课件：葛根与枸杞对小鼠脂肪肝的影响.ppt

开题报告,论文题目：葛根与枸杞对小鼠脂肪 肝的影响对比 研究方向：植物生物化学 研究生姓名：解婧 导师姓名：陈志,论文选题的国内外研究现状及发展趋势,肝病至今仍是人类沉重的健康负担和主要死因之一。究其原因主要为生活方式的改变导致肥胖、糖尿病、嗜酒及其相关脂肪性肝病(FLD)增加迅速。FLD疾病谱包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝硬化，甚至肝细胞癌；临床上则分为酒精性肝病(ALD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)两大类型。随着社会老龄化以及慢性病毒性肝炎等其他肝病被控制，FLD现已成为肝病相关残疾和死亡越来越重要的原因。此外，NAFLD还与糖尿病和心血管疾病的发病密切相关。FLD的防治不但是临床医学问题，而且为预防医学、社会医学和卫生行政主管部门共同面临的重大课题。,脂肪肝的研究进展,脂肪肝的病因诸多，包括饮酒过量、代谢性疾病、药物和营养不良等。脂肪肝疾患可以主要由一种病因引起，也可以由多种病因同时作用或先后参与。在不同的时期、不同的国家和地区及不同人群中，脂肪肝的发病率及病因分布不一。目前在发达国家和地区，酒精中毒、肥胖、糖尿病是脂肪肝的3大病因，营养不良性脂肪肝仅流行于部分经济落后地区，单纯遗传因素引起的代谢性脂肪肝非常少见。故以下讨论的脂肪肝主要为酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝，主要包括肥胖、糖尿病和高脂血病所致的脂肪肝。 病理病机 食物中的脂肪经水解酶消化后,其乳糜微粒(主要成分是甘 油三酯)被小肠上皮吸收入血。 血的乳糜微粒有3条去 路:(1)分解后成为肌肉活动的能源;,(2)储存在脂肪组织作为潜在能源;(3)转运至肝脏进行代谢。 转运至肝脏的甘油三酯与载脂蛋白结合成极低密度脂蛋白(VLDL)颗粒分泌入血液。 如果甘油三酯产生量多,或极低密度脂蛋白量少,造成甘油三酯在肝内堆积,则形成脂肪肝。 成因：(1)酒是罪魁,长期饮酒,导致酒精中毒,致使肝内脂肪氧化减少,慢性嗜酒者近60发生脂肪肝,2030最终将发展为肝硬化。 (2)长期摄入高脂饮食或长期大量吃糖、淀粉等碳水化合物,使肝脏脂肪合成过多。(3)肥胖,缺乏运动,使肝内脂肪输入过多。(4)糖尿病。(5)肝炎。(6)某些药物引起的急性或慢性肝损害,脂肪肝模型的研究进展 酒精性脂肪肝模型 （1）急性酒精性脂肪肝模型 （2）慢性酒精性脂肪肝模型 非酒精性脂肪肝模型 （1）营养失调性脂肪肝模型 （2）高脂性脂肪肝模型 （3）营养不良性脂肪肝模型 （4）禁食大鼠脂肪肝模型,脂肪肝的危害,肝脏具有消化、解毒、合成、免疫、贮存等功能，是动物机体一类组织器官。脂肪肝是肝细胞发生脂肪变性的一种脂类代谢紊乱性疾病，组织学表现为肝细胞胞浆内充满脂肪滴（三酰甘油）。脂肪肝是由多种原因引起的脂类代谢障碍,使肝细胞中脂肪含量异常增加的一种疾病,肝脏在正常情况下总脂肪量不超过肝重的5%,而脂肪肝的患者总脂肪量可高达肝重的40%50%,肝病患者治疗过程中食物摄入过多,活动减少,极易引起脂肪肝,可导致肝功能反复异常,不易恢复,甚至形成肝硬化,预后不良。 脂肪肝一般可分为急性和慢性2种。 急性脂肪肝比较少见,临床症状表现为疲劳、 恶心、 呕吐和不同程度的黄疸,并可短期内发生肝昏迷、 肾衰、 肝硬化，严重者可在数小时死于并发症。 慢性较为常见,起病缓慢、 隐匿,病程漫长,早期没有明显的临床症状,一般是在做B超时偶然发现,部分病人可出现食欲减退、 恶心、 乏力、 肝区疼痛、 腹胀,以及右上腹胀满和压迫感。 由于这些症状没有特异性,与一般的慢性胃炎、 胆囊炎相似,因而往往容易被误诊误治。,脂肪肝防治的研究进展,基础治疗 (1)饮食治疗 (2)运动治疗 (3)行为治疗 (4)戒酒疗法 药物治疗 (1)减肥药物 (2)改善胰岛素抵抗药物 (3)调脂、降压及控制血糖药物 (4)以抗炎为主的药物 (5)以抗氧化为主的药物,青藏高原治疗脂肪肝的主要药物 大黄 指唐古特大黄或药用大黄的根状茎，大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，气清香，味苦而微涩，嚼之黏牙，有砂粒感，含大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、甲醚等蒽醌衍生物，具有降低血压和胆固醇的作用，生大黄有通便 活血化瘀等作用，适用于偏实证和大便干结的脂肪肝病人。大黄资源主要分布于青海、四川西部、云南西北部及西藏东部，大黄生物学特性：喜冷凉气候，耐寒，忌高温。据研究，现已从大黄中分离出蒽醌、二蒽酮、芪、苯丁酮、单宁、萘色酮等不同种类的 80 多种化合物，大体上分为蒽醌类、 多糖类、鞣质类。,川西獐芽菜 属龙胆科獐牙菜属植物，主要分布于我国的西藏、青海、四川和云南，是一种珍稀的高原野生植物，也是一种常见的藏药，藏译音名“桑滴”，俗称“藏茵陈”据晶珠本草记载，桑滴味甘、苦、性温；具清热解毒、清肝利胆之功效，川西獐牙菜全草入药，是一种用于治疗黄疸型肝胆疾病和病毒性肝炎的珍稀草本植物。研究表明，植物中齐墩果酸、芒果苷、环烯醚萜苷类具有降酶、利胆、强壮、镇痛等药效作用。近年来，随着我国民族医药事业的迅速发展，川西獐牙菜的药用资源需求量快速增加，过度采收导致资源量锐减，獐牙菜苦苷等环烯醚、萜苷类、黄酮类、齐墩果酸等三萜类成分被认为是该属中药的主要活性成分，獐牙菜苦苷和齐墩果酸是 2005 年版中国药典中的药材质量控制成分。,枸杞 枸杞属茄科植物枸杞的成熟干燥果实。我国的宁夏、青海、 山东、 河南等地都有生产。枸杞在祖国传统医学中具有重要地位，其药用价值备受历代医家推崇本草纲目记载：枸杞，补肾生精，养肝，明目，坚精骨，去疲劳，易颜色，变白，明目安神，令人长寿 现代医学研究表明，枸杞具有抗肿瘤抗氧化、抗衰老、免疫调节、降血糖、降血脂等作用。对于枸杞上述功能起重要作用的因子，一般认为与其所含枸杞多糖、类胡萝卜素和甜菜碱等活性成分有关，特别是与枸杞多糖密切相关，因此枸杞多糖的药理及临床应用研究受到格外关注。 葛根 为豆科植物野葛的干燥根,习称野葛。具有解肌退热, 生津,透疹, 升阳止泻之功效。用于外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻,高血压颈项强痛等疾病。异黄酮类化合物是葛根的主要成分;其中葛根素是葛根的特有成分,在治疗心血管系统疾病上有着广泛的应用。,当归 来源于伞形科植物当归的根 ,药性甘、辛、温 ,具有补血活血、 调经止痛、 润燥滑肠等功效 ,用于具有补血活血 ,调经止痛 ,润肠通便等功效。当归中主要含有丁烯基苯酞、 藁本内酯、 愈创木酚等多种挥发性成分以及阿魏酸等多种有机酸成分。 党参 为桔梗科党参属植物党参的干燥根, 其性甘、平, 补脾胃, 益气血, 生津止渴, 是重要的传统补中益气, 健脾益肺的要药。党参多糖是党参中的有效成份之一, 近年来研究表明,党参多糖具有降血糖、降血脂作用、抗溃疡活性等作用, 其在调节免疫功能中具有抗病毒、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等作用。,论文的选题的意义及基本内容,1 选题的意义 脂肪肝不是一种独立的疾病, 是由多种素引起脂肪在肝内过度蓄积，从而引起肝脏形态和功能上的改变。是仅次于病毒性肝炎的第二大肝病,已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。而早期诊治可以阻止脂肪肝的进一步发展，甚至使其逆转。因此其治疗日益受到重视。,2019/8/24,13,可编辑,2 研究的基本内容,2.1实验动物与饲料 实验用昆明种小鼠,清洁级,1822g ,雌雄各半，由青海省地方病防治研究所实验动物中心提供，饲以鼠粮，自来水。 高脂饲料的准备 10%蛋黄粉,10%猪油，4%胆固醇, 1%胆酸，75%基础饲料。 2.2实验材料 葛根、枸杞醇提物的制备：将两种药粉碎，用75食用酒精回馏煮2 h,滤出提取液,重复3次合并提取液，浓缩醇提物，在60的烘箱里烘干,减压回收乙醇。实验用时用花生油吐温80水为118配制生药。,2.3实验试剂与仪器,紫外分光光度计、温振荡器、离心机、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒，甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)试剂盒、普通饲料、 葛根和枸杞子醇提物、生理盐水。 2.4实验方法,2.4.1分组及造模,取小鼠80只, 随机分成8组,每组10只,雌雄各半,分为正常对照组、高脂模型组、葛根醇提物高、中、低剂量组，枸杞醇提物高、中、低剂量组。除正常组小鼠外,其余各组动物喂高脂饲料4周后非酒精性脂肪肝模型已建立，予以灌胃治疗。按0.2ml/20g体重分别灌胃高、中、低剂量的药物,正常组和模型组给予等量生理盐水,每天早晚9点各灌喂一次,连续10 d ,末次给药1 h 后鼠尾静脉注射LPS生理盐水溶液(含7.5g)0.2 ml/只,然后禁食12h后,眼眶采血,离心，分离血清，所得血清于-75冰箱冻存，用于血液生化检测；迅速解剖，取出肝脏，冲洗后滤纸吸干，称肝湿重，计算其质量指数。,2.4.2观测指标及测定方法 一般项目 观察动物的体重、 饮食、 毛发、 活动情况、肝体重比等。 生化指标分别按照试剂盒说明书操作，ALT、AST、TG、TC的测定均采用酶比色法。,2.4.3数据处理,实验数据均采用均数标准差（XS）表示，组间均数差异的比较用单因素方差分析，所有数据均用SPSS13.0统计软件处理。,2.5技术路线,购买昆明种小鼠（体重1822g,45周龄）将小鼠分组 空白对照组 模型对照组 给药组 基础饲料 高脂饲料 高脂饲料 四周后，每日灌胃（ig） 四周后，每日灌胃（ig） 四周后，每日灌胃（ig） 0.2ml生理盐水 0.2ml生理盐水 0.2ml药液,（ 10天后 ）,空白对照组注射0.2ml无菌生理盐水，其他各组注射0.2ml LPS生理盐水 （各组小鼠称体重）,摘眼球取血（或眼眶取血或尾静脉取血）,颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏、胸腺、脾脏，分别用电子天平称重 （目的是：计算出肝脏系数、胸腺系数和脾脏系数） 一部分血离心，分离血清，进行 生化指标的测定,论文选题特色和创新之处,目前，高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝动物模型是国内与国外研究药物、治疗脂肪肝较为理想的动物模型，也是国内外许多学者所热衷的研究课题，从而达到从筛选新药以及从理论上研究治疗脂肪肝。但是，利用高脂伺料诱导的非酒精性脂肪肝动物模型来进行青海省藏药的筛选，还未见有报道。本论文将通过建立非酒精性脂肪肝动物模型进行两种藏药的筛选，来筛选出对小鼠脂肪肝有作用的成分，从而为脂肪肝的临床实践奠定基础。,预期成果的理论意义和应用价值,随着我国经济的发展，膳食结构的改变，脂肪肝发病率逐年上升，不仅直接影响人群的健康，甚至还危及人的生命安全。其所造成的直接和间接的经济损失也很大，严重地影响了生产、工作和学习。由于肝病是危害人类的主要疾病之一，结合青海省藏药的优势来开发疗效好的治疗脂肪肝新药物，不但造福于世界；同时为青海的特色经济发展、利用青海特色资源发展特色产业有实际的意义。本课题通过建立脂肪肝动物模型进行藏药筛选，来筛选出对小鼠脂肪肝有效的提取物及其成分，从而为脂肪肝的临床实践奠定基础、提供依据。如果有疗效肯定，副作用小的治疗脂肪肝药物，将对人类的生活产生巨大的影响；同时具有较大的经济空间。,论文工作进度计划,2010年3月-2010年12月： 查阅与论文相关的资料，确定最终论文设计方向。 2011年1月- 2011年4月： 完成