课件：临床常用免疫学检查.ppt

临床常用免疫学检查,温州医科大学附属一院实验诊断中心,石 亮,概述：,免疫学(Immunology)是研究免疫系统的结构与功能，并通过对其在免疫应答过程中所产生的免疫保护与免疫损伤机制的研究，探讨有效的免疫措施，实现以防病、治病为目的的一门现代医学学科。,临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测。,一、免疫球蛋白（Ig）的检测,包括：IgG、A、M、D、E,Ig的产生、结构与功能 Ig通常是指一组具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，由浆细胞合成和分泌，有特异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合形成免疫复合物后才能启动效应功能。,（一）IgG,含量：7.0-16.6g/L,占70-80(含量最多） 特点：再次免疫应答抗体、具抗菌、抗病毒活性，能通过胎盘 意义：感染（病毒、细菌）多克隆 免疫增殖病、MM单克隆 减低：免疫缺陷、重链病、轻链病、肾病,（二）IgA,含量：0.7-3.5g/L，占10-15 特点：分泌型（SIgA)，局部粘膜抗感染功能 可存在于各种分泌物中（初乳） 血清型（为单体，免疫作用弱） 意义：IgA型MM，SLE，类风关等 反复呼吸道感染，非IgA免疫增殖病,(三）IgM,含量：0.5-2.6g/L,占5-10 特点：为五聚体，分子量最大的Ig 如天然凝集素抗A、抗B 意义：早期抗体，出现早，消失快。,（四）IgD、IgE,IgD:含量低、作用不很明确 测定较难，ELISA法测定 IgE：含量最少，ELISA法测定为0.1-0.9mg/L 与变态反应、寄生虫病、皮肤过敏有关,二、补体（Complement，C）的测定,补体是存在血清及组织液中的一组具有酶原活性的糖蛋白，可溶解细胞，灭活病原体，清除免疫复合物 1.总补体活性CH50测定(complement hemolysis 50%） 溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞 补体 溶血 溶血程度与补体正相关，为S形曲线。 正常参考值：50-100kU/L 意义：减低常见于各种免疫复合物性疾病,溶血程度与补体含量的关系,2. 补体C3与C4测定,补体系统有C1、2、C9及其它成分组成 C3含量最高，是传统和旁路途径激活的关键 含量: C3:0.8-1.5g/L C4:0.2-0.6g/L 补体测定的意义：炎症、肿瘤等 ：肾炎、自身免疫病等,三、细胞免疫的测定,T细胞亚群的检测 1.E玫瑰花结形成试验（ERFT)：检测T细胞数量 原理：T细胞表面具SRBC受体 正常 58-72左右 意义： 见于自身免疫性疾病及器官移植排斥反应等 见于免疫缺陷性疾病等。 2.淋巴细胞转化试验（LCT):检测T细胞的生物学功能 原理：淋T PHA 淋母细胞 意义：转化率降低，见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下患者。,淋巴细胞亚群的分化抗原测定 (cluster differentiation CD) T细胞： CD3-总T标志 CD4-TH标志(help T cell) CD8-Ts标志(suppressor T cell) CD4/ CD8: TH / Ts，降低常见于AIDS。 B细胞： CD19、CD20、CD22等,三、细胞免疫的测定,细胞因子(Cytokine,CK)测定 活化的免疫细胞分泌产生的免疫调节性小分子多肽。 1.白介素2（IL-2)和IL-2R：白细胞介素（IL）多种细胞产生的能介导免疫细胞间的相互作用。 IL-2是由活化T细胞产生，具有多向性作用的细胞因子 2.肿瘤坏死因子（TNF)：引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用。 3.干扰素（IFN)：抗病毒、抗肿瘤作用,三、细胞免疫的测定,四、肿瘤标志物检测,肿瘤标志物（tumor marker)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。包括蛋白质类、糖类和酶类肿瘤标志物。 肿瘤标志物检测的意义是：高危人群的筛查、辅助诊断、观察疗效和肿瘤复发检测以及判断预后。,肿瘤标志物介绍以下6种 甲胎蛋白（AFP） 癌胚抗原（CEA） 前列腺特异抗原（PSA） 糖链抗原199 （ CA199） 癌抗原125（CA125） 癌抗原15-3（CA15-3）,1. 甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP） AFP是胎儿发育早期合成的一种糖蛋白(1球蛋白)，分子量70kD，胎儿出生后不久即逐渐消失。 参考值：血清25g/L,(一)、蛋白质类肿瘤标志物检测：,AFP 临床意义：, 原发性肝癌：特异-原发性肝细胞癌显著增高 50%的患者AFP300g/L，但有部分患者AFP始终不升高； 病毒性肝炎与肝硬化患者，血清中AFP可有不同程度的增高，但一般在300g/L以下； 生殖系统肿瘤和胚胎性肿瘤，如睾丸癌、畸胎瘤等升高； 妊娠三个月后，血清AFP含量开始升高，分娩后三周恢复正常。若孕妇血清中AFP异常升高，应考虑有胎儿神经管缺损畸形的可能性。,参考值：血清5.0g/L 临床意义：, 结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌，转移性 恶性肿瘤也有不同程度的阳性率；在恶性肿瘤的随访， 病情监测，疗效评价等方面有重要价值。 肠道息肉、憩室炎、结肠炎、肝硬化、肝炎、胰腺炎和肺 部疾病也可有不同程度的升高； 吸烟者中有部分人CEA5g/L。,2.癌胚抗原 （carcino-embryonic antigen，CEA）,3. 前列腺特异抗原（PSA）,PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的单链糖蛋白。在血清 中PSA以两种生化形式存在： 一部分(20%)是以低分子量(33kD)的 游离PSA（f-PSA）形式存在； 大部分(80%)是以PSA和1抗糜蛋白酶、 2-巨球蛋白等结合的形式存在， 称复合PSA(c-PSA)。 总PSA（t-PSA）,包括血清中f-PSA和c-PSA。,参考值：血清 t-PSA 0.25,PSA 临床意义,血清PSA升高 前列腺癌患者升高，但大约25%患者，其PSA水平正常；而大约有50%的良性前列腺疾病患者PSA水平增高。为增加PSA对前列腺癌检测的敏感性和特异性，可使用PSA年龄特异性参考范围，PSA密度、PSA速率、f-PSA/t-PSA比值等； 前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系统的疾病，也可见血清PSA水平升高，故当PSA在4.0g/L10.0g/L的灰区时，须进行f-PSA和 f-PSA/t-PSA比值的测定。,【注意事项】在采集病人的血标本前进行直肠指诊、前列腺按摩， 导尿等，将会导致血清PSA升高，应注意避免。,(二)、糖脂类肿瘤标志物检测：,（1）糖链抗原19-9 (CA19-9),（3）糖链抗原15-3 ( CA 15-3),（2）糖链抗原125 ( CA 125),（1）糖链抗原19-9 (CA19-9),CA19-9是一种与胰腺癌，胆囊癌，结肠癌和胃癌相关的肿瘤标志物，又称胃肠癌相关抗原。 参考值：血清CA199 37 kU/L, 胰腺癌首选指标，血清CA19-9水平明显升高，尤其是胰腺 癌晚期病人，血清CA 19-9浓度可达40万kU/L，是重要的辅助诊 断指标； 胆囊癌、胆管壶腹癌、胃癌、结肠癌时，血清CA19-9水平明显升高。 胆囊癌、胆管壶腹癌阳性率约为85%，胃癌、结肠癌阳性率约为40%； 急性胰腺炎，胆囊炎，胆汁淤积性胆管炎，肝硬化，肝炎等 疾病，CA 19-9也有不同程度的升高，注意与恶性肿瘤的鉴别。,（2）糖链抗原125 ( CA 125),CA125是一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，对诊断卵巢癌有较大临床价值。 参考值 ：血清CA 125 35kU/L, 卵巢癌，阳性率可达5090%。手术和化疗有效者CA 125水平很快 下降，若有复发，CA 125升高可先于临床症状出现之前。 其他恶性肿瘤，如乳腺癌、胰腺癌、胃癌47%、肺癌、结肠直肠癌、 其他妇科肿瘤等也有一定的阳性反应。 非恶性肿瘤，如子宫内膜异位症，盆腔炎，卵巢囊肿，胰腺炎，肝炎， 肝硬化等疾病也有不同程度升高。 妊娠早期，CA 125有升高。,（3）糖链抗原15-3 ( CA 15-3),CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，属糖蛋白，分子量超过400kD，对乳腺癌有重要的辅助诊断作用。 参考值：血清CA15-3 25kU/L, 乳腺癌，但在乳腺癌的早期阳性率较低约为30%，转移性 乳腺癌阳性率可达80%； 其他恶性肿瘤，如肺癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，子宫 颈癌，原发性肝癌等，也有不同程度的阳性率； 肝脏，胃肠道，肺，乳腺，卵巢等非恶性肿瘤疾病，阳性 率一般低于10%。,(三)、肿瘤标志物的选择,选择特异性的肿瘤标志物或最佳组合 动态检测,常用肿瘤标志物联合检测的临床应用,肿瘤 首选标志物 补充标志物,肺癌 NSE、CYFRA21-1 CEA、TPA、SCC、ACTH、降钙素 肝癌 AFP AFU、GT、CEA、ALP 乳腺癌 CA15-3、CA549 CEA、hCG、降钙素、铁蛋白 胃癌 CA72-4 CEA、CA19-9、CA50 前列腺癌 PSA f-PSA、c-PSA、PAP 结肠直肠癌 CEA CA19-9、CA50 胰腺癌 CA19-9 CA50、CEA、CA125 卵巢癌 CA125 CEA、hCG、CA72-4 睾丸肿瘤 AFP、hCG 宫颈癌 SCC CEA、CA125、TPA 膀胱癌 无 TPA、CEA 骨髓瘤 2-M、本周蛋白,五、自身抗体检测,-自身免疫病是指免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，产生自身抗体损伤含有相应自身抗原的组织器官而造成的疾病。,2019/8/5,27,可编辑,是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中。主要为IgM型。 临床意义：类风湿性疾病时，RF，阳性率达70-90; 其他自身免疫性疾病，RF亦,（一）类风湿因子 (rheumatoid factor，RF),1.ANA(antinuclear antibody):指抗各种细胞核成分的自身抗体，是血清中存在的一类和自身组织细胞的细胞核发生反应的自身抗体的总称。 无器官和种属特异性 临床意义：SLE(未治疗的)，阳性率达80一100，亦可见于其他自身免疫性疾病。,（二）抗核抗体检测,抗核抗体检测方法： 间接免疫荧光法（IIF）,均质型,核膜型,颗粒型,核点型,抗着丝点型,ENA抗体谱包括抗Sm、抗核糖体、抗ScL70、抗Jo1、抗SSB、抗SSA和抗nRNP等的抗体。 临床意义 抗Sm抗体：SLE的特异性标志之一 ，抗dsDNA和抗Sm 抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。 抗SSA、SSB抗体干燥综合征 抗nRNP抗体-混合性结缔组织病,2. 可提取性核抗原（ENA）抗体谱的检测,2.抗双链DNA（double stranded-DNA,ds-DNA）抗体,抗dsDNA抗体靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构。 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。 抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%100%，但其敏感性仅为30%50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。,抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,六、感染的免疫学检查（434）,(一)、抗链球菌溶血素“O” 抗体（ASO）测定 A群溶血性链球菌 意义：风湿、风湿性关节炎、风湿性心脏病、 急性肾小球肾炎时,是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒第三周后阳性率达80%，初期阴性 参考值：H1:160，O1:80，副伤寒甲、乙、丙1:80 临床意义： O、H均升高：伤寒 O不高、H升高：预防接种或回忆性反应 O升高、H不高：感染早期或交叉反应,（二）、肥达氏反应,七、病毒性肝炎检测（P452),（一）甲型肝炎病毒标志物检测,（二）乙型肝炎病毒病毒标志物检测,（三）丙型肝炎病毒标志物检测,（四）丁型肝炎病毒标志物检测,（五）戊型肝炎病毒标志物检测,（一）甲型肝炎病毒标志物检测,免疫学检测,特异性抗体检测 IgM抗体 IgG抗体 HAV抗原检测,病原学检测,病毒分离 RT-PCR,（二）乙型肝炎病毒病毒标志物检测,乙型肝炎表面抗原（HBsAg） 乙肝病毒前S1抗原 抗乙肝病毒前S1抗体 乙肝病毒前S2抗原 抗乙肝病毒前S2抗体 乙型肝炎核心抗原（HBcAg）,乙肝核心抗体-IgM 乙肝核心抗体-IgG 乙型肝炎表面抗体（抗-HBs） 乙型肝炎e抗原（HBeAg） 乙型肝炎e抗体（抗-HBe ）,1.最常用的检测项目 两对半 测定方法：ELISA、放射免疫法（RIA）、发光免疫法,（二）乙型肝炎病毒病毒标志物检测,2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标 （1）乙型肝炎的诊断: 急性HBV感染的诊断 提供直接证据 （2）抗病毒治疗方法及疗效评价：拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果的主要指标。 （3）分泌物传染性判断（乳汁等）,（二）乙型肝炎病毒病毒标志物检测,阴性： 最低检测灵敏度 拷贝/ml（如:500拷贝/ml） 阳性： 具体数据拷贝/ml （如：5.0E+6拷贝/ml ) 参考值：最低检测灵敏度 拷贝/ml,结果的报告,（三）丙型肝炎病毒感染,分子生物学检测,RT-PCR：有助于早期诊断,免疫学检测,特异性抗体检测 抗HCV-IgM抗体 抗HCV-IgG抗体,（四）丁型肝炎病毒感染,（五）戊型肝炎病毒感染,HDV为缺陷病毒，需有HBV的存在方能复制和传播,实验室检查,病毒分离 免疫学检查 分子生物学检测,Thank You for Your Attention,谢 谢,两对半:,HBsAg（表面抗原）： 存在于Dane颗粒的表面的糖蛋白。判断HBV感染的指标之一 。 抗-HBs（表面抗体）：是一种保护性抗体。是机体感染或接种乙肝疫苗的标志。 HBeAg（e抗原）： 其阳性是乙型肝炎的重要标志，病情活动性较强，传染性较大。 抗-HBe（e抗体）：抗-HBe的出现意味着大部分HBV被消除，复制减少，传染性降低。 抗-HBc（核心抗体）：阳性者代表正在感染或以往感染过乙肝病毒。,HBcAg(核心抗原)： 是乙肝病毒存在的直接标志，与HBV复制呈正相关。存在于肝细胞内，血中检测不出。 当肝细胞破坏,HBcAg释放出来,被酶水解成HBeAg,所以HBeAg提示肝细胞损伤. HBeAg阳性标志着较强的感染和传染性,9种常见模式,1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。 2 - - - - + (1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已消， 抗-HBs尚未出现； 3 - - - + + (1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期；(3)抗HBs出现前的窗口期 4 - + - - - (1)注射过乙肝疫苗有免疫；(2)既往感染,5 - + - + + 急性HBV感染后康复。 6 + - - - + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。 7 - + - - + 既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。 8 + - - + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。 9 + - + - +