 0 c m3 0 e m4 0 e m 的玻 璃缸中。由于幼鳖外观上难以区分雌雄，因此本实 验不分性别。5 组动物的饵料除了 V 。 和 V E的添加 量不同外 ，其 他营养 成分与 驯化 期间相 同。设 置 V 和 V E 添加量的依据是：在 V 和 V E 单独实验结 果的基础上，分别选择一个最低剂量和促进免疫的 剂量。因此 ，对照组和处理 I、 、组饵料 中 ， V 和V E 的添加量依 次为0 和0 、 2 5 0 和5 0 、 2 5 0 0和 5 0 、2 5 0和 2 5 0 、2 5 0 0和 2 5 0 mg k g 。实验 期问饵料存放在 一2 0 的冰箱中，每天喂食前 4 h 从冰箱内取出。其他实验条件的控制与驯化期间相 同。实验进行 4周后，每缸取一半幼鳖断头处死， 收集血液在 4 条件下离心制备血清。然后用盐酸 将玻璃缸中的水从 p H 7 9调至 p H 5 ，2 4 h后将另 一 半幼鳖处死做同样处理，血清存放在一2 0冰 箱中，以备下列指标测定。 1 3 血细胞吞噬作用的测定 按 Wa n g( 1 9 9 7 )的方法测定血细胞吞噬作用 。 将高效活性干酵母放在 2 的蔗糖水溶液 中，用盐 酸调节该溶液至 p H 34 。3 0 o C 水浴 2 h ，然后再 煮沸 0 5 h将酵母菌杀死。离心除去上清液 ，用无 菌生理盐水洗 2次 ，再除去上清液 ，最后将酵母菌 用无菌生理盐水配成浓度为 21 0 个 m L的悬液。 取 4 0 幼鳖血滴于塑料凹孔板中，然后加肝 素 2 0 、酵母菌悬液 2 0 ， 混匀，放入密封的湿 盒内，于 3 7培养箱中培养 3 0 m i n 。其间每隔 1 0 m in 取出凹孔板摇一次，培养结束后充分摇匀。然 后将幼鳖血涂片 ，甲醇 固定 3 m i n ，G i e m s a染色 1 0 m i n ，在显微镜下观察计数。计数 1 0 0个血细胞， 记下吞噬酵母菌的细胞数，并按下式计算血细胞吞 噬率 ： 维普资讯 1期 周显青等 ：维生素 c和 E混合 饲喂对 中华鳖幼鳖抗酸应激能力的影响 3 9 血细胞吞噬率 = l o o 1 4 血清溶菌活力的测定 以溶壁微球菌 ( Mi c r o c o c c u s l y s o l e i k t i c u s )冻 干 粉为底物 ，按照 H u l t m a r k e t a l( 1 9 8 0 )和 Wa n g e t a l( 1 9 9 4 )的方法进行。将 底物用 0 1 m o l L 、p H 6 4的磷酸钾盐缓冲液配成一定浓度的悬液 ( O D5 7 0 0 3 ) 。取该悬液 3 m L与 5 0 L待测血清于试管 中 混 匀 ，测 定 其 水 浴 前 在 5 7 0 n m 处 的光 密 度 值 ( A 0 ) ；然后将其置于 3 7水浴保温 3 0 m i n ，取 出 后立即置冰浴中 1 0 m i n以终止反应 ，测定其保温后 在 5 7 0 n m处的光密度值 ( A) 。溶菌活力 u l 按下式 计算 ： U 1 = ( A 0 一A) A 1 5 血清杀菌活力的测定 以副溶 血弧 菌 ( V i b r o p a r a h a e m o l y t i c u s )为 底 物，采用 Wa n g&L i ( 1 9 9 6 )的方法测定。将底物 用 0 1 mo l L 、p H 6 4的磷 酸钾盐缓冲液配成一定 浓度的菌悬液 ( O D =0 3 5 0 5 ) 。 取该悬液 3 m L与 5 0 L待测血清于试管 中混 匀，测其在 5 7 0 a m处的光密度值 ( A 0 ) ；然后置于 3 7水浴保温 3 0 mi n ，取出后立刻置于冰浴中 1 0 m i n以终 止反 应 ，测 其 在 5 7 0 a m处 的光 密度 值 ( A) 。杀菌活力按下式计算 ： U k = ( A 0 一A) A 1 6 血清补体 C 3和 C 4含量的测定 按照 Z h o u a t a l( 2 0 0 3 )描述 的方法进行测定 。 1 7 数据分析 实验所得数据采用 S t a t i s t i c a统计软件包做统计 分析。所有的结果均以平均值 标准差来表示。 2 结果 2 1 酸 应激后血细胞吞噬率、血清溶菌活力、血 清杀菌活力的变化 与未经酸应激的处理相 比，中华鳖对照组 血细 胞吞噬率显 著降低 ；处理 I组虽有下 降 的趋 势 ，但无显著差异 ；并随着 v 。 和 vE 剂量 的增加 ， 血细胞吞噬率下降的幅度越来越小 ( 图 1 A ) 。v 。、 和 V E 混合饲喂对经酸应激 的吞噬率有显著促进作用 ( T w o w a y A N O V A：Fl ,2 4 =4 9 3 ，P 0 0 5 ) ：处 理组均显著高于对照组 ，组显著高于其他 4组 ( 图 1 A) 。 与未经酸应激的处理相比，对照组和处理 I组 血清溶菌活力显著下降 ；而处理 组无显著差 异 ；随着 v 和 vE 剂量的增加 ，溶菌活力下降的幅 度逐渐减小 ( 图 l B ) 。V 。 和 V E 混合饲喂对经酸应 激的溶菌活力有显著促进作用 ( F 1 2 5 =4 5 9 ，P 0 0 5 ) ：经应激处理 的 I一组极显著高于对照组 ， 处理组也极显著高于其他 4组 ( 图 1 B) 。 与未经酸应激的处理相 比，对照组和处理组血 清杀菌活力均显著下降 ；对照组、处理 I组和 组 均有极显著差异；处理组和组有显著差异 ( 图 1 C ) 。V 。 和 v E混合饲喂对经酸应激的杀菌 活力有 显著促进作用 ( F1 = ， ) ：处理 I, 2 6 4 8 9 P 0 0 5 组杀菌活力显著高于对照组， 组高于 I 和 组 ，组高于其他 4组 ( 图 1 C ) 。 2 2 酸应激后血清补体 C 3和 C 4的变化 与未经酸应激 的处理相 比，中华鳖对照组和处 理 I 组血清补体 c 3 和c 4的含量显著下降； 处理 组虽有下降的趋势，但无显著变化 ( 图 l D和 1 E ) 。 饵料 中添加 V 。 和 V E对酸应激 的补体 c 3有显 著促进作用 ( Fl - 2 7 =4 9 3 ，P ) ：经酸应 激处理 的对 照组补体, 2 7 2 4 7 P 0 05 c 4 极显著低于处理 I组，而处理 I组间 无显著差异 ( 图 1 E) 。 3 讨论 3 1 V 和 V E合用的作 用差异可能与剂量 以及个 体的特异性有关 已往 V 。 和V E 合用对应激引起的机体损伤的作 用结果不尽相同。V 和 V E 合用不仅对病毒感染的 大 鼠心 肌 细 胞 具 有 保 护 作 用 和 协 同增 效 作 用 ( Z h a n g e t a l ，1 9 9 6 ) ，而且对鱼类 白细胞 的吞噬作 用有 协 同促进 作 用 ( Mu l e r o e t a l ，1 9 9 8 ) 。V E 6 5 I U k g 饲料和V 。1 m g k g 水单独或合用 均能促进热 应激条件下母鸡淋巴细胞的增殖 ，并且二者合用效 果最明显 ，但 二者之 间没有 明显 的协 同促进作用 ( P u t h p o n g s i r i p o r n e t a l ，2 0 0 1 ) 。低 剂量 的 v ( 2 0 0 m g k g b w) 和V E ( 2 0 0 m g k g b w) 单 独 或混 合 维普资讯 动物学研究 2 5卷 1 6 1 2 0 8 0 4 0 Co n t r o l CO ff t r o l Co n t r o l I I I I J IV I I I l I I I I I I I 组别 G r o u p i n g 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 3 5 0 -2 5 O 1 5 0 0 5 Co n t r o l I I I I I Co n t r o l I I I I I n 组别 G r o u p in g 口 未 经 酸 应 激u n t f e a t c d w | t h a c d _ s t r e s s 经 酸 应 激T r e a t e d w it h a c i d e s s 图 l 混合饲喂 v 和V 对酸应激中华鳖幼鳖非特异性免疫功能的的影响 ( 平均值 标准差) F i g 1 E f f e c t s o f t h e c o m b i n a t i o n o f v i t a m i n C a n d E o n n o n s p e c i fi c i m m u n e f u n c t i o n i n a c i d s t r e s s e d j u v e n i l e s o f t s h e l l e d t u r t l e s( XS D) A：血细胞吞噬率 ( P h a g o c y t i c r a t e o f b l o o d c e l 1 ) ；B：血清溶菌活力S e r u m b a c t e mi l yt i c a c t i v it y ) ；C：血 清杀菌活力 ( S e rum b a c t e r i c i d a l a c t i v i t y ) ；D：血清补体 c 3 含量 ( C o n t e n t o f s e rum c o m p l e m e n t C 3 ) ；E ：血清补体 c 4含量 ( C o n t e n t o f s e rum c o m p l e m e n t C 4 ) 。 C o n t r o l ：对照组 ， 指饲料中未添加 V 和 V E ；IIV：处理 I、和组，依次添加 v 。 和 v E 为 2 5 0 和 5 0 、2 5 0 0和5 0 、2 5 0和 2 5 0 、2 5 0 0和 2 5 0m s k s 。 柱上不同字母表示经酸应激各组间差异显著 ( D u n c a n多重 比较 ，P 0 0 5 ) ；P值表示同一剂量组酸 应激前和酸应激后 的比较 ( t 检 验) 。 C o n tr o l ：C o n t r o l g r o u p f e d w i t h V and V E s u p p l e me n t a t i o n a t t h e d o s a g e o f 0 and 0m g k g d i e t ； IIV：tr e a t ed I， ， and IV g r o u p f ed wi th V an d VE s u p p l e me n t ati o n a t the d o s age o f 2 5 0 a n d 5 0，2 5 0 0 a n d 5 0，2 5 0 and 2 5 0，2 5 0 0 and 2 5 0ms k S d i e ts，r e s p e c t i v e l y T h e v a l u es wi t h d iffe r e n t s u p e r s c r i p t 1 e t t e r a r e s i g n i fi c a n t d i ff e r e n t a mo n g d i ffe r e n t d o s e g r o u p s tr e ated wit h a c i d s tre s s( Du n c an s mu l t i p l e r an g e t e s t ，P0 0 5 ) ；P V ILI u e s a r e t h e c o mp a r ati v e r e s u l ts p e r d ose gr o u p s b e t w e e n n o n a c id s tr es s and a c i d s tr e s s( t t e s t ) ( V 。 1 0 0 + V E 1 0 0 m g k g b w )使用能明显减少有害化 学物质引起的大鼠骨髓细胞 的染色体畸变 ，但没有 发现二者之 间有交互作用；而中、高剂量 的 v ( 4 O O 、8 0 0 mg k g b w)和 V E ( 4 0 0 、8 0 0 mg k g b w)单独或混合( V 2 0 0+V E 2 0 0 ，V 4 0 0+V E 4 0 0 ra g k s b w)对其没 有影响 ( A n t u n e s& T a k a h a s h i ， 1 9 9 8 ) 。V 和 V E 单独或合用，都能使肝中脂质过 氧化物降低；但大剂量V 。 和v E 合用，反而不如单 独使用 V 。 的抗脂质过氧化的作用大 ( F e n g e t a l ， 1 9 9 3 ) 。用 1 5m g k g的 v E 分别与 3 3 、6 6 0和 1 3 2 0 0 m g k g 的V 。 ， 6 6 0 mg k g 的V 。 分 别 与 1 5、 1 5 0 和 1 5 0 0 m g k g 的V E 混合添加，对非应激的正常豚鼠 肝脏 D N A 的氧化 损 伤均 无 影 响 ( C a d e n a s e t a l ， 1 9 9 7 ) 。我们的结果表明，V 。 和 V E 特别是高剂量 的V 。 和 V E 合用，能缓解或部分缓解 ( 如杀菌活 力)酸应激导致的中华鳖免疫功能的下降，并且二 一 暑 n u 日 。 暑 卫 厶 暑 。 u n u 、I 一 一 寸 u苫 E I d E 。 u寸 u 蛙、 I J 上 L f 一 也 l 一 P 一 | l L 一 一 f 一 7 _ B 上 一 一 暴一 Q 豆 。 l甍3 o q d瓣罄怖 I ll 。 。 I甍1 0 l 。 蛊 艇粗艇 UJ 0 L 一 一 b 一 _ 工 一 L c 上 一 6 4 2 n 0 0 茸 I 8 P l鼍 R蝗翘 维普资讯 1期 周显青等 ：维生素 C和 E混合饲喂对中华 鳖幼鳖抗酸应激能力的影响 4 l 者间有 明显协同作用。上述这些实验结果差异 ，可 能与 v 和 v E 的添加量以及个体的特异性有关 ：机 体在特定条件下发挥其抗应激能力所需的 V 和 V E 可能有一个最佳剂量范围，过高或过低都会影响其 抗应激潜力的发挥 ；不同个体或同一个体在不同的 条件下促进其免疫和抗应激能力所需的 V 和 V E的 量也可能不 同。营养状态和营养物质能直接 ( 如触 发免疫细胞的活性 、改变免疫细胞间的相互作用 ) 或间接 ( 如改变 D N A合成的底物 、能量代谢、细 胞生理的完整性 、激素)地影响免疫系统 ，而免疫 状态的改变又反过来影响机体的营养状态。机体在 感染状态下对营养物质的吸收和利用的效率降低， 从而使代谢率、激素的分泌、肝脏中蛋白质和脂质 的合成以及细胞内酶 ( 如糖异生作用和脂肪合成需 的酶 )的分泌发生改变 ，同时也会使微量元素在体 内重新分 配 ( Ma i n o u s& D e i t c h ，1 9 9 4 ；K e u s c h& F a r t h i n g ，1 9 8 6 ) ，机体内的这些变化都将影响其抗 应激能力。 3 2 V 和 VE混用的可能机理 V 和 V E 混合饲喂对酸应激引起的中华鳖免疫 功能下降有协同保护作用，其原因可能是：v 的抗氧化作用 ，抑制了 自由基的产生 ，直接减少了 机体在应激状态下对 V 的消耗。机体在应激条件 下能产生大量自由基，而 V 和v E 单独和二者混合 饲喂均能降低受伤猪体内 O 一 的产生 ( N u n e s e t a l ， 1 9 9 7 ) 。人血浆中脂质过氧化物与 v 摄人量间呈 明 显负相关 ( H u a n g F u& X u ，1 9 9 2 ) 。人红细胞 内的 抗坏血酸盐能减少在氧化应激状态下红细胞膜上的 参考文献： An t u n e s L M ，Ta k a ha s h i C S 1 9 98 E ff e c t s o f h i g h d o s e s o f v i t a mi n s C a n d E a g a i n s t d o x o r u b i c i n i n d u c e d c h r o moso ma l d a ma g e i n W i s t a r r a t b o n e m r o w c e l l s l J Mu t a t R e s ，4 1 9 ( 1 3 ) ：1 3 71 4 3 Barc l a y L RC，L o c k e S J，Ma c Ne i l J M 1 9 8 3T h e a u t o x i d a t i o n 0 f u n s a t u r a t e d l i p i d s i n mi c e l l e s ： S y n e r s i s m o f i n h i b i t o r s v i t a mi n s C an d E l J J C a nJ C h e m 6 1 ：l 2 8 8一l 2 9 0 Br o wn MA 1 9 8 3 Re s i s t an c e o f h u man e r y t h r o c y t e s C O n t a i n i n g e l e v a t e d l e v e l s o f v i ta m i n E t o r a d i a t i o n i n d u c e d h e m o l y s i s J R e d at Re s ， 9 5： 3 0 3 C a d e n a s S ，B a I j a G，P o u l s e n H E，Loft S1 9 9 7 O x i d a t i v e D N A d a mage e s t i ma t ed b y o x o 8 d G i n th e l i v e r o f g u i n e a - p i g s s u p p l e me n t ed w i t h g r a d ed d i e t a r y d o s e s o f a s c o r b i c a c i d an d alp h a t o c o p h e r o l l J J C a r c i n o g e n e s i s ，1 8 ( 1 2) ：2 3 7 32 3 7 7 Du n i e r M ， Ve r g e t C， S i wi c k i AK， V e r l h a c V 1 9 9 5 E ffe c t o f L i n d ane e x p o s u r e o n r a i n b o w tr o u t( 0 研 m y k is s )i m mu n i t y ： I VP r e v e n ti o n o f n o n s p e c i fi c and s p e c i t i c i mm u n osu p p r ess i o n b y d i e t a r y v i t a m i n C ( a s c o r b a t e - 2 - p o l y p h osp h a t e ) J E c o t o x ic o 1 v E的丧失，而从红细胞中缓慢释放 出来的 V 能防 止血 浆 中 低 密 度 脂 蛋 白 中 V E的 氧 化( Ma y ， 1 9 9 8 ) 。V 通过恢复 V E的活性 ，提高 了体内 V E 的含量 。V 能恢 复微 团的不饱 和脂质 ( B a r c l a y e t a l ，1 9 8 3 )和卵磷脂脂 质体 ( N i k i e t a l ，1 9 8 5 )中 v 的活性。红细胞 内的抗坏血酸盐不仅能减少在 氧化应激下红细胞膜内的 V E的利用 ，而且能恢复 红细胞膜 中 V E的活性 ( Ma y ，1 9 9 8 ) 。这样 ，V 通 过对 v E的节省和更新 ，促进 V E 对机 体的免疫和 抗应激能力。V 能清除自由基、防止过氧化物 产生的能力，也直接降低了对 V 的利用。细胞膜 中 V 的 浓度 与 氧化 剂 诱 导 的溶 血 程 度呈 反 比 ( S h i ma s a k i &P r i v e t t ，1 9 7 5 ) 。体 内外实验均证 明， 增加到红 细胞膜上 的 V E能防止体 外 了射线 照射 ( B r o w n ，1 9 8 3 )和 细胞 内亲水 区 自由基 ( N i k i e t a l ，1 9 8 8 )引起 的红细胞溶血 ，而 V 是细胞亲水 区重要的抗氧化剂 ( F r e i e t a l ，1 9 8 9 ) 。 综上所述 ，由于 v 和 v E 都具有抗氧化特性 ， 二者合用都能直接减少对方 的消耗 ；加上 v 有更 新 V E 的能力，使二者在体内具有双向交互作用， 从而有效地增强 了中华鳖的抗应激能力。在本实验 条件下，2 5 0 0 m g k g 的V 。 和2 5 0 m g k g 的V E 混合 添加 ，中华鳖 的抗应激能力最强。根据这一结论 ， 建议在人工养殖过程中，在中华鳖的饵料中添加 2 5 0 0 mg k g的V 和 2 5 0 m g k g的V E ，可以增强中华 鳖对不利环境的耐受能力 ，也有利于疾病的预防和 控制 。 E n v i r o nS a f ，3 0 ( 3 ) ：2 5 9 2 6 8 F e n g B，L i u Y J ，G an Z W，Z h ang XY，Y ang L Q1 9 9 3 Effe c t s o f V E and V c o n glu t at h i o n e p e r o x i d a s e ，s u p e r o x i d e d i s mu t a s es a n d P e r o x i d e o f h e p a t i c and c o r d i s t i s s u e i n r a t s J J ，1 3 ( 3 ) ：1 7 5 1 7 6 冯彪，刘亚娟，甘振威，张辛艳 ， 杨丽 清 1 9 9 3 V n V 对大 鼠肝 、心组织 中谷胱 甘肽过氧 化物酶 超氧化物歧化酶 和过氧化脂质 的影 响 老年学杂志 ，1 3( 3 ) ： 1 7 51 7 6 F r e i B， E n g l an d L，Ame s B N 1 9 8 9 As c o r b a t e i s an o u t s t an d i n g a n t i o xi d ant i n h u m an b l o o d p l a s m a J P r o c N a t 1 A c a d S c i US A 8 6：6 3 7 76 3 81 Gr o s s W B 1 9 8 8 E f f e c t o f asc o r b i c a c i d o n an t i b o d y r esp o n s e o f s t r ess ed and u n s t r e s s ed c h i c k e n s l J j a n D s e a s e s3 2 ：4 8 3 48 5 H u and u MS ，X u XF 1 9 9 2 E ff e c t o f i n s e r t i o n c h e