课件：食品安全作业.ppt

食品中沙门氏菌检验,GB 4789.4-2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验,检验仪器和材料 1 冰箱：04。 2 恒温培养箱：361，42。 3 显微镜：10100。 4 高压灭菌器。 5 超净工作台。 6 均质器或灭菌乳钵。 7 架盘药物天平：0g500g,精确度0.5g。 8 灭菌广口瓶：500mL。 9 灭菌锥形瓶：500mL、250mL。 10 灭菌吸管：10mL（具0.1 mL刻度）。 11 天菌培养皿：90mm。 12 灭菌小试管：内径3mm50mm。 13 灭菌毛细管。,检验使用的培养基和试剂 1 缓冲蛋白胨水(BP) 2 氯化镁孔雀绿(MM)增菌液 3 四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液 4 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液 5 亚硫酸铋琼脂(BS) 6 DHL琼脂 7 HE琼脂：按GB/T 4789.282003中4.21规定。 8 TSI琼脂 9 蛋白胨水、靛基质试剂 10 尿素琼脂(pH7.2) 11 氨基酸脱羧酶试验培养基 12 沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型。,检验沙门氏菌的样品 1 鲜猪肉、鲜牛肉；冻猪肉 2 鲜牛奶、鲜鱼；冻鱼 3 香肠、虾仁,沙门氏菌检验具体流程,检样 前增菌法 直接增菌法 冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳及其它未经加工的食品 25g BP 225mL 25g 灭菌生理盐水25mL 制成检样均质液 （361） 一般 4 h，干蛋品 1824 h 10mLMM(或TTB)100mL 10mLSC 100mL 检样均质液的半量MM(或TTB)100mL 检样均质液的半量SC 100mL 42 1824 h （361） 1824 h 42 1824 h （361） 1824 h BS DHL(或HE、WS、SS) （361） 4048 h （361） 1824 h 挑取可疑菌落 TSI（斜面、底层、产气、H2S）、蛋白胨水（靛基质）、尿素（pH7.2）、KCN、赖氨酸 H2S靛基质 H2S靛基质 H2S靛基质 非如左述的 尿素KCN赖氨酸 尿素KCN赖氨酸 尿素KCN赖氨酸/ 各种反应结果 甘露醇、山梨醇 ONPG 沙门氏菌血清学实验 沙门氏菌血清学实验 非沙门氏菌 非沙门氏菌 报告,检验沙门氏菌操作步骤,1、前增菌和增菌 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无菌操作取25g（mL），加在装有225mL缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器以8000 10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，于361培养4h (干蛋品培养18h24h)，移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42培养18h 24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于361培养18h24h。 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g(25mL)加入灭菌生理盐水25mL，按前法做成检样匀液；取25mL，接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42培养24h；另取25mL接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于361培养18h24h。,2、分离 取增菌液1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板)。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于361分别培养18h24h(DHL、HE、WS、SS)或40h48h(BS)，观察各个平板上生长的菌落。,3、生化试验 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂、蛋白陈水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管，于361培养18h24h，必要时可延长至48h，按生化反应初步鉴定表判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其他5种反应结果均可以排除。,沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征,肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果,肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表,沙门氏菌检验几点注意,冷冻样品解冻需在45以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2-8，18小时内软化。 为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。 进行生化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的培养物重新进行生化试验。 测试中应同时接种阳性对照菌株。,食品中金黄色葡萄球菌的检测,1、增菌培养法,1.1检样处理：无菌操作取样25g（mL）加入225mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或均质制成混悬液。 1.2增菌及分离培养：吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，361培养24h，转种血平板和BP平板， 361培养24h，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶实验。,2.1 梯度稀释转种BP平板 吸取上述1：10混悬液，进行10倍第次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL，分别加入三块BP平板，每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用灭菌涂布器涂布整个平板，如水分多不易吸收，可将平板放在3611h，等水分蒸发后反转平皿置361培养。,2、直接计数方法,2.2转种血平板 在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑色菌落，并从中任选五个菌落，分别接种血平板， 于361培养24h后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养方法。,2.3 菌落计数 将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。,流 程,三法特点及适用性：,第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的 食品中金黄色葡萄球菌的计数 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。,GB 4789.10-2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验,GB 4789.10-2010,第一法 金黄色葡萄球菌定性检验,GB 4789.10-2010,第二法 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数,GB 4789.10-2010,第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造