课件：《医用合成药物分析》课件.ppt

合成药毒物,合成药毒物,概念 合成药毒物指那些通过人工化学合成，用于临 床治疗，但如果使用不当或过量也可造成中毒 甚至死亡的化合物。 种类 此类化合物非常多，常见的有：安眠镇静药、 抗精神病药、解热镇痛药、兴奋药以及麻醉药 等。 性状 纯品多为白色固体粉末，易溶于有机溶剂，分 离提取以有机溶剂提取为主，属于非挥发性有 机毒物或有机浸出毒物。,非挥发性毒物的分离提取方法,有机溶剂提取法（萃取法extraction),原理 利用非挥发性有机毒物在有机溶剂中有较大溶解度的性质，通过振摇浸泡和过滤或通过萃取，将检材中的毒物转移到有机溶剂中去，从而达到分离提取的目的。故非挥发性有机毒物又称“有机浸出毒物”。 方法 直接提取法 液液萃取法,直接提取法（浸取法）,方法 检材加有机溶剂浸泡或振摇，过滤，滤液直接或浓 缩后供检。 特点 a.简便、快速、提取率较高。 b.提取杂质较多。 适用检材 a.固体或半固体检材 b.成分简单 （复杂的需净化）,液液萃取法（1） （liquid-liquid extraction,LLE),原理 利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度大小的差异，可使之从一种溶剂中转移到另一种溶剂中去。通常将溶质从水相转移到有机相的过程称为“萃取”；将溶质从有机相转移到水相的过程称为“反萃取”。 利用萃取或反萃取可将毒物从检材中分离提取出来或对提取液进一步净化，还可对混合毒物进行分离。 萃取 反萃取 乙醚 酸水 水相 氯仿,液液萃取法（LLE)（2） 分配比（distribution coefficient,D),一种毒物是否能被萃取或反萃取，主要由其在两相中的分配比决定。 CO (W W1) / VO CO VO 有机相 D = = W-W1 CA W1/ VA CA VA W1 水相 D值随温度、浓度、酸碱性变。 在一定条件下，D值可看成定值。 同一溶剂中，D值越大，在有机溶剂中的溶解度越大。 一种毒物在不同溶剂系统中的D值不同（选提取溶剂 ）。,液液萃取法（LLE)（3）,VA n 萃取率 fn = 1 - VA+ DVO D值越大，越有利于萃取；反之，越利于反萃取。 D值一定时，增加萃取溶剂体积可提高萃取率。 萃取溶剂体积一定时，增加萃取次数可提高萃取率,液液萃取法（LLE)（4）,萃取方式 适用 情况 装置 一次萃取 含量高 D值大 定性 分液漏斗 试管 多次萃取 含量较低 D值较小 定量 分液漏斗 试管 连续萃取 D值特别小 易乳化 连续萃取装置,连续液液萃取法,连续萃取原理 利用萃取溶剂自身的重力和静压力，在无需振摇的情况下，使两种比重不同、互不相溶的的液体充分接触，通过溶质在两相中的重新分配达到萃取的目的。 特点 无需振摇，避免乳化。 节约溶剂，引入杂质少，易浓缩。 省力不省时。 适用于D值特别小的毒物。,连续液液萃取装置,轻液提取器 重液提取器 1检材 2萃取溶剂 3冷凝管,液液萃取法的应用,应用 a. 直接从液体检材中分离提取有机毒物。 b. 对直接提取法所得的有机提取液进行净化，方 法有反提法（反萃取）和洗涤法。 c. 根据极性或酸碱性不同，可分离混合毒物。,提高溶剂提取率的措施,关键 增大毒物在提取溶剂中的分配比。 方法 A. 调节酸碱性 a. 增大毒物在提取溶剂中的溶解度。 b. 应注意避免毒物分解。 B. 无水硫酸钠脱水 a. 增加毒物在提取溶剂中的溶解量（半流体检材 固化）。 b. 减少有机萃取液中水溶性杂质的引入。 c. 避免乳化。 C.选择合适的提取溶剂 a. 对毒物的溶解度大，对杂质的溶解度小。 b. 分析目的不明确时，选溶解范围宽的。 c. 毒性小，易浓缩。,酸碱性的调节,用有机溶剂提取毒物时 酸性药毒物酸性 碱性药毒物碱性 中性药毒物各种pH均可 两性药毒物等电点 对含酯、酰胺等不稳定结构的化合物，调酸碱性不可过强，以免分解。,分离提取前处理方法,用有机溶剂提取法或固相萃取法分离提取生物检材中的有机毒物时，为了避免杂质干扰以后的分析工作或提高分离提取效率，常在提取之前，先对检材进行适当处理，最常用的方法有除去蛋白和水解结合物。,除去蛋白质,检材 血、肝匀浆等含蛋白质较多的检材。 目的避免对后续检测方法产生干扰，影响分析结 果的可靠性和准确性。 保护仪器，减少对仪器的污染和损坏。 减轻液液萃取时产生的乳化现象。 方法 使蛋白质变性、凝聚或生成不溶性盐而沉 淀，通过过滤或离心除去。 其它超速离心、微孔滤膜超滤、平衡透析等。,常用沉淀蛋白试剂,试 剂 常 用 机 理 适 用 强极性 甲醇 乙醇 强亲水作用，破坏蛋白 应用范围广， 有机溶剂 乙腈 表面水化膜，同时抑制 绝大多数毒物 蛋白解离，使蛋白凝聚 可直接进仪器 三氯醋酸 低于等电点pH，带正电 酸、中性毒物 无机酸 高氯酸 荷的蛋白与酸根形成不 碱性毒物慎用 钨酸 溶性盐。 对ECD有干扰 硫酸锌 高于等电点pH，带负电 避免用于可能 金属离子 汞、铜盐 荷的蛋白与金属离子形 含金属毒物的 成不溶性盐。 检材 高浓度 硫酸铵 盐析作用，蛋白脱水 各类毒物 无机盐 硫酸钠 加热可促进蛋白沉淀 对热不稳定的慎 用,沉淀蛋白反应,与酸根成盐 COO- 2H+ COOH WO42- COOH 2Pr 2Pr ( Pr )2 WO4 NH3+ NH3+ NH3+ 与金属离子成盐 COO- OH- COO- Zn2+ COOZn/2 2Pr Pr Pr NH3+ NH2 NH2,水解结合物,检材 毒物与体内蛋白质、葡萄糖醛酸、硫酸等 结合率较高、提取率低的生物检材。 目的 使结合的药毒物解离，提高提取率。 方法 利用强酸或酶对结合物进行水解。,常用水解方法,方法 酸 水 解 酶 水 解 葡萄糖醛酸甙 试剂 盐酸 加热 硫酸酯酶 胃蛋白酶 胰蛋白酶等 温度低 作用温和 优点 试剂价廉 简便快速 水解专一 毒物破坏少 水解液净化度好 水解专一性不强 水解时间较长 缺点 有些毒物可被破坏 水解液杂质多 适用 性质稳定、目的明确 各种毒物,分离提取液的净化,目的 进一步除去提取样品液中的脂肪、蛋 白质、色素等杂质，尽可能排除杂质 对后续检测的干扰，减少对仪器的污 染和损害。 方法 液液萃取法（反提法和洗涤法） 吸附柱法 薄层色谱法,反提法,方法 用酸水液或碱水液对有机提取液进行反萃取，使药毒物转变成极性较大的盐而溶于水相，将极性相对较小和中性的杂质留在有机溶剂中。 适合毒物 酸性药毒物碱水液反提 碱性药毒物酸水液反提 注意事项 对有些有机碱性毒物，不宜从氯仿溶剂中反萃取。 酸碱液浓度不宜过高，以免毒物分解。,洗涤法,方法 用稀酸液或稀碱液对有机提取液进行处理，使极性较大 或具有酸碱性的杂质溶于水相而除去，使有机相中的药 毒物得到净化。 适用毒物 一般用于中性药毒物 注意事项 酸性毒物不能用碱水液洗涤，碱性毒物不能用酸水液 洗。 经碱水液或酸水液洗涤后的有机相，应用蒸馏水洗涤， 并用无水硫酸钠脱水。,吸附柱净化,方法 用对杂质吸附力较强的吸附剂作为柱填料，对 有机提取液进行处理，使杂质被吸附于柱上， 而药毒物随溶剂或洗脱剂流出柱子。 吸附剂 三氧化二铝色素、蜡质、脂肪等 硅镁吸附剂蜡质、脂肪等 活性炭色素 无水硫酸钠水,薄层板净化,方法 将有机提取液点于薄层板上，展开，使药毒物 分离，定位后将疑是药毒物的斑点刮下，用有 机溶剂溶解洗脱。 适用 少量样品,改良Stas-otto法,利用乙醇溶解范围宽且具有沉淀蛋白质的性质，先用乙醇作为提取溶剂，从检材中将毒物分离提取出来，同时沉淀除去检材中的蛋白质。然后再用其它溶剂进行萃取和反萃取处理，使提取的样品溶液进一步净化，并使检材中可能存在的各类毒物得以分离。,改良Stas-otto法的流程,检 材 酸化 95%乙醇浸泡 过滤 乙醇浸出液 水浴蒸发 加无水乙醇 过滤 无水乙醇滤液 水浴蒸干 酸性水溶解 酸性水溶液 乙醚萃取 乙醚液 酸性水溶液 1molNaOH反提 NaOH碱化,乙醚萃取 乙醚液 碱水液 乙醚液 碱水液 HCl酸化 5%HCl中和 乙醚萃取 弱碱碱化 有机溶剂萃取 乙醚液 萃取液 中性毒物 酸性毒物 碱性毒物 两性毒物,改良Stas-otto法的优缺点,优点 提取范围宽，适用于系统分离。 对腐败检材的净化度较好。 可直接用于用乙醇浸泡防腐保存的检材。 缺点 操作费时、费工。 溶剂消耗量大。 回收率低，所需检材量大。,液固萃取法（liquid-solid extraction) 固相萃取法,利用药毒物与检材中其它成分在吸附、分配、分子大小以及酸碱性等性质方面的差异，使用经特殊制备的固相材料和溶剂对检材进行处理，使药毒物和杂质分离的方法。 常用柱式，将固相材料填于柱中。 方式 将固相材料悬于检材中。,固相萃取管(Disk),固相萃取过程,选柱 活化 加样 洗脱,固相萃取法分类,方法,反 相 固 相 萃 取 法,正 相 固 相 萃 取 法,离 子 交 换 固 相 萃 取 法,吸 附 固 相 萃 取 法,固相材料分类,亲酯型 亲水型 离子交换型 类型 键合硅胶 交联树脂 分配型 吸附型 阳离子型 阴离子型 氧化硅胶 XAD系列 硅胶 三氧化二铝 -COOH N(CH3)3X 材料 C18 C8 苯乙烯和 硅藻土 硅镁吸附剂 -SO3H -NR2 氰基 氨基 二乙烯苯 活性炭 -PO3H NHR-NH2 聚合物 机理 分配为主 网孔阻碍 分配 吸附 形成离子对 吸附为辅 吸附 吸附 吸附 适用 水性基质 水性基质 水性基质 有机基质 水性或有机基质 憎水性的 极性较大 极性较小 杂质 碱性毒物 酸性毒物 药毒物 的药毒物 的药毒物 应用广 不受pH 回收率较高 净化效果好 特点 具浓缩作用 限制 净化效果较好 回收率高 简便省时 省时 洗脱剂量大 操作麻烦费时 价昂吸附碱性毒 较方便 反相 正相 吸附 离子交换,固相微萃取 ( solid phase miacro extaction,SPME ),原理 将用高分子材料做成的萃取头(或纤维头)直接伸入检样中（浸入 式）或置于检样上方（顶空方式）,保留一段时间,待毒物吸附于其 上后,取出用于GC或HPLC 分析. 过程 吸附药毒物 进样 解吸 特点 简便、快速，集采样、萃取、浓缩、进样为一体。成本较高。,进 样 口,GC 热解吸附,HPLC 溶解洗脱,分离提取净化方法的选择,以下几方面综合考虑: 毒物 a. 分析目的物是否明确？单一毒物还是多种毒物？（溶剂 选择 b. 毒物的性质（溶解度、酸碱性、稳定性等） c. 中毒量大小（取材量、浓缩体积、检测方法） d. 体内代谢情况（是否需水解？是否需检验代谢物？） 检材 a. 毒物含量（取材量、检测方法） b. 毒物的存在状态（分离方法、检测方法） c. 组成(分离净化方法） 检测方法 a. 原理（应除去哪些杂质、溶剂选择） b. 选择性（有无分离能力） c. 灵敏度（取样量、浓缩体积）,安眠镇静药,内容,一般介绍,检材处理,检测方法,结构性质,种类,中毒情况,取材,安眠镇静药一般介绍,常见种类 苯马并二氮杂卓类、吩噻嗪类、巴比妥类、眠尔通 等。 中毒可能性大，种类多，价廉；应用广，易得；城市居多。 中毒原因 自杀（较多） 投毒(他杀、麻醉抢劫、制造假象掩盖死因） 滥用（多属于国际公约二类精神药物管制品种） 意外 中毒方式 口服（多见自杀） 投于饮食中（多见他杀或其它麻醉目的） 注射（多见职业杀人） 中毒症状 症状相似，缺少特征性；病理上无明显特征性改 变。 中毒结果 与用药者的职业、文化程度、目的等有关。 致死 长时间昏迷 嗜睡,安眠镇静药检验的取材,体外检材 * 现场遗留的药物制剂 * 剩余的饮食物（饮料、水果等） * 现场可能装过药物的容器（杯子、注射器、药瓶等） * 胃内容或洗胃液 （一般成分比较简单、含量较高，利于寻找检验方向） 体内检材 * 活体材料（血、尿） * 尸体材料（胃内容、血、肝、脑脊液等） （成分较复杂，含量相对较低。定量结果利于确定死因。,苯骈二氮杂卓类(benzodiazepines) 母体结构,1，4-苯骈二氮杂卓类的母体结构 三唑仑苯骈二氮杂卓类的母体结构,2019/8/26,41,可编辑,常见苯骈二氮杂卓类药物的结构及常见剂型与规格,母体结构与名称 常用别名 取代基 常用剂型与规格 1，4-苯骈二氮杂卓类 地西泮（diazepam） 安定 1-CH3，7-Cl，R1= -H 白色片剂，2.5mg或5mg。 氟西泮（flurazepam） 氟安定 1-CH2CH2N(C2H5)2， 片剂，15mg。 7-Cl，R1= -F 硝西泮（nitrazepam） 硝基安定 7-NO2，R1= -H 白色或微黄色片剂，5mg。 氯硝西泮（clonazepam） 氯硝安定 7-NO2，R1= -Cl 类白色片剂，0.5mg,或2mg。 奥沙西泮(oxazepam) 去甲羟基安定 3-OH，7-Cl， R1= -H 白色片剂，15mg。 氯氮卓（chlordiazepoxide 利眠宁 2-NHCH3，4O,7-Cl， 微黄色片剂，5mg或10mg。 2,3位双键，R1= -H 三唑仑苯骈二氮杂卓类 三唑仑（triazolam） 三唑安定 R2= -CH3，R3= -Cl 浅蓝色片剂，0.25mg。 艾司唑仑（estazolam） 舒乐安定 R2= -H，R3= -H 白色片剂，1mg或2mg。 阿普唑仑（alprazolam） 甲基三唑安定 R2= -CH3，R3= -H 白色片剂，0.4mg。,苯骈二氮杂卓类的性质,多为白色或黄色结晶，无臭，味苦。 弱碱性，可与强酸成盐；奥沙西泮（去甲羟基安定）为两性。 游离化合物的极性差异较大，一般难溶于水，易溶于有机溶剂；氟西泮（氟安定）极性较大可溶于水。 与酸形成的盐可溶于水，略溶于氯仿，不溶于乙醚。 七元环在强酸、强碱中加热，可水解开环。,吩噻嗪类(phenothiazines) 母体结构,以吩噻嗪环为母体结构，又称苯骈噻嗪或硫氮杂蒽。 R1多为碱性侧链； R2多为电负性较大的基团。 泰尔登结构与吩噻嗪的相似，但不含氮原子。,几种常见吩噻嗪类药物的结构及药物性状,吩噻嗪类药物的性质,多为油状液体或低熔点的固体； 碱性较强，可与多种酸成盐；药用制剂多为其盐酸盐； 游离态难溶于水，易溶于有机溶剂；盐可溶于水，也可溶于有机溶剂乙醇、氯仿等； 有荧光； 性质不稳定，遇光、氧化剂等易变色； 药物制剂多为糖衣片或注射液。,巴比妥类结构,母体结构为丙二酰脲； 药用的多在5位碳上有两个取代基，称5，5二取代巴比妥，取代基为氢时，称巴比妥酸； 少数在1位氮上有取代基的称1，5，5三取代巴比妥； 2位碳上的氧被硫取代时，称硫代巴比妥，如硫喷妥。 取代基一般为烷基、不饱和烃基、芳香烃基等。,常见巴比妥类药物取代基和制剂,巴比妥类的性质,除硫喷妥为浅黄、略带蒜臭外，多为白色结晶，无臭、有苦味； 有固定熔点，可升华； 极性中等，易溶于极性有机溶剂，微溶于水，难溶于石油醚； 二酰亚胺互变异构成烯醇式时，具弱酸性，可与氢氧化钠等强碱成盐而熔于碱水液； 内酰亚胺结构不很稳定，在强碱性溶液中长时间放置，可开环，并放出二氧化碳； 导眠能性质与巴比妥类的相似，在强碱液中更不稳定，很快分解。,安眠镇静药的检材处理,体外检材 成分简单，药片、药粉等固体检材一般可直接用乙醇溶解或提取后 检测；注射液、饮料等液体检材，可适当调酸碱性后液液萃取。 体内检材 血和肝匀浆，提取时一般需先经过沉淀蛋白。提取吩噻嗪类药物时，无机酸类沉淀蛋白剂应慎用。 苯骈二氮卓类的用药量较小，体内结合率较高，必要时可先行水解再提取。 用有机溶剂萃取时，应先调节检材的酸碱性，使被提取的药物处于游离状态。苯骈二氮杂卓类弱酸性到弱碱性；吩噻嗪类碱性；巴比妥类酸性。氟西泮游离碱的水溶性较大，不宜用萃取法提取。吩噻嗪类提取时应避光。 有机提取液可通过吸附柱或反提法净化。巴比妥类不宜在碱液中久置。 血尿也可直接用固相萃取小柱提取净化。,安眠镇静药的检测方法,体外检材,预试,化学反应、UV,定性鉴别,TLC、HPLC、GC、GC-MS、IR等,定量,UV、HPLC、GC,体内检材,化学法检识安眠镇静药,方法 微量颜色反应和微量结晶反应 操作 瓷反应板、载玻片或试管 适用 体外检材中安眠镇静药的预试筛选 和检识鉴别,苯马并二氮卓类的化学检识反应,方法 结果 适用 偶氮色素反应 芳伯胺结构亚硝酸盐重氮盐 检识利眠宁、硝基 +盐酸萘基乙二胺紫红偶氮色素 安定、舒乐安定等 碱性萘酚橙红色偶氮色素 地西泮、氟西泮阴性 稳定、灵敏，定量 甘氨酸反应 水解物甘氨酸 茚三酮蓝紫色 鉴别 定量 其他 可与碘-碘化铋钾、甲醛-硫酸、硅钨酸等显色；多数酸性条件 下有荧光,一般用于预试，薄层显色。,吩噻嗪类药物的化学检识,机理：此类药物易被氧化剂氧化成醌类化合物而显色，或与 试剂生成有色络合物。 浓硫酸 硫酸FeCl3 FPN试剂 氯化钯 机理 氧化 氧化 氧化 络合 氯丙嗪 红 红紫（较慢） 红紫 橙红 异丙嗪 红 红紫（较慢） 红紫 紫 奋乃静 红 红紫（较慢） 桃红 橙红 三氟拉嗪 橙 不明显 橙 橙黄 泰尔登 橙黄 不明显 橙 浅黄 特点 易褪色 灵敏度较低 敏度较高、显色稳定 FPN试剂：5%三氯化铁 + 20%高氯酸 +11硝酸（54550）,巴比妥类的化学反应,方 法 结 果 适 用 碱性硝酸钴反应 巴比妥类、导眠能 紫色络合物。 类别预试 纯品结晶 碱水液酸化，放置，析出结晶。 巴比妥长方形片状 检识鉴别 苯巴比妥针状簇晶 I-KI磷酸结晶 巴比妥棕黑色棒状和针状 苯巴比妥深棕黑色细针状簇晶 巴比妥类的检识和鉴别 异戊巴比妥棕黄色片状 戊巴比妥黑色花束状 司可巴比妥无 铜盐-吡啶反应 巴比妥淡紫色小十字结晶 苯巴比妥淡紫色不规则小结晶 巴比妥的检识 硫喷妥绿色 氨性硝酸银结晶反应 巴比妥 透明卵形小结晶 巴比妥的确证 汞盐二苯卡巴腙 巴比妥类及导眠能汞盐白色 可用于TLC显色 二苯卡巴腙 紫堇色 或比色测定 异羟月亏酸铁反应 导眠能羟胺铁离子紫色 酰亚胺或酯类,巴比妥和苯巴比妥的结晶,紫外分光光度法,除眠尔通外，绝大部分的安眠镇静药都有明显的紫外吸收光谱,对一些成分简单的体外检材,如药片、注射液、剩余饮食物或胃内容物和洗胃液中的药物残渣，经简单处理后即可用紫外光谱预试或筛选。 三类安眠镇静药的紫外光谱完全不同，可用于鉴别。 在定性的基础上，常用于定量。 常用于HPLC方法的检测。,苯马并二氮卓类的紫外光谱,因取代基不同，光谱相同者甚少，不宜用做一类药物的预试筛选，但可用于本类药物的鉴别。,吩噻嗪类药物的吸收, 此类药物吸收光谱相似，一般在250 260、300310nm范围有两个吸收带，可用于预试，但不能鉴别。 因易氧化分解，分解产物氧化亚砜有四个吸收砜，且吸收较原药长移；所测的光谱常因混合物的比例不定，难有固定光谱，不易对照； 为使光谱相对固定，便于对照，可将样液先用硫酸氧化或用锌还原后再进行检测。,巴比妥类的紫外光谱,因解离情况不同，光谱随样品溶液的pH而变。 5,5二取代巴比妥的解离如下：,巴比妥类和导眠能的吸收波长,nm 酸性 弱碱性 强碱性 pH2 pH910 pH1314 5,5-二取代巴比妥 211 240 255 1, 5,5-三取代巴比妥 222 244 244 硫喷妥 238，287 304 304 导眠能 251.5 257.5 263.5(醇） 235（强，很快消失）,适用性,5，5二取代巴比妥类药物结构相似，在同一酸碱性条件下，光谱相似，不能鉴别，但可用于预试和筛选。 1， 5，5三取代巴比妥类药物，因1位被占，不存在二级解离，故样品在pH10和pH14的条件下，紫外光谱基本不变，可与5，5二取代巴比妥类药物区别。 导眠能光谱与巴比妥类的完全不同，可以资区别。,红外光谱法的应用,可反映物质结构的细微差别,可鉴别结构非常相似的化合物, 如戊巴比妥和异戊巴比妥，后者因取代基末端有同碳二甲基 ，使C- H弯曲振动的吸收峰1370cm-1分裂成1355cm-1和1378cm1两个峰。 因受样品纯度和样品量的限制,红外在毒物分析中直接应用的机会较少,仅用于一些含量和纯度都较高的体外检材.,荧光分光度法的应用,吩噻嗪类有较强的荧光，苯马并二氮卓类加稀硫酸也可产生荧光。 可用于预试、薄层显色、高效液相色谱检测等。 因吩噻嗪类分解产物较复杂，不宜直接用光谱定性，如需定量可先加过氧化氢氧化，而后测定氧化产物的荧光。,药物 荧光颜色 盐酸氯丙嗪 黄绿色 盐酸异丙嗪 蓝色 奋乃静 黄绿色 三氟拉嗪 黄色 泰尔登 蓝色,薄层色谱法的特点和适用性,特点 简单、快速、成本低 分离度和检测灵敏度有限 适用 体外检材成分较简单简单且含量较高，经提取净化、浓缩后，一般都可用此法检验。 因此类毒物毒性较小，中毒死亡往往需要较大量，故有时体内检材也可用此法检出。,薄层色譜法检验苯马并二氮卓类,吸附剂 硅胶G 展开剂 苯:丙酮: 28氨水（50 : 10 : 5） 丙酮: 28氨水（99 : 1） 叔丁醇: 1mol/L氨水（27 : 3）需 氯仿:乙醇:丙酮（8 : 1 : 1） 显色剂 碘化铋钾（橙色）；50% 硫酸和乙醇混合液（荧光） 说明 此类药物为弱碱性，一般碱性展开剂的效果较好。 此类药物较多，单一条件很难将所有药物完全分开，需通过不同的条件分离。,薄层色谱法检验吩噻嗪类,吸附剂和展开剂 硅胶板 a.甲醇:水（7 : 3） b.环己烷:二乙胺（9 :1） c.苯:环己烷:二乙胺（15 :75 : 20） 碱性板 a.甲醇:氯仿（1 : 9） b.甲醇:浓氨水（100 : 1.5） 显色剂 荧光、硫酸、氯化钯试剂 说明 碱性较强，常因硅胶吸附而使斑点拖尾，可通过铺碱性硅胶板或于展开剂加入适量碱来改善分离效果 。 在展开剂中加入适量碱，可拉开几种药物斑点的Rf值的距离。 此类药物易氧化分解，常出现多个斑点，不宜对照，可先将样品在原点氧化或分解后再行展开；,吩噻嗪类药物薄层的Rf值,吩噻嗪类药物薄层斑点显色,薄层色谱法检验巴比妥类,展开剂 氯仿:丙酮（41） 乙酸乙酯:甲醇:浓氨水（80 :10 :5） 异丙醇:氯仿:浓氨水（9 :9 :2） 显色剂 硫酸汞-0.2%二苯卡巴腙醇液, 白色紫堇色; N，2，6-三氯对苯醌亚胺（ NCBI） ，蓝色； 高锰酸钾，司可巴比妥褪色。 说明 硫喷妥易分解成戊巴比妥，故常显两个斑点。,气相色谱法检验安眠镇静药,特点 灵敏度高、分离能力强。 要求被分析物易挥发、对热稳定。 适用 体内、成分复杂、含量低的检材。 苯马并二氮卓类 部分适用。有些热稳定性差或极性太大的效果不好，如去甲羟基安定。多数易被固定相吸附而造成拖尾或难出峰，宜选OV-1、DB-!等弱极性固定液 吩噻嗪类 受热易分解，效果不好。 巴比妥类 一般选用中等极性柱，如OV-17；FID检测器。 极性较大，普通条件下峰形不佳，可通过甲基衍生化可改善峰形，并提高检测灵敏度和准确性。,GC法检测苯马并二氮卓类药毒物实例,取1mL血液检材，加入50L内标液，1mL饱和NaHCO3溶液，混合均匀，然后加入0.5gNaCl，混合后加入3mL甲苯，在振荡器上混合15min，离心分层，分出有机层并在氮气流下吹干，残渣加50L甲苯溶解，取2L进样。色谱条件为：DB-1毛细管柱（15m 0.53mm i.d.，膜厚1.5m），ECD检测器，初始柱温为150（1min），经程序升温（16/min）至300（10min），进样口280，检测器300，载气为氦气（1mL/min）。几种药物在此色谱条件下的保留时间见表5-3。 表5-3 几种常见苯骈二氮杂类药物的GC保留时间 名称 保留时间(min) 名称 保留时间(min) 氯硝西泮 10.45 地西泮 8.60 艾司唑仑 10.50 硝西泮 10.00 三唑仑 11.30 氟西泮 10.10,高效液相色谱法检验安眠镇静药,特点 灵敏度较高、分离能力强。 应用 体内检材、样品有紫外吸收的。 三类药物均可适用，特别对热稳定性差或极性大的，效果较GC 好。 一般采用C18反相液相色谱法；紫外或荧光检测。 三类药物均具有酸碱性，常通过在流动相中加入适量酸抑制解离或形成离子对可改善分离效果。,HPLC法检测苯骈二氮卓类药物实例,取2mL血液或血清检材，加入20L内标溶液及2mL丙酮，充分搅拌混合后离心分离，取上清液在减压下挥干溶剂，残渣用0.2mol/L硼酸缓冲溶液（pH9）溶解，将溶解液通过C18固相萃取柱，先用1mL水冲洗，再用1mL 15%甲醇水溶液冲洗，然后用甲醇将药物洗脱，洗脱液50下在氮气流中吹干，残渣用20L甲醇溶解，取10L进样分析。色谱条件：色