TBIGRA解析.ppt

TB-IGRAs 在 结核性疾病中的评估,武汉市医疗救治中心,WHO发布2016年全球结核病报告,2015年世界范围内估计有1040万新发病例； 其中男性590万（56%），女性350万（34%），儿童100万（34%）； 新发病例中有120万（11%）HIV患者。 感染人数：总人口的1/3，约为20亿；,结核病人的全球分布,与结核病相关疾病,糖尿病中肺结核的发病率是非糖尿病患者的2.27-4.26倍； 移植患者的结核病发病率是普通人群的 20 - 74 倍； 风湿性疾病患者和接受TNF blocker治疗会增高结核病发病率； 菌阴及其他结核病患者是目前临床诊断的难点。,结核病诊断的冰山现象,活动性病人,感染人群,结核的传统诊断手段,结核菌素皮试：受卡介苗接种的干扰，特异性差，肺结核病人中存在10-25%的假阴性；受机体免疫状态影响较大；结果判读有一定主观性； 抗原抗体检测：敏感性（0-100%）、特异性（47-100%）变异较大；抗原特异性不强； 细菌学检查：周期较长（2-8周）；敏感性低（30-50%）；阳性结果还需要做菌型鉴定；需要获得带菌的样本； 病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。,2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）发出正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结 核和肺外结核的诊断。,如何选择结核实验诊断方法,WHO推荐的结核新诊断技术,WHO推荐的结核新诊断技术,TB-IGRAs,-干扰素体外释放（ Interferon Gamma Release Assay or TB-IGRAs）定量试验 是干扰素释放酶联免疫法的简称； 主要是通过检测特异性IFN-的释放来辅助诊断结核病或判定机体是否感染结核分枝杆菌的一种体外诊断方法。 TB-IGRAs包括基于全血培养的 ELISA法和基于外周血单个核细胞培养的酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)。,基本原理,结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T淋巴细胞； 当机体再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放Y-干扰素； 通过对该细胞因子的定量检测，可以对疾病的感染状况进行判断。,基本原理,采集受检对象全血后，加入结核分枝杆菌特有的T细胞抗原刺激； 于37体外培养1624小时后检测T细胞产生的IFN-的情况； 如果T细胞由于结核分枝杆菌特异抗原的刺激而提高了IFN-的产量，并到达一定的阀值，则认为该个体感染了结核分枝杆菌。,基本原理,BCG在传代过程中删除了ESAT-6等基因，也就意味着，用它作诊断试剂，可以排除卡介苗接种的干扰； 选取存在于结核杆菌，但在卡介苗和大多数环境分枝杆菌中普遍缺失的RD1区编码的ESAT-6和CFP-10作为结核杆菌特异性抗原； 与新鲜采取的肝素钠抗凝全血或者PBMC(外周血单个核细胞)充分混合孵育； 应用酶联免疫法或者免疫斑点法（T细胞免疫斑点试验）检测特异性-干扰素的释放。,T细胞免疫斑点试验,实际效果图,T细胞免疫斑点试验,T细胞免疫斑点试验,空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效 T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs,临床意义,T-SPOT.TB高灵敏度,临床意义,T-SPOT.TB高特异性 ESAT-6CFP 10均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域； 仅结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）存在RD1区基因； 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因； T-SPOT.TB不会受卡介苗接种影响。,T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。 基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。,TB-IGRA应用现状,IGRA技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法； 美国和日本已经将该技术写入该国用于结核防治的指导原则中； 包括结核病辅助诊断; 高危人群筛查;公共卫生突发事件;体检等(含不孕不育人群); 美国CDC指南建议，在当前应用结核菌素试验PPD的所有情况下均可采用IGRA替代。,国家结核病参比实验室推荐建议, 干扰素释放试验可以用于: 结核菌潜伏感染筛查,儿童和老年人以及免疫力低下者结核病的辅助诊断（参考）。 理由： 在我国获得注册证书，国家对一些特殊诊断试剂的规定； 国内外研究显示其敏感性和（特异性）较好； 数据显示在我国具有可行性,T-SPOT临床应用,高会霞等，五种结核病实验室检测方法对结核病诊断价值的效果评价.实用检验医师杂志，2012，