临床常用免疫学检查.ppt

临床常用免疫学检查,简述免疫应答,天然免疫（natural immunity）：有生理屏障结构、血液及组织液中吞噬细胞和嗜酸粒细胞及自然杀伤细胞（NK）、天然存在的抗微生物分子。特点是天然存在，对外源微生物无特异区分，也不因外源微生物侵入而加强。,获得性免疫或特异性免疫 acquired /specific immunity,由接触外源性物质而诱生，并特异性针对不同大分子。特点是须有外源物质诱生，能对外源物质进行区分并有记忆，且随再次接触某一大分子物质而增强。特异性免疫由抗原（antigen）、淋巴细胞（lymphocyte）及抗体（antibody）和淋巴因子（cytokine）组成。免疫应答为特异性免疫所特有。,抗原（antigen Ag）：能刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物特异性结合的物质。异物性、分子大小、分子结构决定物质是否有抗原性及抗原性大小。 抗体（antibody Ab）：机体受抗原刺激后，血清和组织液中出现的一类与该抗原发生特异结合的物质。,免疫学检测常用方法,凝集反应 沉淀反应 溶血实验 放射免疫 荧光免疫 酶免疫 发光免疫 流式细胞仪,一、血清免疫球蛋白（Ig）测定 1. Ig减低 见于各类先天性和获得性体液免疫缺陷、联合免疫缺陷的病人及长期使用免疫抑制剂的患者。 2. Ig单克隆性增高 仅有某一种Ig增高而其他Ig不增高。主要见于免疫增殖性疾病。原发性巨球蛋白血症， IgM升高。多发性骨髓瘤：分为IgG、IgA、IgE、IgD型。 IgE升高见于过敏性皮炎、外源性哮喘及某些寄生虫感染。 3. Ig多克隆性增高 表现为IgG、IgA、IgM均增高。常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝癌、淋巴瘤以及系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。,二、血清补体的检查 （一）总补体溶血活性（CH50）测定 主要反映补体经典激活途径的活化程度。 1. CH50增高 见于各种急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤等。 2. CH50减低 补体成分大量消耗：血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎及同种异体移植排斥反应。 补体大量丢失：外伤、手术和大失血。 补体合成不足：肝硬化、慢性肝炎和重型肝炎。,（二）血清C3测定 无论经典途径还是旁路途径C3都参与，可反映出补体的活化情况。 C3增高 各种急性炎症、传染病早期、某些恶性肿瘤（以肝癌最明显）及排异反应等。 C3降低 肾炎的病因鉴别：链球菌感染肾炎血清C3减少，病毒性肾炎血清C3含量正常。 免疫性疾病进展期：SLE， 膜增殖性肾炎等。,T、B淋巴细胞检测,免疫细胞指一群参与免疫应答的细胞:第一类指在免疫应答过程中起核心作用的淋巴样细胞，如T、B淋巴细胞。第二类为抗原呈促进淋巴细胞作用的单核-巨噬细胞系统。第三类为以其它方式参与免疫应答的有关细胞。 族分化抗原（Cluster of differentiation): 细胞在发育分化过程中，表面抗原发生变化，CD抗原即指细胞变化过程中产生的抗原。目前临床CD4（TH）与CD8（TS）检测应用广泛。,T细胞检测（Thymus dependent lymphcyte 胸腺依赖淋巴细胞）,1 E玫瑰花试验 （Erythrocyte rosette formation test） 所得的百分率基本上代表了T细胞占淋巴细胞的百分率。数量升高见于自身免疫性疾病及器官移植排斥反应等，降低见于免疫缺陷性疾病等。 E玫瑰花试验只反映TC的数量，而不能体现其功能，又由于检测要求高，目前临床很少应用。,T淋巴细胞转化试验,抗原或非抗原刺激 （PHA 、 ConA 、PWA) T细胞 淋巴母细胞,转化率降低，见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下患者。 实验要求相当高，一般实验室很少作检测。,转化的淋巴细胞 *100% 转化和未转化淋巴细胞,转化率 =,2T细胞分化抗原测定 T细胞膜表面分子具有不同的抗原性，主要有CD2 、CD3、 CD4、 CD8 等。 （1）CD3分子:表达于所有成熟的T淋巴细胞表面，T细胞特有标志，反映T细胞总数的变化。 降低见于：免疫缺陷性疾病，如AIDS 升高见于：甲亢、慢性淋巴细胞性甲状腺炎等。 （2） CD4分子:辅助性T细胞（Th）表达。 降低见于：某些感染性疾病，如AIDS 升高见于：类风湿性关节炎活动期。,（3）CD8分子:是抑制、杀伤性T细胞的标志。 降低见于：类风湿关节炎、重症肌无力。 升高见于：传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染。 （4） CD4/ CD8比值:降低提示免疫抑制;升高提示亢进,免疫性疾病。 降低见于：类风湿关节炎、重症肌无力。 升高见于：传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染。,B淋巴细胞检测,EA玫瑰花试验 反映外周血B淋巴细胞的百分率。,（二）B细胞免疫检测 B细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）测定 SmIg是B细胞的特征表面标志。早期的前B细胞表达IgM，成熟的B细胞表面IgD、IgM或IgA、IgE等。 主要用于检测外周血B淋巴细胞的百分率。 SmIg阳性细胞降低，见于体液免疫缺陷性疾病； SmIg阳性细胞增加，见于淋巴白血病、多毛白血病、巨球蛋白血症等。,2B细胞分化抗原测定 CD19 、CD20 、CD22。 其中CD19是最重要的B细胞标记分子。升高见于B细胞系统的恶性肿瘤；CD19细胞降低见于体液免疫缺陷病及使用化疗或免疫抑制剂后。,四、感染免疫检测 （一）链球菌溶血素“O”（ASO）测定 抗链球菌溶血素“O”是机体感染溶血性链球菌后产生的相应抗体，升高提示曾有溶血性链球菌感染，不一定是近期感染的指标。 正常人ASO500U。 ASO升高常见于A群溶血性链球菌感染及感染后免疫反应所致的疾病，如感染性心内膜炎及扁桃体炎，风湿热、链球菌感染后急性肾小球肾炎等。,（二）伤寒与副伤寒的血清学检查 肥达（Widal）反应 检测伤寒抗体。参考值：“O”凝集价1：80；鞭毛抗原“H”凝集价1：160；副伤寒杆菌甲、乙、丙的鞭毛抗原“A”、“B”、“C”凝集价1：80。 在病程中逐周复查，若抗体效价依此递增或恢复期较急性期升高4倍或以上，则有诊断意义。“O”、“H”均升高则伤寒感染的可能性大；若“O”升高而“H”不升高，则可能是伤寒类感染的早期；若“H”升高而“O”不升高，则有可能是预防接种或是非特异性的“回忆反应”。 酶联免疫吸附试验（ELISA） 特异性IgM抗体，伤寒早期诊断。vi抗体伤寒带菌者。 胶乳凝集试验（LAT） 检测伤寒沙门菌“i”、“H”、“O”抗原，早期诊断。,（三）结核杆菌抗体（TB-Ab）和DNA测定 结核杆菌抗体阳性，表示有结核分枝菌感染，其灵敏度超过90%、特异性超85%，比传统的痰涂片和细菌培养方法简便、快捷、灵敏。聚合酶链反应（PCR）检测DNA特异性更强、灵敏度更高，但应防止污染引起的假阳性。 （四）幽门螺杆菌抗体（HP-Ab）测定 HP-Ab阳性见于胃、十二指肠幽门螺杆菌感染，如胃炎、消化性溃疡等，其敏感性大于90%，特异性为85%。HP-Ab阳性也可见于胃癌和胃黏膜相关性淋巴样组织淋巴瘤。,（五）汉坦病毒（HTV）抗体IgM测定 抗-IgM是感染HTV后早期出现于患者血清中的一种特异性抗体。有助于诊断肾综合征出血热。 （六）流行性乙型脑炎病毒抗体IgM测定 流行性乙型脑炎病毒抗体IgM测定，有助于乙型脑炎的早期诊断。,（七）寄生虫感染免疫检测 弓形虫抗体和DNA测定 IgM型弓形虫抗体升高是近期感染的指标，IgG型弓形虫抗体增高是既往感染的指标。DNA阳性对弓形虫病的诊断意义更大。 日本血吸虫抗体测定 机体感染日本血吸虫后可产生特异性抗体。在血清中检出特异性IgM、IgG和IgE抗体，有利于临床诊断和流行病学的调查。,3.囊虫抗体测定 囊虫是一种人和猪共患的寄生虫病。感染囊虫后，可在血清和脑脊液中出现特异gG抗体，其特异性和敏感性较高。 4.疟原虫抗体和抗原测定 疟原虫抗体阳性提示近期有疟原虫感染，抗原检测或血液涂片找原虫即可确诊。,（八）梅毒血清学检查 非特异性抗体（反应素）检测为定性试验，梅毒的初筛，非特异性。 特异性抗体检测有助于梅毒的确诊。 （九）艾滋病病毒抗体及RNA测定 感染HIV数周到半年后，患者体内可出现抗-HIV抗体。检测抗-HIV抗体有助于艾滋病的诊断。 初筛试验敏感性高但特异性差。 确诊试验有利于确诊和早期诊断。,五、肿瘤标志物检测 肿瘤标志物是指能够区分肿瘤或非肿瘤的化学物质，包括肿瘤抗原、激素、受体、酶与同工酶、癌基因及其产物等百余种。 血清甲胎蛋白（AFP）测定 癌胚抗原（CEA）测定 癌抗原125（CA125）测定 癌抗原15-3（CA15-3）测定 糖类抗原CA199测定 组织多肽抗原（TPA）测定 前列腺特异抗原（PSA）测定,（一）血清甲胎蛋白（AFP）测定 参考值：血清25ug/L（25ng/ml ） 临床意义 1.AFP是目前诊断肝细胞癌最特异的标志物，高于300ug/L 诊断阈值。 2.病毒性肝炎、肝硬化时，随着受损肝细胞的修复再生，幼稚化的肝细胞重新具有产生AFP的能力，但常低于200ug/L。 3.妊娠及其他亦可高。,（二）癌胚抗原（CEA）测定 恶性肿癌患者的血清中可发现CEA含量异常升高。常用于诊断消化器官的癌症（结肠癌、胃癌、胰腺癌、转移性肝癌等）。 （三）癌抗原125（CA125）测定 CA125为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌等。 （四）癌抗原15-3（CA15-3）测定 CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，对乳腺癌的诊断及术后随访临测有一定的价值。,糖类抗原CA199测定,参考值 37U/ml 临床意义：对胰腺癌有较高的敏感度及特异性。,（五）组织多肽抗原（TPA）测定 TPA是一种非特异性肿瘤标志物，血清中TPA增高主要用于辅助诊断迅速增殖的恶性肿瘤，且在恶性肿瘤的疗效观察方面敏感性较高。 （六）前列腺特异抗原（PSA）测定 PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶，在前列腺癌时，前列腺腺管破坏导致血清PSA水平明显升高。,六、自身抗体检查 类风湿因子（RF） 抗核抗体（ANA） 抗双链DNA抗体 抗RNP抗体 抗Sm抗体 狼疮细胞（LE细胞）检查（page289） 抗线粒体抗体（AMA） 抗甲状腺球蛋白抗体（ATG） 抗甲状腺微粒体抗体（ATM） 抗平滑肌抗体（ASMA）,（一）类风湿因子（RF）检查 RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中。 1. 类风湿性关节炎阳性且滴度较高。 2.其他：SLE、硬皮病、皮肌炎，感染性疾病，正常老年人。,（二）抗核抗体（ANA）的检查 抗核抗体（ANA）是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，无器官及种族特异性。阳性主要见于系统性红斑狼疮（SLE）。 抗双链DNA抗体是SLE的活动性标志。 可提取性核抗原（ENA）抗体谱，主要包括抗RNP抗体和抗Sm抗体，用以诊断自身免疫性疾病。抗Sm抗体为SLE所特有；抗RNP抗体阳性主要见于混合性结缔组织病。 狼疮细胞（LE细胞）检查阳性，主要见于未经治疗的SLE病人。,（三）抗组织和抗细胞浆抗体检测 抗线粒体抗体（AMA）是一组以线粒体为靶抗原的自身抗体，主要是IgG。阳性主要见于原发性胆汁性肝硬化。 抗甲状腺球蛋白抗体（ATG）是诊断甲状腺自身免疫性疾病的一个特异性指标。 抗甲状腺微粒体抗体（ATM）阳性主要见于桥本甲状腺炎。 抗平滑肌抗体（ASMA）阳性主要见于自身免疫性肝炎（如狼疮性肝炎）、原发性胆汁性肝硬化、急性病毒性肝炎等。,七、循环免疫复合物（CIC）测定 免疫复合物（IC）是抗原抗体相结合的产物。测定CIC对免疫复合物疾病的诊断、疗效观察、预后判断，均有重要意义。 CIC为非特异性诊断指标，阳性可见于自身免疫性疾病、急性链球菌感染手肾炎、乙型病毒性肝炎、感染性心内膜炎、麻风等。,八、C反应蛋白（CRP）测定 C反应蛋白是肝脏合成的一种能与肺炎链球菌胞壁上的C多糖体起沉淀反应的急性时相蛋白质。 早期诊断某些疾病：各种急性化脓性炎症、菌血症、组织坏死、恶性肿瘤、结缔组织疾病 鉴别功能性疾患与器质性疾患 风湿热等疾病的动态观察 区分细菌感染与病毒感染 CRP与血沉,复习思考题,填充题 人体血清中免疫球蛋白含量最高的为（ ）免疫球蛋白。 过敏性疾病常发现（ ）免疫球蛋白增高。 M蛋白是由（ ）细胞分化而