课件：细胞化学染色法.ppt

细胞化学染色,一、概念,细胞学和化学相结合的一门科学。以细胞形态学为基础，结合运用化学反应原理对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。,二、临床应用,辅助判断急性白血病的细胞类型 仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约50-70%，如结合细胞化学染色则可提到90%以上。 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病疗效和预后 发病机制的探讨,三、基本步骤,固定 显示 复染,固 定,目的：保持细胞结构及化学成分不变。 方法： 物理法 干燥、火焰固定 化学法 蒸汽固定、液体固定 （甲醛、乙醇、丙酮等）,显示,偶氮偶联法 联苯胺法 普鲁士蓝反应 雪夫反应 金属沉淀法,复 染,目的：使各种细胞显示出来便于观察 染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等,四、种类,过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 -醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色,过氧化物酶染色(POX),过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化还原过程。,原理 Washburn 法 四甲基联苯胺法 改良pereira 染色法,四甲基联苯胺法 H2O2 溶酶体颗粒中的 H2OO2 四甲基联苯胺 O2 联苯胺蓝 联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠 O2 蓝色物质 （沉淀）,正常细胞的染色反应 粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性，（颗粒少而细） 其他细胞 阴性,临床评价： 辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色。,、帮助鉴别诊断急性白血病的类型 急性粒细胞白血病： 原粒可呈阳性(粗大，局限性分布），阴性不可排除。 急性淋巴细胞白血病： 规定阳性率。 急性单核细胞白血病： 原单可为阴性，少数可弱阳性，（少而细小，常弥散分布）。,急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别 AML-M3 强阳性 组织细胞白血病、恶性组织细胞病与急单 前两者阴性,2. 成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化 活性增高：再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病 活性减低：急粒、慢粒、急单、MDS、放射病、退化性中性粒细胞,苏丹黑染色,原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。 正常细胞的染色反应 同（染色） 临床评价 染色特异性高于染色 染色敏感性高于染色,中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （）,原理：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。,中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （）,原理： 磷酸奈酚钠底物 PH9.6 碱性磷酸酶 (中性粒细胞胞质中) 奈酚+偶氮盐 (有色沉淀),正常血细胞染色反应 NAP主要存在于中性成熟粒细胞(杆状分叶),参考值：成人NAP阳性率10%-40%； NAP积分 40-80分,积分增加： 细菌性感染、再生障碍性贫血、骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。,积分下降： 慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶性组织细胞病等。,疾病的鉴别 类白血病反应 慢性粒细胞性白血病 细菌性感染 病毒性感染 急粒 急淋 恶性淋巴瘤 恶性组织细胞病,5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增多症 6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增多症 原发性血小板增多症 继发性血小板增多症 8. 再生障碍性贫血 阵发性睡眠性血红蛋白尿,过碘酸-雪夫反应,原理： 乙二醇基（多糖类物质中） 过碘酸 双醛基无色品红 紫红色化合物,正常血细胞染色反应,粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程度逐渐增强） 嗜酸胞质呈红色,颗粒不着色 嗜碱反之 红细胞系统 阴性 单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。,淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性,临床评价,红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状） 白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性,M5 PAS(+),AML-M6,AML-M7,M7 PAS(+),-醋酸萘酚酯酶染色,原理 -醋酸萘酚 PH中性 -醋酸萘酚酯酶 -萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色),正常血细胞的染色反应 单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+） 单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。 氟化钠抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分 100%,临床评价： 1、鉴别白血病类型 急单 急粒 急性早幼粒细胞白血病（强阳性，不被抑制） 急性粒单细胞白血病,其他脂酶染色,氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色 几乎仅出现在粒细胞、特异性高。 临床意义： 急性粒细胞白血病有一定数量白血病细胞阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分，阴性不排除急粒。,醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同-NAE染色。 -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同-NAE染色，特异性低于-NAE染色,酸性磷酸酶染色,原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色,临床评价： 诊断多毛细胞白血病 毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石酸抑制。,铁染色,1、原理： 铁+亚铁氰化钾 酸性环境 亚铁氰化铁（兰色）,2、正常血细胞的染色反应 贮存铁部位：巨噬细胞和幼红细胞 细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中 呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状 可将细胞外铁分为（-）、（+）、（+）（+）、（+）。,细胞内铁：指存在于中幼红、晚幼红、成熟红细胞中的铁。 铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 环形铁粒幼细胞：幼红细胞胞质内蓝色颗粒在 10(6)颗以上，围核周2/3(1/2)以上者。,细胞外铁,细胞内铁,环形铁粒幼细胞,结果判读： 细胞外铁： 可分五级标准 (-)：无颗粒 (+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠(颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠)。 (+)：有较多的铁颗粒和小珠。 (+)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。 (+)：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。,细胞内铁： 用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁粒幼红细胞)的百分率。 根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分为四型： I 型：幼红细胞内含铁粒1-2粒； 型：幼红细胞内含铁粒3-5粒； 型：幼红细胞内含铁粒610粒； 型：幼红细胞内含铁粒10粒。,参考范围： 细胞外铁： （+）（+） 细胞内铁：铁粒幼红细胞12% 44%，以型为主，少数为型。,3、临床评价： 缺铁性贫血 骨髓细胞外铁明显减少，“一”“士”，细胞内铁平均5.9%，仅为I型。 铁粒幼细胞性贫血 外铁“2”一“3”，内铁平均70%，其铁粒粗大，以 型为主，出现较多环形铁粒幼细胞。 骨髓增生异常综合症,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使