杏鲍菇液体菌种研制与工厂化栽培应用.pdf

种业天地 中国农技推广2 O l 1年第 6期 C h i n a Ag ri c u l t u r a l Te c h n o l o g y E x t e n s i o n 2 01 1，Vo 1 2 7 No 6 杏鲍菇液体菌种研制与工厂化栽培应用 沈敏 李文生 周 雷 ( 1 安徽省阜阳市农业技术推广中心安徽 阜 阳 2 3 6 0 0 0 ； 2 阜阳市德益农业科技有限公司 2 3 6 0 0 0 ) 摘要 ： 杏鲍菇液体菌种 与固体菌种相 比较， 液体菌种制种 时间缩短 了4 0天以上 ， 发菌培养 时间缩短 l O天以上， 所 以批量 出菇时间提前5 O天以上， 提高菇房利用率和产能， 降低成本。 液体菌种在培养罐内， 一次培养菌种量大， 接种快， 效率高。 液体菌种接于固体培养料内， 萌发点多， 茵丝生长快而均匀 ， 污染少 ， 出菇整齐 ， 产量高， 品质好， 节约资源 ， 提高效益。 关键词 ： 杏鲍菇； 液体菌种 ； 工厂化栽培 中田分类号： S 6 4 6 1 + 9 文献标识码： B 文章编号： 1 0 0 2 3 8 1 X( 2 0 1 1 ) 0 6 0 o 1 4 0 2 工厂化栽培食用菌是利用现代工程技术和先进 的菇房设施和设备 。人为控制食用菌生长发育所需 的温度 、 湿度、 二氧化碳、 光照等环境条件 ， 采用工业 化生产和经营管理方式组织食用菌生产的过程 。杏 鲍菇液体菌种在工厂化栽培中的应用是菌种液体深 层发酵技术与工厂化高产栽培技术的有机结合 ， 更 适合规模化、 标准化 、 周年化 、 现代化的工厂化生产 。 笔者于 2 0 1 0年作为企业科技特派员参加 了杏鲍菇 液体菌种研发工作 ，并将液体菌种成功应用在工厂 化栽培 中。 实现了杏鲍菇工厂化栽培的高产 、 优质 、 高效的 目标。技术要点如下 。 1 主要 生产 设备 液体培养基配制设备 ， 包括电子称 、 量杯 、 不锈 钢锅 、 塑料桶 、 电磁炉、 计算机控制灭菌器及小型增 压泵 ( 输送培养基到培养罐内) 等。摇瓶菌种振荡培 养设备， 包括大摇瓶、 小摇瓶( 三角烧瓶) 及摇床等。 液体菌种培养设备 ， 包括发酵罐 、 空气过滤器、 电控 设备等。 空气净化设备 。 包括空气除尘器、 空气压缩 机 、 输送管道 、 冷却器等。接种培养设备 ， 包括接种 针 、 接种枪及接种箱 、 超净工作 台、 生化培养箱等 。 2 液体培养基配方 配方一 ： 玉米粉 2 ， 豆粕 l ， 麦麸 0 5 ， 磷酸 二氢钾 0 1 ，硫酸镁 0 0 5 ，蛋 白胨 0 1 ，红糖 0 6 ，葡萄糖 0 5 ， C M C N a( 纤维素酶诱导剂 ) 0 o 2 ， 水适量。 配方二 ： 马铃薯 8 ， 麦麸 2 ， 红糖 0 6 ， 葡萄 糖 0 5 ，蛋白胨 0 1 ，磷酸二氢钾 0 1 ，硫酸镁 0 0 5 ， 维生素 B ， 0 0 5 ， 水适量 。 3 生产工艺流程 斜面试管菌种扩繁 小摇瓶菌种接种培养_ + 大 摇瓶菌种接种培养 培养罐菌种( 液体菌种 ) 接种培 1 4 养_ + 液体菌种接栽培袋 。 3 1 摇瓶茵种生产工艺流程培养基配制_ + 培养 基分装 灭菌冷却- + 小摇瓶接种_ + 小摇瓶 震荡培 养 小摇瓶菌种接人大摇瓶一大摇瓶振荡培养。 3 2 培养罐 茵种生产工艺流程培养罐清洗和检 查 煮罐消毒_ + 液体培养基配制H + 培养基装罐 培 养基灭菌冷却一摇瓶菌种接人培养罐 液体菌种培 养 栽培袋接种 。 4 液体菌种生产关键环节和核心技术 4 1 摇瓶培养基配制 配制 5 L液体培养基 根据 配方一称取玉米粉 1 0 0 g ， 豆粕 5 0 g ， 麦麸 2 5 g ， 磷 酸二氢钾 5 g ， 硫酸镁 2 5 g ， 蛋 白胨 5 g ， 红糖 3 0 g ， 葡萄糖 2 5 g ， C MC N a 1 g ，放入不锈钢锅 中，加水 3 0 0 0 mL搅拌溶解 ，在电磁炉上煮沸持续 2 O分钟 后 ， 用双层纱布过 滤 ， 将 滤液加水 至 5 L ， 调节 p H 6 5左右。制作小摇瓶分装在 5 0 0 mL的三角烧瓶 中 ， 每瓶装量 2 5 0 mL ， 并加人 5粒小玻璃球 ， 瓶 口用 棉塞和牛皮纸密封。 制作大摇瓶分装在 5 0 0 0 mL的 三角烧瓶 中， 每瓶装量 2 5 0 0 m L 并加入 1 5粒小玻 璃球 ， 瓶 口用棉塞和牛皮纸密封。 4 2 摇瓶培养基灭茵配制好的摇瓶培养基 及时 放人电脑控制 灭菌器 中 ，在 O 1 3 0 1 5 MP a压力 、 1 2 1条件下 ， 灭菌 4 0分钟。 4 3 摇瓶 菌种接种灭菌好的培养基 待温度冷却 至 2 8以下， 在接种箱或超净工作台内无菌条件下 接种 。每小摇瓶投入约 2 c m 的斜面菌种后 。 置于摇 床上振荡培养 ； 培养后的小摇瓶菌种 ， 扩接到大摇瓶 内振荡培养 ， 每小摇瓶菌种扩接一瓶大摇瓶。 4 4 摇瓶 菌种振 荡培 养大小摇瓶菌种均在 摇床 上往复振荡 ， 震荡频率为每分钟 8 0 1 0 0次 ， 振幅为 6 1 0 c m， 摇床室的温度控制在 2 4 2 5。一般小摇 中国农技推广)2 O l 1 年第 6期 C h i n a A g r i c r d t u r a l T e c h n o l o g y E x t e n s i o n 2 0 1 1 ， V d 2 7 N o 6 种 业天地 瓶菌种培养 7天扩接到大摇瓶 内培养 。大摇瓶菌种 培养 3 天扩接到发酵罐内培养。 4 5 发酵罐菌种发 酵培养 4 5 1 发酵罐培养基配制 。 根据以上配方 ， 称量玉米 粉 2 6 k g ，豆粕 1 3 k g ，麦麸 0 6 5 k g ，磷酸二氢钾 O 1 3 l【 g ， 硫酸镁 0 0 6 5 k g ， 蛋白胨 0 1 3 k g ， 红糖 0 7 8 k g ， 葡萄糖 0 6 5 k g ， C MC N a 0 0 2 6 k g ， 放入 容积 为 2 0 0 L不锈钢锅中， 加水 1 0 0 L 搅拌溶解， 煮沸持续 2 0分钟后过滤 ，将滤液加水至 1 3 0 L，调节 p H 6 5 左右 ， 用增压泵将滤液灌人发酵罐内。 4 5 2 发酵罐灭菌。 液体培养基装罐前， 将发酵罐在 压力 0 1 3 0 1 5 MP a 、温度 1 2 1条件下空 消 2小 时， 装入液体培养基后， 在相同条件下实消 4 0 分钟。 4 5 3 液体菌种深层培养。待发酵罐液体内部温度 冷却 2 8以下 。打开培养室内紫外灯照射 柏 分钟 进行空间消毒。 消毒结束后， 在酒精火焰圈无菌条件 下打开发酵罐接种 口。将培养后 的大摇瓶菌种 ( 2 5 0 0 m L ) 扩接到发酵罐 内， 接入量为 2 ( v v ) 。关 闭接种 口， 同时打开控气阀门 ， 通人新鲜空气 ， 通气 搅拌培养。 同时排 出发酵过程中的废气。 设定发酵罐 内培养温度 2 3 2 5。 发酵培养 3天即可使用 。 培养 过程中， 每天取样一次罐内液体 ， 在显微镜下观测有 无杂菌感染 ， 若发现污染 ， 尽早处理。 4 6 茵种制作环境 因素严格消毒规程 ， 保持接种 室( 接种箱 ) 和培养室内适宜的温度和干爽 、 清洁的 空气 ， 降低空气中杂菌基数 ， 是提高菌种培养成功率 的关键。另外 ， 在空气压缩机房 ， 接种车间都必须保 持环境清洁卫生。 4 7 无菌接种 无菌接种包括母 种扩繁、摇瓶 菌 种、 发酵罐菌种及栽培袋接种等过程 ， 必须严格执行 操作规程 ， 保证在无菌条件下， 熟练操作 ， 快速准确。 5 发菌培养 发菌培养在养菌室内进行 ，主要进行温度控制 ， 气体调节。 菌袋检查等工作。 在同一出菇室内。 随机设 置 3个试验区， 每个试验区各设置 1 0 0个液体菌种栽 培袋与固体菌种栽培袋 ， 栽培袋内装 同样配方的培养 料 ， 观察记录各栽培袋菌丝生长情况。在温度 2 3 2 5 c I = 、 湿度 6 5 一 7 0 、 二氧化碳浓度 0 0 3 0 0 5 条件 下避光培养，液体菌种栽培袋 2 0 天左右菌丝长满菌 袋 ，再过 1 0天左右菌丝达到生理成熟，平均污染率 2 。固体菌种栽培袋 3 0天左右菌丝长满菌袋 再过 1 0天左右菌丝达到生理成熟。 平均污染率 5 。 6 出菇管理 菌丝发满菌袋达生理成熟后 。分别把液体菌种 栽培袋和固体菌种栽培袋转移到 出菇室培养架上 。 跟踪观察各栽培袋出菇情况。 在温度 1 4 1 6、 湿度 8 5 一 9 5 、 二氧化碳 浓度 0 0 3 一 0 0 5 、 光照 5 0 o 1 0 0 0 l x栽培条件下 。子实体生长的各生育期时间 差别不大 ， 经过 2 O天左右的栽培管理 ， 均可进入子 实体采收期 。 但是液体菌种栽培袋出菇整齐 ， 菇体匀 称， 商品性状较好， 第一潮菇产量和品质明显优于固 体菌种栽培 。 7 经济效益分析 液体菌种制种时间比固体菌种缩短 4 O天 以上 。 发茵培养时间缩短 1 O天以上 ， 所以批量出菇时间提 前 5 O天 以上 ，提高 产能 4 o ，提高菇房 利用 率 2 5 。 液体菌种采用接种枪接种 ， 接种快 ， 效率高， 每 4人 1天完成 1 万袋接种任务 ，固体菌种每 6人 2 天才能完成 1 万袋接种任务 ， 节省劳动用工 2 0 0 ， 提高效率， 降低成本 。液体菌种生命力强 ， 菌丝萌发 快而均匀 ， 污染少 ， 菇体匀称 ， 商品价值高 ， 与固体菌 种相比污染率 降低 3 ， 每 1万袋减少污染 3 0 0袋 ， 节约资源， 保护环境 ， 提高效益。 收稿 日期 - 2 0 1 1 0 5 0 6 ( 上接 第 1 l页) 作为科技示范户进行培养 ， 每个科技 示 范户辐 射带动 1 0个农 户 。全县辐 射带动 农户 4 0 0 0个。开展技术培训 2 6次 ，培训农民 5 6 0 0人 次 ； 实地开展技术指导 2 1 0次 ， 项 目区的每个农户接 受培训 2次以上 。 实现万亩示范片有技术专家、 千亩 展示 田有技术骨干 、百亩核心攻关方有技术标兵 的 高产创建要求。 3